一種應用于微生物技術領域中的促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麥芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，所述蛋白胨為牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、魚蛋白胨的一種或幾種；一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟，將地衣芽孢桿菌BL63516的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行液體發(fā)酵培養(yǎng)；選擇種子液進行接種，整個發(fā)酵過程維持罐壓為0.02-0.04MPa，轉(zhuǎn)數(shù)0-300r/min，溫度為32-40℃。該發(fā)明專利技術通過調(diào)整培養(yǎng)基中菌種生長所需的碳源、氮源和無機離子的比例，控制整個發(fā)酵過程中各時段的溫度、罐壓、溶氧、pH等全方位指標，提高了地衣芽孢桿菌BL63516的萌發(fā)和生長速度，提高地衣芽孢桿菌BL63516活菌數(shù)和芽孢形成率。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及微生物
，具體涉及一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法。
技術介紹
專利技術專利92113318.9公開了一種地衣芽孢桿菌BL63516(保藏號:CGMCCN0.0183)制成的微生態(tài)制劑，即整腸生，可用于治療成人急性、慢性腹瀉及各種原因引起的腸道菌群失調(diào)癥。1992年開始先后有整腸生膠囊和整腸生顆粒劑產(chǎn)品經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準投放市場。經(jīng)過20年的臨床應用實踐表明，整腸生具有較好的調(diào)整人體菌群失調(diào)的作用，市場、臨床應用均未發(fā)現(xiàn)毒副作用及不良反應方面的相關報道。該專利提供的制備地衣芽孢桿菌BL63516原菌粉的技術方案是:菌種經(jīng)pH6.0-7.8的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)15-24小時，制成種子液；擴大培養(yǎng)時使用PH6.0-7.8的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，35-38°C培養(yǎng)48小時，制成菌苔液，離心獲得菌泥，再按1:8的重量比加入無水碳酸鈣，65-75°C脫水干燥制成原菌粉。該技術出現(xiàn)在微生態(tài)制劑工業(yè)化的早期，菌泥產(chǎn)量低，生產(chǎn)周期長，工作量巨大。后經(jīng)沈陽第一制藥廠1998年技術改造將固態(tài)發(fā)酵法升級為液態(tài)深層發(fā)酵法，工業(yè)化水平得到了大幅提升，但依然使用用于一般細菌增菌培養(yǎng)的通用培養(yǎng)基，即營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(Nutrient Broth),并未研發(fā)設計適合地衣芽孢桿菌BL63516專屬培養(yǎng)基。專利技術專利201010578718.0在液態(tài)深層發(fā)酵法的基礎上，公開了地衣芽孢桿菌BL63516凍干菌種溫度梯度復蘇培養(yǎng)的方法。該專利提供的制備地衣芽孢桿菌BL63516原菌粉的技術方案是:菌種經(jīng)pH7.0-7.4的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，恒溫培養(yǎng)2-8小時，制成種子液；發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)時使用PH7.0-7.4的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，溫度37 土 1°C，罐壓0.02-0.04MPa,培養(yǎng)12-36小時，制成發(fā)酵液，離心獲得菌泥，再按1:3-7的比例加入無水碳酸鈣，60±2°C脫水干燥制成原菌粉。雖然他們都是針對地衣芽孢桿菌BL63516進行了一系列研究，但以上的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配方設計上，均依然采用用于一般細菌增菌培養(yǎng)的通用培養(yǎng)基，即營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(Nutrient Broth)，都未研發(fā)設計適合地衣芽孢桿菌BL63516的專屬培養(yǎng)基，且對該菌種都是采用一次配料、滅菌、批次發(fā)酵的工藝，在發(fā)酵過程中只對發(fā)酵溫度和罐壓進行著本領域技術人員所公知的干預控制，所以目前地衣芽孢桿菌BL63516發(fā)酵產(chǎn)物中，活菌數(shù)含量低，芽孢形成率不高，這一問題一直沒有得到根本的解決。因此，研制開發(fā)一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法一直是亟待解決的課題
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的在于提供一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法，通過調(diào)整培養(yǎng)基中菌種生長所需的碳源、氮源和無機離子的比例，控制整個發(fā)酵過程中各時段的溫度、罐壓、溶氧、PH等全方位指標，提高了地衣芽孢桿菌BL63516的萌發(fā)和生長速度，提高地衣芽孢桿菌BL63516活菌數(shù)和芽孢形成率。本專利技術的目的是這樣實現(xiàn)的:一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麥芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，各組分質(zhì)量百分比為:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麥芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量為水，用NaOH調(diào)節(jié)pH為:6.5-9 ;優(yōu)選各組分質(zhì)量百分比為:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麥芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量為水，用NaOH調(diào)節(jié)pH為7.5-8.5 ;所述蛋白胨為牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、魚蛋白胨的一種或幾種；一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟，(I)將地衣芽孢桿菌BL63516的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行液體發(fā)酵培養(yǎng)；(2)選擇種齡8-15小時的種子液進行接種，接種量為0.03-1.0% ；(3)0-3小時調(diào)節(jié)溶解氧的通氣量在0.1-0.6vvm，控制pH在6-9 ;3_15小時調(diào)節(jié)溶解氧通氣量在0.4-1.1vvm,使pH其在3_7小時逐漸下降至4.5-6.5，7-15小時逐漸上升至8-9.5 ;自15小時開始調(diào)節(jié)溶解氧通氣量在0.3-1.0vvm，控制pH穩(wěn)定在8-9.5，自20小時開始定期取樣檢測，直至芽孢形成率達到80%以上，放罐；整個發(fā)酵過程維持罐壓為0.02-0.04MPa，轉(zhuǎn)數(shù) 0_300r/min，溫度為 32_40°C ；步驟(2)選擇種齡8.5-14小時的種子液進行接種，接種量為0.07-0.29% ;步驟(3)具體過程為:0-3小時調(diào)節(jié)溶解氧通氣量在0.2-0.5vvm，控制pH在7-8.5 ;3_15小時調(diào)節(jié)通氣量在0.6-1.0vvm,使pH在3-7小時逐漸下降至5-6，7-15小時逐漸上升至8.3-9 ；自15小時開始調(diào)節(jié)溶解氧通氣量在0.5-0.9vvm，控制pH穩(wěn)定在8.3-9,自20小時開始定期取樣檢測，直至芽孢形成率達到85-100%，放罐；整個發(fā)酵過程維持罐壓為0.02-0.04MPa，轉(zhuǎn)數(shù) 200-300r/min，溫度為 34_38°C。本專利技術的要點在于它的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法。其原理是:通過研究找出各種物質(zhì)的最有比例，以達到最有利于地衣芽孢桿菌BL63516生長過程中，細胞物質(zhì)的合成、能量的供給以及新陳代謝的調(diào)節(jié)，同時，探索最優(yōu)的外環(huán)境，以達到最有利于地衣芽孢桿菌BL63516生長過程中，滲透壓的穩(wěn)定及酶活力的維持。—種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法與現(xiàn)有技術相比，具有通過調(diào)整培養(yǎng)基中菌種生長所需的碳源、氮源和無機離子的比例，控制整個發(fā)酵過程中各時段的溫度、罐壓、溶氧、PH等全方位指標，提高了地衣芽孢桿菌BL63516的萌發(fā)和生長速度，提高地衣芽孢桿菌BL63516活菌數(shù)和芽孢形成率等優(yōu)點，將廣泛地應用于微生物
中。下面結(jié)合實施例對本專利技術進行詳細說明。具體實施例方式以下實施例將有助于對本專利技術的了解，但這些實施例僅為了對本專利技術加以說明，本專利技術并不限于這些內(nèi)容。實施例一1.發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選1.1篩選培養(yǎng)基的鹽濃度配制營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基各200ml:牛肉粉0.3%、牛蛋白胨1.0%、不同濃度NaCl，余量為水，用NaOH調(diào)節(jié)ρΗ7.2-7.4。NaCl 濃度分別取 0%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%無菌鉤取一環(huán)地衣芽孢桿菌，接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，36_38°C培養(yǎng)9小時，制成種子液。將種子液接種至不同鹽濃度的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，接種量同為0.1%。接種后36-38°CU50r/min培養(yǎng)24h取樣，采用10倍系列稀釋涂平板法，對發(fā)酵液分別進行活菌數(shù)測定，結(jié)果見表I。表I鹽濃度試驗結(jié)果(活菌數(shù)單位:108CFU/ml)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麥芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，其特征在于：各組分質(zhì)量百分比為：牛肉粉或牛肉膏1.0?2.5%、蛋白胨0.5?2.0%、麥芽糊精0.1?0.5%、低聚半乳糖0.1?0.3%、NaCl0.1?2.0%，余量為水，用NaOH調(diào)節(jié)pH為：6.5?9。
【技術特征摘要】
1.一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麥芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，其特征在于:各組分質(zhì)量百分比為:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨 0.5-2.0%、麥芽糊精 0.1-0.5%、低聚半乳糖 0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量為水，用NaOH調(diào)節(jié)pH為:6.5-9。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:優(yōu)選各組分質(zhì)量百分比為:牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麥芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖 0.11-0.2%, NaCl0.3-1.5%，余量為水，用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 為 7.5-8.5。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:所述蛋白胨為牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、魚蛋白胨的一種或幾種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于:該方法包括以下步驟， (1)將地衣芽孢桿菌BL63516的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行液體發(fā)酵培養(yǎng)； (2)選擇種齡8-15小時的種子液進行接種，接種量為0.03-1.0% ； (3)0-3小時調(diào)節(jié)溶解氧的通氣量在0.1-0.6vvm,控...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：李雪龍，雷健，吳楠，孟莉，尹柘，
申請(專利權(quán))人：東北制藥沈陽科技發(fā)展有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。