一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒及其檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒及其檢測方法，該試劑盒包括超純水、X溶液、10×PCR緩沖液，PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，特點是PCR引物包括CYP2C19基因上的3個SNP位點上的不同基因型的正反向擴增引物、DNA內參的正反向擴增引物及反應內參的正反向擴增引物，其基因序列如SEQ?IDNO.1～NO.13所示，其檢測包括采集樣本并提取核酸的步驟；以患者核酸為模板進行PCR反應的步驟；最后GeXP遺傳分析儀毛細電泳分離樣品的步驟，優點是特異性強、靈敏度高、通量高、可靠性強、成本低、無假陰性結果。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及多重基因檢測試劑盒及其檢測方法，尤其是涉及一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒及其檢測方法。
技術介紹
細胞色素P450 (CYP)酶系在藥物代謝中占有極其重要地位。CYP2C19 (S-美芬妥英羥化酶)是CYP酶系中占主導地位的酶之一，其遺傳多態性影響著許多臨床藥物的代謝，其活性存在明顯的個體差異，對不同個體的藥物治療作用和不良反應及藥物的毒性產生重要影響。FDA已將17種藥物列入醫生需要參考病人的CYP2C19的基因多態性信息用藥。臨床上CYP2C19基因多態性檢測可以為個體化用藥提供依據。目前，國內外已有多個CYP2C19基因型檢測試劑盒，其主導方法為DNA微陣列芯片法?；蛐酒峭ㄟ^微加工技術，將數以萬計、乃至百萬計的特定序列的DNA片段(基因探針)，有規律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，構成的一個二維DNA探針陣列，利用這類芯片與標記的生物樣品進行雜交，可對樣品的基因表達譜生物信息進行快速定性和定量分析。DNA芯片:由于高通量等優點在SNP檢測中得到大量應用，依靠野生型與突變型基因雜交動力學的差異對突變位點進行檢測。其優點是I)高通量并行檢測；2)操作簡便快速:整個檢測只需4-8小時基本可以出結果。但也存在如下缺點:1)不同SNP位點之間的雜交動力學差異不同，在進行多位點同時檢測時條件難以控制；2)技術成本昂貴、復雜:每個樣品需要一個芯片，成本大于Y1000/樣品，不利于大規模推廣；探針的合成與固定比較復雜，特別是制作高密度的探針陣列，是主要的限速步驟；3)重復性差，準確性低，易出現假陽性、假陰性結果；4)靈敏度較低:芯片法需核酸量較大，一般須先做多重PCR擴增，由于引物較多，容易自身產生二聚體，發夾結構，或由于Tm值不同，而導致擴增目的片段效率不同，進而影響檢測的靈敏度；5)由于芯片的種類較多，難以制定一個統一的質量控制標準。Gen0meLabTMGeXP多重基因表達遺傳分析系統基于貝克曼公司成熟的毛細管電泳分離技術及高靈敏度的激光誘導熒光技術研發而成，一束8道的毛細管陳列設計充分利用了 96孔板的排列特性，降低了使用更大的陳列帶來的花費和復雜性。采用多重PCR方法，通過Beckman Coulter染色標記,在同一個EP管中同時分析多個基因的的等位基因型,能快速有效地檢測基因的表達狀況，克服了上述方法存在的缺陷，具有以下優點:1、高通量:本系統采用雙(96孔)板、自動加樣和樣品追蹤技術，實現單個反應檢測30-40個位點，可同時做192個反應(如192個患者樣品，每個樣品檢測30種腹瀉病毒，30個位點)，一天出結果；對于交叉感染患者，本方法可一次性給出準確報告，避免漏檢。2、準確性強=GeXP系統采用毛細管電泳對PCR產物進行分離檢測，可將非特異性擴增產物、引物二聚體和特異性擴增產物分離，最大程度降低假陽性；3、敏感性高，結果重復性好:GeXP系統克服了傳統PCR擴增方法的不均等擴增造成的偏差，提高了對一套目 的基因進行定量的速度和敏感性，采用激光誘導熒光-PMT，具有超聞靈敏度；4、方法簡便，使用經濟=GeXP提供從試劑、多重PCR引物設計、結果及定量表達譜分析等全套實驗方案；每個樣品的檢測成本少于￥50，利于大規模推廣；5、精確定量、靈活性強:可精確定量病原體基因拷貝數，可隨時根據需求調整檢測的靶基因。6、易于實現自動化:就樣品制備而言，Biomek系列自動液體處理儀可以與GeXP分析儀和Ampligrid擴增儀完全匹配，集成的條形碼閱讀器保證了準確的樣品追蹤和結果報目前，國內外還沒有關于基于GeXP多重基因表達遺傳分析系統的CYP2C19基因多態性檢測試劑盒及其檢測方法的相關研究報道。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種特異性強、靈敏度高、通量高、可靠性強、成本低、無假陰性結果的基于GeXP多重基因表達遺傳分析系統的CYP2C19基因多態性檢測試劑盒及其檢測方法。本專利技術解決上述技術問題所采用的技術方案為:一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒，包括超純水、X溶液、10XPCR緩沖液，PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下CYP2C19基因上的3個SNP位點上的不同基因型的正反向擴增引物、DNA內參的正反向擴增引物及反應內參的正反向擴增引物，其基因序列如下表I所示:表I本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒，包括超純水、X溶液、10×PCR緩沖液，PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下CYP2C19基因上的3個SNP位點上的不同基因型的正反向擴增引物、DNA內參的正反向擴增引物及反應內參的正反向擴增引物，其基因序列如下表所示：其中，2*G/2*A表示該2號SNP位點有兩種可能基因型G或A，兩條反向引物分別指檢測該SNP位點相應基因型G或基因型A的引物，在檢測該SNP位點時兩條引物要同時加到反應液中，3*G/3*A表示該3號SNP位點有兩種可能基因型G或A；17*C/17*T表示該17號SNP位點有兩種可能基因型C或T。

【技術特征摘要】
1.一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒，包括超純水、X溶液、IOXPCR緩沖液，PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下CYP2C19基因上的3個SNP位點上的不同基因型的正反向擴增引物、DNA內參的正反向擴增引物及反應內參的正反向擴增引物，其基因序列如下表所示:2.根據權利要求1所述的一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒，其特征在于:包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向擴增弓I物序列為AGGTGACACTATAGAATA ；反向擴增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向擴增弓I物帶熒光標記。3.根據權利要求1所述的一種CYP2C19基因多態性檢測試劑盒，其特征在于:所述的陽性對照品為克隆到載體PMD18-T上的7個DNA片段和I個質粒pcDNA3.1 (+)，所述的7個DNA片段分別為包含有SNP位點上rs4244285的G型基因和A型基因、rs4986893的G型基因和A型基因、rsl2248560的C型基因和T型基因及人類基因beta-globin的片段。4.一種利用權利要求1-3中任一項所述的CYP2C19基因多態性檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟: (1)DNA樣品的收集和提取 將刮取到口腔上皮細胞的口腔拭子放入300y L DNA裂解緩沖液中，在恒溫混勻儀中于95° C，IOOOrpm的條件下，處理5分鐘后取出，室溫放置至冷卻，然后在樣品中加入...

【專利技術屬性】
技術研發人員：南麗，孫婷婷，吳勇，
申請(專利權)人：海爾施生物醫藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：