本發明專利技術涉及生物技術領域，具體涉及一種前列腺癌生物標志物miR-21*、診斷試劑盒及應用，所述的miR-21*為一種miRNA；應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒，其特征在于，包括：血清總RNA提取試劑、RNA加polyA試劑、RT-PCR試劑、定量PCR試劑，所述的定量PCR試劑包括miR-21*的特異性正向引物。本發明專利技術為前列腺癌的診斷提供了一種新的分子標志物miR-21*，并將該分子標志物應用于制備診斷前列腺癌的診斷試劑盒中，操作簡單、取材方便、安全無創傷，且具有高特異性、高靈敏性和易于大量篩查的特點，該分子標志物特別適合應用于前列腺癌高危人群的篩選、前列腺癌的鑒定、前列腺癌治療狀況的監測、前列腺癌指導用藥的監測、和前列腺癌預后監測等領域用試劑中。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及前列腺癌生物標志領域，具體涉及一種前列腺癌生物標志物miR-21*、診斷試劑盒及其應用，尤其涉及前列腺癌分子標志物miR-21*在前列腺癌高危人群的篩選、前列腺癌的鑒定、前列腺癌治療狀況的監測、前列腺癌指導用藥的監測、和前列腺癌預后監測等領域用試劑中的應用。
技術介紹
MicroRNA (miRNA)是一類由內源基因編碼的長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈微小RNA分子，其在細胞內具有多種重要的調節作用。每個miRNA可以有多個靶基因，而幾個miRNA也可以調節同一個基因。這種復雜的調節網絡既可以通過一個miRNA來調控多個基因的表達，也可以通過幾個miRNA的組合來精細調控某個基因的表達。據推測，miRNA調節著人類三分之一的基因。MicroRNA因其高度的保守性、時空特異性、穩定性以及組織特異性等特點使其優于蛋白質、DNA片段等其他生物標志物而在疾病發病機制研究、早期診斷、個體化治療和預后等方面發揮越來越重要的作用。前列腺癌患者主要是老年男性，一般在50歲以后發病，95%發生于60歲以上的老年男性，發生率持續地隨年齡增長而增加。在美國，前列腺癌的發病率已經超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤。中國等亞洲前列腺癌的發病率遠遠低于歐美國家，但近年來呈現上升趨勢。前列腺癌早期多無任何癥狀，即使有所不適，也不足以引起病人的重視。當腫瘤增大壓迫尿道時，又往往與前列腺增生相混淆。在我國約80%的病人首先發現遠處轉移病灶，然后才發現前列腺癌。此時，病變已屬晚期，預后不良。目前，前列腺癌的臨床診斷方式主要有以下幾種:直腸指檢、血清前列腺特異性抗原(PSA)檢測、直腸超聲波檢測、活組織病理檢查等。直腸指檢是最簡單、最經濟實用的方法，主要是通過醫生的食指 觸摸前列腺，用以發現很多無癥狀的前列腺癌患者，有可能獲得早期診斷及根治的機會。但上述方法均存在一定的局限性。如直腸指檢的局限性是:(1)當患者的前列腺腫塊不大時，容易漏診；(2)有的患者前列腺癌腫大不明顯，但已屬晚期，不易根治；(3)對患者有一定的不適和危害，當患者直腸有疾患時不能使用此檢測；(4)當醫生經驗不足時有漏診或誤診可能。正常情況下血液中的PSA不高(不高于4ng/ml)，當處于前列腺癌及其他前列腺疾病患病狀態時PSA升高，成為目前篩查前列腺癌最敏感的瘤標，但其也存在一定局限性:(1)需要取血檢測，對患者有一定的損傷；(2)PSA增高也常見于非前列腺癌疾病，如前列腺炎癥、前列腺肥大等，因此不易確診；(3) PSA增高確診前列腺癌時，往往患者已屬中、后期，達不到早期診斷的目的。前列腺超聲波檢測操作簡便直觀、無損傷，通過顯示腫塊的大小、數目、位置、密度、邊緣、形態、有無鈣化以及鈣化的形態、大小、數目、分步以及周圍的暈環、皮膚改變等提供定位及定性征象并判斷病變的性質:其局限性是:(1)對致密性的小癌灶容易漏診；(2)有時不能提供明確的定性診斷；(3)因其不能顯示腫瘤的內部結構及周圍組織所以診斷符合率很低；(4)對一些缺乏典型征象的實性良惡性腫塊有較高的誤診率。活組織病理檢查因其創傷性、復雜性不能作為初篩的手段，但它是前列腺癌確診的金標準，一般與其他方法技術連用。近年來的研究表明，前列腺癌和miRNA密切相關，它們可能參與腫瘤的發生、發展和轉移，所以對腫瘤的發病機制、早期診斷、個體化治療、轉移的檢測和預后等可能有相應的作用。與前列腺癌相關的miRNA種類較多且作用不一，已有研究表明在前列腺癌患者中上調的 miRNA 包括 miR-375，miR_148a，miR-200c, miR-106a, mir-128, miR_21*8, miR_20a，和 miR-30b 等；下調的 miRNA 包括 miR-143, miR-145, miR-199a_5p，miR-223, miR_27a，miR-152和miR-424等。雖然已在該領域進行了一些研究，但現有的miRNA標志物的準確性、靈敏性方面均有不足，在臨床和研究中仍然存在尋找更加準確和靈敏的前列腺癌miRNA標志物的需求。在研究過程中專利技術人發現，miR-21*在前列腺癌患者血清中的含量比正常人血清中的含量高，而當前列腺癌患者在接收手術后，其血清中的miR-21*的含量就回落到與正常人血清中的含量一樣的正常水平。由此可見，患者在患病期間增加的miR-21*與前列腺癌的腫瘤存在著密切的相關性。在上述發現的基礎上，本專利技術提供了一種前列腺癌分子標志物，以及該分子標志物在制備診斷前列腺癌試劑中的應用。
技術實現思路
為了克服上述現有技術中存在的不足，本專利技術提供了準確性和靈敏性更高的前列腺癌生物標志物miR-21*、診斷試劑盒及該生物標志物在前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測中的 應用。該前列腺癌的分子標志物為miR-21*，其核苷酸序列為5， -GCAACAGCAGTCGATGGG-3’ (SEQ ID NO:1)。本專利技術為了解決其技術問題所采用的技術方案是:一種前列腺癌生物標志物miR-21*，其特征在于，所述的miR-21*為一種miRNA，miR-21* 的核苷酸序列為:SEQ ID N0.15’ -GCAACAGCAGTCGATGGG-3’。前述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用。前述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用，其特征在于:通過檢測被試者血清中miR-21*的含量，并與正常水平miR-21*含量相比較以進行前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測。前述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用，其特征在于:所述被試者血清中miR-21*的含量通過總RNA提取、加polyA尾、RT-PCR、定量PCR進行檢測。應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒，其特征在于，包括:血清總RNA提取試劑、RNA加polyA試劑、RT-PCR試劑、定量PCR試劑，所述的定量PCR試劑包括miR-126-5P的特異性正向引物。前述的診斷試劑盒，所述的特異性正向引物的序列為:SEQ ID N0.75’-UUGAGCAACGCGAACAAAUCA-3，。前述的應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒,所述診斷試劑盒中血清總RNA提取試劑中包括核苷酸序列為SEQ ID N0.2的外源對照_1，為5’ -CAACCTCCTAGAAAGA-3，。前述的應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒，所述診斷試劑盒中RNA加polyA試劑中包括核苷酸序列為SEQ ID N0.3的外源對照-2，為5， -TGAGCAACGCGAACAA-3，。前述的應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒,所述診斷試劑盒中RT-PCR 試劑中包括序列為 SEQ ID N0.4 的 RT-引物，序列為 5’-CAGTGGTATCAACGCACTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN_3,其中 V 為 A、C 和 G 中的任一種，N 為 A、T、C 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種前列腺癌生物標志物miR?21*，其特征在于，所述的miR?21*為一種miRNA，miR?21*的核苷酸序列為：SEQ?ID?NO.1??5’??GCAACAGCAGTCGATGGG??3’。
【技術特征摘要】
1.一種前列腺癌生物標志物miR-21*，其特征在于，所述的miR-21*為一種miRNA，miR-21* 的核苷酸序列為:SEQ ID N0.1 5’ - GCAACAGCAGTCGATGGG -3’。2.權利要求1所述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用。3.根據權利要求2所述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用，其特征在于:通過檢測被試者血清中miR-21*的含量，并與正常水平miR-21*含量相比較以進行前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測。4.根據權利要求3所述的前列腺癌生物標志物miR-21*在制備前列腺癌高危人群篩選、診斷、治療狀況監測、預后監測的試劑盒中的應用，其特征在于:所述被試者血清中miR-21*的含量通過總RNA提取、加polyA尾、RT-PCR、定量PCR進行檢測。5.應用前列腺癌生物標志物miR-21*的診斷試劑盒，其特征在于，包括:血清總RNA提取試劑、RNA加Po I yA試劑、RT-PCR試劑、定量PCR試劑，所述的定量PCR試劑包括miR-126-5P的特...
【專利技術屬性】
技術研發人員：范盤生，夏東元，浦金賢，
申請(專利權)人：百瑞德南京生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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