本發明專利技術提供了一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，該分子標志物為STIP（又名TFIP11），位于人類染色體22q12.1，是一種具有G-patch結構域，卷曲螺旋和幾個短的色氨酸-色氨酸重復序列，本發明專利技術是針對淋巴細胞白血病的發生機制非常復雜，涉及多個癌基因的激活和抑癌基因的失活，而目前，已知的與上述疾病診斷和治療相關的分子較少的現狀，提供一種作為淋巴細胞白血病的診斷的分子標志物STIP的應用方法，該分子的發現將推動淋巴細胞白血病的診斷和治療。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫學與臨床醫學
，涉及一個與淋巴細胞白血病發生、診斷和治療相關的分子的應用方法。
技術介紹
STIP (septin and tuftelin interacting proteins),又名 TFIPll(Tufte I in-1nteracting Proteinll),位于人類染色體 22ql2.1,是一種具有 G-patch 結構域，卷曲螺旋和幾個短的色氨酸-色氨酸重復序列，該蛋白的基因序列在Genebank中的登錄號為NM—01121143 (Tvll) \NM—0011008697 (IV2)，在多細胞動物中高度保守的核磷酸化蛋白，與剪接體相關。STIP位于小鼠牙齒成釉細胞(8111160131&^8)的頂尖分泌池，在HEK293細胞中發現其定位于靠近SC35核斑點的亞核結構。STIP為線蟲的胚胎發育所必需分子。STIP在惡性血液腫瘤中的作用國內外尚未見報道。我們首次研究發現，STIP的mRNA和蛋白質水平在淋巴細 胞白血病細胞株和患者中高表達。在B淋巴細胞白血病ARH-77中STIP主要定位在細胞核中。在B淋巴細胞白血病ARH-77細胞中采用siRNA下調STIP表達后可抑制ARH-77細胞增殖，增加ARH-77細胞的死亡率，減少ARH-77細胞的惡性增殖潛能，阻滯細胞周期在S期。Western blot檢測發現下調STIP的表達后，pERKl/2活性顯著降低，P21的表達下調。基于以上研究成果，表明STIP與淋巴細胞白血病的發生和惡性增殖密切相關，STIP是一個可用于淋巴細胞白血病診斷和治療的新分子。專利技術內容本專利技術的目的是針對淋巴細胞白血病的發生機制非常復雜，涉及多個癌基因的激活和抑癌基因的失活；且目前，已發現的與這些疾病發病相關的分子較少的現狀，提供一種作為淋巴細胞白血病診斷的分子標志物STIP的應用方法，該分子的發現將進一步推動惡性血液腫瘤的診斷和治療。，該分子標志物用于制備診斷淋巴細胞白血病的制劑，所述的分子標志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1 ;基因轉錄本序列為 SEQ ID N0.2 或 3。所述的診斷淋巴細胞白血病的制劑包括PCR、Real Time RT-PCR或者Westernblot檢測試劑。所述的PCR或Real Time RT-PCR試劑包括:STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA ；STIP 負向引物 GGCTTCTTCCTTGGTCTG。本專利技術的主要優點和有益效果:STIP的表達在淋巴細胞白血病中明顯增高，表明STIP與淋巴細胞白血病發生密切相關，有望成為新的淋巴細胞白血病診斷分子標志物，在淋巴細胞白血病ARH-77細胞中，干擾STIP表達可抑制腫瘤增殖，增加細胞死亡率，顯著降低腫瘤細胞的惡性增殖潛能，阻滯細胞周期于S期，表明STIP是一個淋巴細胞白血病治療的潛在新靶標。該專利技術對研究白血病的發生、診斷和治療具有重大意義。附圖說明圖1為采用Real time RT-PCR方法檢測淋巴細胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個核細胞中STIP的表達情況；圖2為采用Western blot方法檢測不同白血病細胞株及其正常人永生化的B淋巴細胞中STIP蛋白的表達情況；圖3為采用Western blot檢測淋巴細胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個核細胞中STIP蛋白的表達情況；圖4為采用細胞免疫熒光染色(紅色為STIP，藍色顯示細胞核)和Western Blot分析STIP在ARH77細胞中的定位和表達；圖5為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP蛋白的表達；圖6為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP表達后細胞死亡率(FL2-M1百分率)明顯增加的圖片(三次獨立實驗的代表性結果)；圖7為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP的表達后細胞增殖速率明顯減慢(a)及細胞惡性增殖能力明顯減弱的圖片(b)；圖8為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP表達后，S期細胞的百分比例明顯上升，表明STIP低表達后，影響細胞周期的運行，使細胞周期阻滯在S期的圖片(三次獨立實驗的代表性結果);圖9為siRNA干擾ARH77細胞中STIP的表達后p-ERKl/2的活性降低，p21表達減少的圖片。具體實施例方式以下結合實施例旨在進一步說明本專利技術，而非限制本專利技術。實施例1收集臨床血液系統疾病患者骨髓標本，用淋巴細胞分離液分離出單個核細胞，提取mRNA，逆轉錄成cDNA，采用PCR或Real Time RT-PCR方法檢測淋巴細胞樣品和單純性貧血骨髓樣品中STIP的mRNA表達，以GAPDH作為內對照，數據經2- Δ Ct進行換算后做圖(ACt=Ct (STIP)-Ct (GAPDH))ο采用合成的STIP和GAPDH引物序列(見表I )，并按照相應的反應體系(見表2)和反應條件(見表3)進行PCR或Real-time PCR，檢測淋巴細胞白血病患者和對照樣本的STIP基因表達情況。表1、STIP和GAPDH弓丨物序列本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，該分子標志物用于制備診斷淋巴細胞白血病的制劑，所述的分子標志物為STIP，氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1。
【技術特征摘要】
1.一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，該分子標志物用于制備診斷淋巴細胞白血病的制劑，所述的分子標志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1。2.根據權利要求1所述的淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，所述的分子標志物為STIP，基因轉錄本序列為SEQ ID N0.2或3。3.根據權利要求1所述的淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉靜，葉茂，方琳，陳慧勇，王梓，
申請(專利權)人：中南大學，
類型：發明
國別省市：
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