本發(fā)明專利技術(shù)公開了用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組，至少包括ALK-1基因第1到第10外顯子區(qū)，3’UTR和啟動(dòng)子中任一區(qū)域?qū)?yīng)的PCR擴(kuò)增引物組和PCR測(cè)序引物組。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了所述引物組的用途、包含所述引物組的試劑盒以及使用所述引物組對(duì)ALK-1基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增方法。所述的引物組可以專一性鑒別ALK-1基因是否突變，確保了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和唯一性。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及引物，具體涉及用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組，本專利技術(shù)還涉及該引物組的用途，以及包含該引物組的試劑盒。
技術(shù)介紹
活化素受體激酶I (activin receptor type I1-like kinase-l, ALK-1 也稱為ACVRL1)位于12qll_ql4，含10個(gè)外顯子，基因組全長(zhǎng)約15kb+。它突變能引起遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥(hereditary hemorrhagic telangiectasia HHT)或遺傳性肺動(dòng)脈高壓(heritable pulmonary arterial hypertension PAH)。有些突變攜帶者同時(shí)具有兩種病癥。HHT是一種常染色體顯性遺傳性出血性疾病，以皮膚黏膜多發(fā)性毛細(xì)血管擴(kuò)張伴反復(fù)出血為特征，臨床上一般可分為I型HHT和II型HHT兩種表型。其中II型HHT由ALK-1基因 突變引起，HHT-1I最常見的臨床表現(xiàn)為反復(fù)的自發(fā)性出血或輕度創(chuàng)傷出血，以鼻出血最常見，而臨床處理卻非常棘手。肺動(dòng)脈高壓是各種原因引起的靜息狀態(tài)下右心導(dǎo)管測(cè)得的肺動(dòng)脈平均壓(meanpulmonary arterial pressure, mPAP) ^ 25mmHg的一組臨床病理生理綜合征。肺動(dòng)脈高壓可以作為一種疾病而獨(dú)立存在，更常見的是很多疾病進(jìn)展到一定階段的病理生理表現(xiàn)。由于肺血管重塑引起肺循環(huán)血流動(dòng)力學(xué)改變，最終可導(dǎo)致右心衰竭，甚至死亡。這是一種極度惡性的疾病，七成多患者是年輕人，幾乎每個(gè)人都知道癌癥預(yù)后差，但沒有人知道肺動(dòng)脈高壓室一種極度惡性疾病，它的病因復(fù)雜、發(fā)病率高、誤診率高、危害性強(qiáng)，其愈后是災(zāi)難性的，可以說，這種病就是心血管疾病中的癌癥。這種疾病平均發(fā)病年齡是36歲，75%患者集中于20-40歲年齡段，還有15%患者年齡在20歲以下，幾歲的孩子也會(huì)發(fā)病。世界上該病的發(fā)病率在I X 1(Γ5 I X ΙΟ—6之間，其中約6%為家族性的。目前，ALKl基因突變的肺動(dòng)脈高壓患者患病年齡比骨形成蛋白2 (BMPR2)基因突變的患者更加年輕化，一旦發(fā)病進(jìn)展更加迅速，更加兇險(xiǎn)。因此采用DNA檢測(cè)尋找ALK-1基因突變有助于查清病因，識(shí)別家系中高風(fēng)險(xiǎn)的成員，以及未出生孩子的患病風(fēng)險(xiǎn)，這對(duì)提高人口素質(zhì)，優(yōu)生優(yōu)育有重要的意義。對(duì)臨床上指導(dǎo)用藥，尋找病因，基因評(píng)估等具有重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一是提供一種用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組。ALK-1基因的第I到第10外顯子區(qū)，3’ UTR和啟動(dòng)子中的任意一個(gè)區(qū)域在結(jié)構(gòu)上發(fā)生堿基對(duì)組成或排列順序的改變，都視為ALK-1基因發(fā)生了突變。因而，根據(jù)ALK-1基因第I到第10外顯子區(qū)，3’UTR和啟動(dòng)子序列分別設(shè)計(jì)出能專一性鑒別ALK-1基因是否突變的特異性引物組。可通過PCR擴(kuò)增和測(cè)序測(cè)定ALK-1基因上述區(qū)域是否發(fā)生改變，以鑒定ALK-1基因是否發(fā)生突變。因此，本專利技術(shù)的用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組可以是ALK-1基因第I到第10外顯子區(qū)、3’ UTR和啟動(dòng)子中任一區(qū)域?qū)?yīng)的引物組。本專利技術(shù)第一個(gè)目的提供的用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組，包括ALK-1基因第I到第10外顯子區(qū)，3’UTR和啟動(dòng)子中任一區(qū)域?qū)?yīng)的PCR擴(kuò)增引物組，即選自ALK-1基因第I到第10外顯子區(qū)、3’ UTR和啟動(dòng)子分別對(duì)應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物組，具體地，所述引物組選自ALK-1基因的第I外顯子區(qū)(Exonl)的PCR擴(kuò)增引物組、第2外顯子區(qū)(Exon2)的PCR擴(kuò)增引物組、第3外顯子區(qū)(Exon3)的PCR擴(kuò)增引物組、第4外顯子區(qū)(Exon4)的PCR擴(kuò)增引物組、第5外顯子區(qū)(Εχοηδ)的PCR擴(kuò)增引物組、第6外顯子區(qū)(Εχοη6)的PCR擴(kuò)增引物組、第7外顯子區(qū)(Εχοη7)的PCR擴(kuò)增引物組、第8外顯子區(qū)(ExonS)的PCR擴(kuò)增引物組、第9外顯子區(qū)(Εχοη9)的PCR擴(kuò)增引物組、第10外顯子區(qū)(ExonlO)的PCR擴(kuò)增引物組、3’ UTR的PCR擴(kuò)增弓丨物組和啟動(dòng)子的PCR擴(kuò) 增弓丨物組中的任意一組，所述的上述各PCR擴(kuò)增弓丨物組為表I所示。表1:ALK_1基因PCR擴(kuò)增引物序列AT T, I ~引物~~ΓΓ門擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度ALK-1 _Γ1序列(5’—3’))予列表編14、 j予可(bp) PFI GCATCATTTCCGTCTATTCTCA SEQ ID NO.1,1---589 Ii im J■ PRTCTCCCGATCCGCACTCSEQ1DN0.2 (promcLci t PF2 ATACCCCTGTGCTGAGTGCSEQ IDN0.3 ----- 708 __PR2 AAATGTTTCTTATTCCAGCGTC SEQ ID N0.4__PF.3 GCTGGGCAATAGGAAACGSEQ 丨D NO.5Exonl---—-—- 71 b PR3 GGACTGATCTGGGAAAGGTG SEQ ID N0.6 PF4 TCATGGCTCTTACTCCACCTC SEQ ID N0.7 Exon^605 ^ PR4 TCATGGCTCTTACTCCACCTC SEQ ID N0.8 PF5 GAGGGACAGTAGGACAGAAATG SEQ ID N0.9Exon3---τ-7——— 569PR5 GCTGCTCCGAAGGAGGTTSEQ ID NO.1OExon4 PF6~ GCAGGACTCTGGGATCTAAC'T — SEQIDNOil60權(quán)利要求1.用于檢測(cè)ALK-1基因突變的引物組，其特征在于，包括ALK-1基因的第I到第10外顯子區(qū)，3’ UTR和啟動(dòng)子中任一區(qū)域?qū)?yīng)的PCR擴(kuò)增引物組，所述的PCR擴(kuò)增引物組包括所述啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物PFl 和具有SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列的引物PRl的引物組、具有SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列的引物PF2和具有SEQ ID NO. 4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物組；所述Exonl的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 5所示的核苷酸序列的引物PF3 和具有SEQ ID NO. 6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物組；所述Exon2的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 7所示的核苷酸序列的引物PF4 和具有SEQ ID NO. 8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物組；所述Exon3的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 9所示的核苷酸序列的引物PF5 和具有SEQ ID NO. 10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物組；所述Exon4的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 11所示的核苷酸序列的引物PF6 和具有SEQ ID NO. 12所示的核苷酸序列的引物PR6 ；所述Exon5的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 13所示的核苷酸序列的引物PF7 和具有SEQ ID NO. 14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物組；所述Exon6的PCR擴(kuò)增引物組包括具有SEQ ID NO. 15所示的核苷酸序列的引物PF8 和具有SEQ ID NO. 16所示的核苷酸序列的引物P本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
用于檢測(cè)ALK?1基因突變的引物組，其特征在于，包括ALK?1基因的第1到第10外顯子區(qū)，3’UTR和啟動(dòng)子中任一區(qū)域?qū)?yīng)的PCR擴(kuò)增引物組，所述的PCR擴(kuò)增引物組包括:所述啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列的引物PF1和具有SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列的引物PR1的引物組、具有SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列的引物PF2和具有SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物組；所述Exon1的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列的引物PF3和具有SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物組；所述Exon2的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.7所示的核苷酸序列的引物PF4和具有SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物組；所述Exon3的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列的引物PF5和具有SEQ?ID?NO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物組；所述Exon4的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.11所示的核苷酸序列的引物PF6和具有SEQ?ID?NO.12所示的核苷酸序列的引物PR6；所述Exon5的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和具有SEQ?ID?NO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物組；所述Exon6的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和具有SEQ?ID?NO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物組；所述Exon7的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和具有SEQ?ID?NO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物組；所述Exon8的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和具有SEQ?ID?NO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物組；所述Exon9的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和具有SEQ?ID?NO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物組；所述Exon10的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和具有SEQ?ID?NO.23所示的核苷酸序列的引物PR12的引物組；所述3’UTR的PCR擴(kuò)增引物組:包括具有SEQ?ID?NO.24所示的核苷酸序列的引物PF13和具有SEQ?ID?NO.24所示的核苷酸序列的引物PR13的引物組、具有SEQ?ID?NO.25所示的核苷酸序列的引物PF14和具有SEQ?ID?NO.25所示的核苷酸序列的引物PR14的引 物組、具有SEQ?ID?NO.26所示的核苷酸序列的引物PF15和具有SEQ?ID?NO.26所示的核苷酸序列的引物PR15的引物組。...
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：盧文菊，張晨婷，王健，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。