溶酶體貯積病酶制造技術

本發明專利技術提供了具有特定糖基化模式以內化至靶細胞中的重組人溶酶體酸性脂酶的組合物，包含編碼人溶酶體酸性脂酶的核酸的載體，用所述載體轉化的宿主細胞，包含重組人溶酶體酸性脂酶的藥物組合物，和治療與溶酶體酸性脂酶缺乏相關的病況的方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】溶酶體貯積病酶相關串請本申請要求2010年4月23日提交的美國臨時申請No. 61/343，177、2010年5月26日提交的美國臨時申請No. 61/396，376、2010年9月9日提交的美國臨時申請Νο·61/403，011、2010年10月29日提交的美國臨時申請No. 61/456，014、2011年I月13日提交的美國臨時申請No. 61/432，372的權益。將上述申請的全部教導通過引用并入本文。
技術介紹
溶酶體酸性脂酶(LAL)缺乏是極罕見的溶酶體貯積病(LSD)，其特征在于因該酶的缺乏而不能在溶酶體中分解膽固醇酯(CE)和甘油三酯(TAG)。LAL缺乏與在許多組織和細胞類型具有底物積累的其它溶酶體貯積癥相似。在LAL缺乏中，底物積累在網狀內皮系統的細胞(包括肝中的肝巨噬細胞、脾中和小腸的粘膜固有層中的組織細胞)中是最顯著的。網狀內皮細胞表達巨噬細胞甘露糖/N-乙酰葡糖胺受體(也稱為巨噬細胞甘露糖受體或MMR、CD206)，其介導具有以GIcNAc或甘露糖終止的N-聚糖的蛋白質的結合、細胞攝取和溶酶體內化，并且提供此類至關重要的細胞類型的酶缺乏的潛在校正的途徑。LAL缺乏是多系統疾病，其最常見地表現出胃腸、肝和心血管并發癥，并且與顯著的發病率或死亡率相關。LAL缺乏的臨床效應因脂質材料在許多組織的溶酶體中大量積累以及膽固醇和脂質動態平衡機制的深度擾亂(包括肝膽固醇合成的顯著增加)而引起。LAL缺乏呈現至少兩種表型沃爾曼病(Wolman disease) (WD)和膽固醇酯沉積病(CESD)。沃爾曼病是LAL缺乏的最具侵襲性的呈現。該表型的特征在于胃腸和肝表現，包括生長不足、吸收不良、脂肪瀉、嚴重的體重減輕和肝腫大。沃爾曼病進展迅速并且在生命的第一年內通常是致命的。案例報告綜述顯示超過12月齡的存活對于在生命的第一年中呈現因LAL缺乏而引起的生長不足的患者是極罕見的。在該最具侵襲性的形式中，生長不足是主要臨床特征并且是早期死亡率的主要促因(contributor)。如通過肝增大和轉氨酶的升高證明的肝損害在嬰兒中也是常見的。身體檢查發現(Physical finding)包括具有肝腫大和脾腫大的腹脹，并且放射照相檢查通常顯示腎上腺的鈣化。實驗室評估典型地顯示升高的血清轉氨酶的水平及缺乏或顯著減小的LAL酶活性。還可在患者中看到膽固醇和甘油三酯的升高的血液水平。沃爾曼病的目前治療選擇極其有限。向具有發熱和/或感染跡象的嬰兒施用抗生素。可處方腎上腺功能減退的類固醇替代療法和專門化營養支持，然而無證據表明這些干預能預防死亡，目前還不清楚它們是否對短期存活具有影響。在一系列4名利用骨髓移植治療的具有LAL缺乏的患者中，所有4名患者在移植的數月內死于該過程的并發癥。具有LAL缺乏的患者還可在以后的生活中呈現顯著的肝和心血管損害，這通常稱為膽固醇酯沉積病(CESD)。在CESD中，肝嚴重地受到顯著的肝腫大、肝細胞壞死、轉氨酶的升高、肝硬化和纖維化的影響。由于CE和TG的水平升高，高脂血癥和加速的動脈粥樣硬化也見于LAL缺乏。特別地，脂肪沉積物在動脈壁上的積累在生命早期已被描述。沉積使動脈腔變窄，并且可導致血管阻塞，從而增加包括心肌梗塞和中風的重大心血管事件的風險。CESD的表現是高度可變的，一些患者一直未確診直至在成人晚期表現出并發癥，然而其他患者在兒童早期已呈現肝功能障礙。CESD與縮短的壽命和明顯的不健康相關；患有CESD的患者的預期壽命取決于相關并發癥的嚴重度。用于CESD表型的目前治療選擇聚焦在通過排除富含膽固醇和甘油三酯的食物的飲食和通過施用降膽固醇藥抑制膽固醇合成和載脂蛋白B產生來控制脂質積累。雖然可見一些臨床改善，但潛在的疾病表現繼續存在并且疾病進展仍然存在。在大多數案例中，LAL缺乏的療法需要終身治療。此外，由于蛋白質治療劑的高成本，期望施用最少的有效量的治療劑來治療LAL缺乏。然而，迄今為止，還沒有治療LAL缺乏，特別地患有沃爾曼病和CESD的患者的有效療法。因此，存在對利用具有最低的施用頻率以改善患者的生活質量的有效療法的強烈需要。還存在對高表達且強勁的蛋白質生產平臺的需要，所述蛋白質生產平臺可產生穩定的并且高效地靶向患者的患病組織細胞中的溶酶體區室的LAL蛋白。專利技術概沭·本文公開了特別適合用于療法、例如用于與LAL缺乏相關的病況的治療的LAL的組合物。本文中描述的LAL分子包含特定的聚糖結構，當施用至受試者例如人受試者時該結構提供至細胞的溶酶體內的高效且快速的攝取。在一個方面，本文中公開的組合物包含人LAL，其中相當高百分比的人LAL包含至少一個甘露糖-6-磷酸聚糖部分，其可用作為用于通過在例如肝細胞上發現的細胞表面上的甘露糖-6-磷酸受體內化的配體。在一個實施方案中，組合物中包含的LAL的30%或更多，例如至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少97 %或至少99 %包含至少一個甘露糖-6-磷酸部分。甘露糖_6_磷酸部分可見于例如位于選自 SEQ ID NO :2 的 Asn15、Asn51、Asn8。、Asn14。、Asn252 和 Asn3。0 的一個或多個殘基上的N-聚糖結構上。在另一個方面，本文中公開的組合物包含人LAL，其中相當高百分比的人LAL在任何其N-聚糖結構中不包含唾液酸部分，這有時可干擾酶至細胞中的內化。在一個實施方案中，15 %或更少，例如10 %或更少，5 %或更少，2 %或更少，I %或更少或基本上無包含于組合物中的LAL在任何其N-聚糖結構中包含唾液酸部分。在另一個方面，本文中公開的組合物包含人LAL，其中相當高百分比的人LAL在任何其N-聚糖結構中不包含巖藻糖部分。在一個實施方案中，包含于組合物中的LAL中的50 %或更少，例如，50 %或更少，40 %或更少，30 %或更少，20 %或更少，10 %或更少，5 %或更少，2%或更少，1%或更少包含巖藻糖部分，或包含于組合物中的LAL基本上在任何其N-聚糖結構中不包含巖藻糖部分。在另一個方面，描述了適用于產生含LAL的組合物的載體、宿主細胞、表達系統和相關方法。通常，本文中討論的和公開的本專利技術的LAL為人LAL。在一個實施方案中，包含LAL的組合物包括具有如下氨基酸序列的成熟LAL SGGKLTAVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKNHSDKGPKPVVFLQHGLLADSSNWVTNLANSSLGFILADAGFDVWMGNSRGNTWSRKHKTLSVSQDEFWAFSYDEMAKYDLPASINFILNKTGQEQVYYVGHSQGTTIGFIAFSQIPELAKRIKMFFALGPVASVAFCTSPMAKLGRLPDHLIKDLFGDKEFLPQSAFLKWLGTHVCTHVILKELCGNLCFLLCGFNERNLNMSRVDVYTTHSPAGTSVQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYFHYNQSYPPTYNVKDMLVPTAVWSGGHDWLADVYDVNILLTQITNLVFHESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKY本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：A·奎因，A·J·哈維，
申請(專利權)人：辛那杰瓦生物制藥股份有限公司，
類型：
國別省市：