一種脂肪酶LIP及其基因和應用制造技術

本發明專利技術涉及基因工程領域，具體地，本發明專利技術涉及一種脂肪酶及其基因和應用，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發明專利技術是為了解決現有技術的不足，從黑曲霉中克隆得到一種脂肪酶基因。該脂肪酶在畢赤酵母中的高效表達，可達到比現有技術更高的表達水平。因此，本發明專利技術的重組脂肪酶在工業生產中可大大降低生產成本，使其在洗滌、造紙、食品等工業中顯示出更大應用潛力。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及基因工程領域，具體地，本專利技術涉及一種脂肪酶及其基因和應用。
技術介紹
脂肪酶(Lipase, E.C.3.1.1.3),全稱為三酰基甘油酰水解酶(triacylglycerolacylhydrolase),它屬于α/β折疊酶家族,是一種絲氨酸水解酶。脂肪酶催化三酰甘油的酯鍵水解，釋放更少酯鍵的甘油酯或甘油及脂肪酸。脂肪酶具有優良的立體選擇性，反應條件溫和并且不會造成環境污染，因此在洗滌、食品、造紙等許多工業領域中均有廣泛的應用。脂肪酶廣泛的存在于動植物和微生物中，相對于動植物，微生物分泌的脂肪酶具有更廣的底物專一性、作 用溫度以及作用PH范圍。雖然微生物分泌的脂肪酶具有很好的應用特性，但是尋找到適于工業化大生產的脂肪酶生產菌株還是十分困難。通過傳統誘變育種以及優化發酵條件，可以一定程度的提高微生物產脂肪酶的能力，然而脂肪酶產量和活力的突破性提高還需要依賴于基因工程。目前，在基因工程操作過程中一般選用大腸桿菌、釀酒酵母和畢赤酵母作為脂肪酶基因的表達宿主。由于在大腸桿菌中表達產量較低，蛋白易形成包涵體，產業化生產困難。因此采用真核生物，如釀酒酵母和畢赤酵母等作為表達宿主成為當前的主要趨勢。到目前為止已有多種微生物的脂肪酶基因在畢赤酵母中實現了異源表達，如溜曲霉(Shi B H et al..Cloning and Expression of Aspergillus tamariiFS132 Lipase Gene in Pichia pastoris.1nt J Mol Sci, 2010，11 (6):2373-2382.)、米根霉(Minging S et al..Functional expression of Rhizopus oryzae lipase inPichia pastoris:high-level production and some properties.JBiotechnol, 1998,66(5):147-156.)、擴展青霉(袁彩，林琳，施巧琴.擴展青霉堿性脂肪酶基因在畢赤酵母中的高效表達.生物工程學報，2003，19⑵:31-36.)等，表達的酶活分別為20U/ml、231U/ml和260U/ml。關于黑曲霉脂肪酶的研究報道主要是集中在酶的分離純化、固定化以及應用，關于其基因的克隆與表達方面的報道很少，僅有的報道中也只是將黑曲霉脂肪酶基因轉化到大腸桿菌(Shu Z Y et al..Aspergillus niger lipase:genecloning, over-expression in Escherichia coli and in vitro refolding.BiotechnolLett，2007，29(12):1875-1879.)和畢赤酵母(舒正玉，楊江科，徐麗.黑曲霉脂肪酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達.武漢大學學報，2007，53 (2):204-208.)，并沒有詳細的研究重組工程菌株的酶活力以及酶學性質。總體上來說，目前所報道的脂肪酶重組酶的酶活力普遍較低，生產成本較高。因此篩選高比活酶基因，構建高效產酶微生物，進行基因改良，優化酶的性質，是當前亟待解決的問題。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種來源于黑曲霉的脂肪酶。本專利技術的再一目的是提供上述脂肪酶的基因。本專利技術的再一目的是提供包含上述脂肪酶的重組載體。本專利技術的再一目的是提供包含上述脂肪酶的重組菌株。本專利技術的再一目的是提供一種高效表達脂肪酶的方法。本專利技術的再一目的是提供上述脂肪酶的應用。本專利技術從黑曲霉中分離純化得到一種脂肪酶，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示:本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種脂肪酶LIP，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技術特征摘要】
1.一種脂肪酶LIP，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。2.一種脂肪酶基因lip，其特征在于，編碼權利要求1所述的脂肪酶LIP。3.如權利要求2所述的脂肪酶基因lip，其特征在于，其堿基序列如SEQID N0.2所示。4.包含權利要求2所述的脂肪酶基因Iip的重組載體。5.根據權利要求4所述重組...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王建榮，李陽源，羅長財，鐘開新，陳麗芝，
申請(專利權)人：廣東溢多利生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：