檢測人COMP基因突變的引物組及其試劑盒制造技術

本發明專利技術涉及檢測人COMP基因突變的引物組及其試劑盒，包括：上述用于檢測COMP基因突變的由第1至第19外顯子的PCR擴增引物組成的引物組；PCR擴增試劑；PCR產物純化試劑；含有上述用于檢測COMP基因突變的測序引物組的DNA測序試劑。本發明專利技術采用特異性引物組，針對COMP基因的第1到第19外顯子進行突變檢測，確保了測定結果的準確性與特異性。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及檢測人COMP基因突變的引物組及其試劑盒，具體涉及COMP基因突變所導致的遺傳性疾病假性軟骨發育不良與I型多發性骨骺發育不良的基因檢測，屬于遺傳性骨病基因檢測

技術介紹
軟骨寡聚基質蛋白COMP同源五聚體細胞外基質糖蛋白，為鈣結合蛋白，是軟骨非膠原蛋白的主要成分。COMP每個亞單位均由1個富含半胱氨酸的氨基端、4個類表皮生長因子區、8個類鈣調蛋白重復序列和1個C端球狀區組成。COMP是透明軟骨的主要成分，羧基端可以連接I型、II型與IX型膠原等。該基因突變會導致兩種罕見常染色體顯性遺傳疾病假性軟骨發育不全與I型多發性骨骺發育不良的發生。兩種疾病的COMP基因突變多發生在第8至第19外顯子。其中假性軟骨發育不全多分布在外顯子8到外顯子14，以13外顯子的突變為主，位于第3個類該條蛋白重復序列結構域中。I型多發性骨骺發育不良突變多以11號外顯子突變為主。假性軟骨發育不全的患兒一般在1-3歲出現肢體短縮，頭顱與顏面正常，手指與足趾短粗，韌帶松弛。患者一般存在輕度的胸腰椎后凸畸形，下肢成角畸形常見。多發性骨骺發育不良臨床表現為長骨骨骺端不規則，不同程度的椎體扁平，關節疼痛與僵直，身體輕微與中等程度短小，手腳短小，存在早發性骨性關節炎。如中國專利文獻CN101932935A(申請號200880103506.8)公開了用于治療類風濕性關節炎和相關關節炎性皮疹等炎性關節病的新的方法和藥物產品。所述方法和產品使用骨和軟骨代謝或破壞的各種血清標記，包括軟骨寡聚基質蛋白(COMP)和NFB受體激活蛋白配體(RANKL)，作為評價炎性關節病中IL-17A拮抗劑對關節破壞的效果的生物標記。目前假性軟骨發育不全與I型多發性骨骺發育不良的檢測多集中在常見高發頻率，對于低發頻率突變檢測以及COMP8到14號外顯子以外其它外顯子區域的突變檢測少有報道。COMP基因突變檢測方法有熒光定量PCR、高通量測序分析、單鏈構象多態性變化等等。
技術實現思路
本專利技術針對現有技術的不足，提供檢測人COMP基因突變的引物組及其試劑盒。本專利技術的技術方案如下：一種用于檢測COMP基因突變的引物組，該引物組包括14對特異性擴增COMP基因第1至第19外顯子的引物；所述的COMP基因外顯子1與外顯子2的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的引物FP1與核苷酸序如SEQIDNO.2所示的引物RP1；所述的COMP基因外顯子3的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的引物FP2與核苷酸序如SEQIDNO.4所示的引物RP2；所述的COMP基因外顯子4的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的引物FP3與核苷酸序如SEQIDNO.6所示的引物RP3；所述的COMP基因外顯子5的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.7所示的引物FP4與核苷酸序如SEQIDNO.8所示的引物RP4；所述的COMP基因外顯子6與外顯子7的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的引物FP5與核苷酸序如SEQIDNO.10所示的引物RP5；所述的COMP基因外顯子8的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.11所示的引物FP6與核苷酸序如SEQIDNO.12所示的引物RP6；所述的COMP基因外顯子9的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.13所示的引物FP7與核苷酸序如SEQIDNO.14所示的引物RP7；所述的COMP基因外顯子10的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.15所示的引物FP8與核苷酸序如SEQIDNO.16所示的引物RP8；所述的COMP基因外顯子11與外顯子12的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.17所示的引物FP9與核苷酸序如SEQIDNO.18所示的引物RP9；所述的COMP基因外顯子13的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.19所示的引物FP10與核苷酸序如SEQIDNO.20所示的引物RP10；所述的COMP基因外顯子14與外顯子15的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.21所示的引物FP11與核苷酸序如SEQIDNO.22所示的引物RP11；所述的COMP基因外顯子16的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.23所示的引物FP12與核苷酸序如SEQIDNO.24所示的引物RP12；所述的COMP基因外顯子17的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.25所示的引物FP13與核苷酸序如SEQIDNO.26所示的引物RP13；所述的COMP基因外顯子18與外顯子19的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.27所示的引物FP14與核苷酸序如SEQIDNO.28所示的引物RP14。一種用于檢測COMP基因突變的測序引物組，該引物組包括14條第1至第19外顯子的測序引物引物；包括：外顯子1與外顯子2的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.1的引物FP1；外顯子3的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.3的引物FP2；外顯子4的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.5的引物FP3；外顯子5的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.7的引物FP4；外顯子6與外顯子7的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.9的引物FP5；外顯子8的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.11的引物FP6；外顯子9的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.13的引物FP7；外顯子10的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.15的引物FP8；外顯子11與外顯子12的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.17的引物FP9；外顯子13的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.19的引物FP10；外顯子14與外顯子15的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.21的引物FP11；外顯子16的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.23的引物FP12；外顯子17的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.25的引物FP13；外顯子18與外顯子19的PCR測序引物核苷酸序列為SEQIDNO.27的引物FP14。一種用于檢測COMP基因突變的試劑盒，包括：上述用于檢測COMP基因突變的由第1至第19外顯子的PCR擴增引物組成的引物組；PCR擴增試劑；PCR產物純化試劑；含有上述用于檢測COMP基因突變的測序引物組的DNA測序試劑。根據本專利技術優選的，所述PCR擴增試劑包括：2.5mMdNTP，含Mg2+的10×PCR緩沖液，5U/μlTaqDNA聚合酶，去RNase與DNase水；所述PCR擴增體系中各組分的工作濃度為：200μMdNTP，1×PCR緩沖液，0.025U/μlTaqDNA聚合酶，上游引物和下游引物均為0.4μM，模板濃度為2.5～5ng/μl。根據本專利技術優選的，所述PCR產物純化試劑包括：1U/μlSAP酶、10U/μlExoI酶、去RNase與DNase水；PCR產物純化體系中各組分的工作濃度為：0.05U/μlSAP酶、0.5U/μlExoI酶。根據本專利技術優選的，所述DNA測序試劑包括：上述用于檢測COMP基因突變的測序引物組、BigDy本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于檢測COMP基因突變的引物組，該引物組包括14對特異性擴增COMP基因第1至第19外顯子的引物；所述的COMP基因外顯子1與外顯子2的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的引物FP1與核苷酸序如SEQ?ID?NO.2所示的引物RP1；所述的COMP基因外顯子3的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示的引物FP2與核苷酸序如SEQ?ID?NO.4所示的引物RP2；所述的COMP基因外顯子4的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示的引物FP3與核苷酸序如SEQ?ID?NO.6所示的引物RP3；所述的COMP基因外顯子5的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示的引物FP4與核苷酸序如SEQ?ID?NO.8所示的引物RP4；所述的COMP基因外顯子6與外顯子7的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示的引物FP5與核苷酸序如SEQ?ID?NO.10所示的引物RP5；所述的COMP基因外顯子8的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示的引物FP6與核苷酸序如SEQ?ID?NO.12所示的引物RP6；所述的COMP基因外顯子9的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示的引物FP7與核苷酸序如SEQ?ID?NO.14所示的引物RP7；所述的COMP基因外顯子10的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示的引物FP8與核苷酸序如SEQ?ID?NO.16所示的引物RP8；所述的COMP基因外顯子11與外顯子12的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.17所示的引物FP9與核苷酸序如SEQ?ID?NO.18所示的引物RP9；所述的COMP基因外顯子13的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示的引物FP10與核苷酸序如SEQ?ID?NO.20所示的引物RP10；所述的COMP基因外顯子14與外顯子15的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.21所示的引物FP11與核苷酸序如SEQ?ID?NO.22所示的引物RP11；所述的COMP基因外顯子16的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.23所示的引物FP12與核苷酸序如SEQ?ID?NO.24所示的引物RP12；所述的COMP基因外顯子17的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.25所示的引物FP13與核苷酸序如SEQ?ID?NO.26所示的引物RP13；所述的COMP基因外顯子18與外顯子19的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.27所示的引物FP14與核苷酸序如SEQ?ID?NO.28所示的引物RP14。...

【技術特征摘要】
1.一種用于檢測COMP基因突變的引物組，該引物組包括14對特異性擴增COMP基因第1至第19外顯子的引物；所述的COMP基因外顯子1與外顯子2的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的引物FP1與核苷酸序如SEQIDNO.2所示的引物RP1；所述的COMP基因外顯子3的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的引物FP2與核苷酸序如SEQIDNO.4所示的引物RP2；所述的COMP基因外顯子4的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的引物FP3與核苷酸序如SEQIDNO.6所示的引物RP3；所述的COMP基因外顯子5的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.7所示的引物FP4與核苷酸序如SEQIDNO.8所示的引物RP4；所述的COMP基因外顯子6與外顯子7的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的引物FP5與核苷酸序如SEQIDNO.10所示的引物RP5；所述的COMP基因外顯子8的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.11所示的引物FP6與核苷酸序如SEQIDNO.12所示的引物RP6；所述的COMP基因外顯子9的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.13所示的引物FP7與核苷酸序如SEQIDNO.14所示的引物RP7；所述的COMP基因外顯子10的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.15所示的引物FP8與核苷酸序如SEQIDNO.16所示的引物RP8；所述的COMP基因外顯子11與外顯子12的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.17所示的引物FP9與核苷酸序如SEQIDNO.18所示的引物RP9；所述的COMP基因外顯子13的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.19所示的引物FP10與核苷酸序如SEQIDNO.20所示的引物RP10；所述的COMP基因外顯子14與外顯子15的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.21所示的引物FP11與核苷酸序如SEQIDNO.22所示的引物RP11；所述的COMP基因外顯子16的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.23所示的引物FP12與核苷酸序如SEQIDNO.24所示的引物RP12；所述的COMP基因外顯子17的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.25所示的引物FP13與核苷酸序如SEQIDNO.26所示的引物RP13；所述的COMP基因外顯子18與外顯子19的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQIDNO.27所示的引物FP14與核苷酸序如SEQIDNO.28所示的引物RP14。2.一種用于檢測COMP基因突變的測序引物組，該引物組包括14條第1至...

【專利技術屬性】
技術研發人員：魯艷芹，韓金祥，李公超，尹小麗，代運章，張遙，馬翔，
申請(專利權)人：山東省醫藥生物技術研究中心，
類型：發明
國別省市：山東;37