一種耐熱保護劑及其應用制造技術

本發明專利技術提供一種耐熱保護劑及其應用，涉及活的微生物保存領域。所述耐熱保護劑，由下列物質組成：低聚糖40%～80%，氨基酸3%～12%，明膠3%～12%，酪蛋白水解物3%～12%，聚乙烯基吡咯烷酮3%～12%，甘油3%～12%，普魯尼克-683%-12%。本發明專利技術還提供耐熱保護劑在制備活疫苗凍干粉中的應用。用溶劑溶解耐熱保護劑，得到保護劑溶液；將保護劑溶液與活病毒液混合，得到活疫苗；將活疫苗進行冷凍干燥即得活疫苗凍干粉。本發明專利技術耐熱保護劑能提高活疫苗的耐熱性能，采用該耐熱保護劑制備的活疫苗凍干粉在37℃保存2個月，15℃條件下保存24個月。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及活的微生物保存領域，具體涉及耐熱保護劑及其應用。
技術介紹
病毒等生物活性物質及其相關制品的熱敏感性一直是活疫苗長期保存的瓶頸。我國幅員遼闊，經濟水平差異較大，運輸、使用過程中疫苗短期暴露高溫環境(甚至45°C以上) 的現象依然存在，所以對活疫苗的耐熱性能提出了更高的要求。耐熱凍干保護劑考慮了活疫苗在較高溫度和較長保存時間的情況下，凍干物質可能產生的物理和化學變化對活疫苗存活的影響。但是，現有耐熱凍干保護劑僅能使活疫苗在2 8 °C條件下保存24個月，37 °C條件下保存30天。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種耐熱保護劑，能夠增強活疫苗的耐熱性能。本專利技術還提供耐熱保護劑在制備活疫苗凍干粉中的應用，采用該耐熱保護劑制備的活疫苗凍干粉在37°C保存2個月，15°C條件下保存24個月。本專利技術的目的采用如下技術方案實現。一種耐熱保護劑，按照質量百分含量由下列物質組成低聚糖40% 80%，氨基酸3% 12%，明膠3% 12%,酪蛋白水解物3% 12%，聚乙烯基吡咯烷酮3% 12%，甘油3% 12%,普魯尼克-68 3%-12%ο所述低聚糖選自海藻糖、蔗糖、乳糖和菊糖中的一種或兩種以上的混合物。所述氨基酸選自精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和異亮氨酸中的一種或兩種以上的混合物。一種所述耐熱保護劑在制備活疫苗凍干粉中的應用。用溶劑溶解耐熱保護劑，得到保護劑溶液；將保護劑溶液與活病毒液混合，得到活疫苗；將活疫苗進行冷凍干燥即得活疫苗凍干粉。所述溶劑為無菌的生理鹽水、注射用水、PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖液或Hank’ s 液，所述耐熱保護劑與溶劑的質量比為3:6 8。所述保護劑溶 液與活病毒液按照質量比為1:0. 5 2混合。所述活病毒液為雞新城疫病毒液或豬繁殖與呼吸綜合征病毒液。冷凍干燥的方法為將活疫苗在常壓、溫度為_40°C _65°C條件下保持2 6小時，在真空度為O.1 10. Ombar溫度為-10°C 4°C條件下保持10 26小時，在真空度為O.01 5. Ombar溫度為10°C 28°C條件下保持2 8小時。本專利技術耐熱保護劑，由于其成分及含量的合理搭配，使得活疫苗耐熱、耐儲存。耐熱保護劑中的低聚糖能夠置換毒囊膜或者細胞壁中的，讓病毒處于休眠狀態，降低病毒干燥和保存期的生命活動，進而大大加強其耐熱性能。采用本專利技術耐熱保護劑制備的活疫苗凍干粉，避免了冰晶的形成，減少病毒囊膜或者細胞壁的物理損傷，使得活疫苗凍干粉在37°C保存2個月，15°C條件下保存24個月。具體實施方式下面通過實施例進一步解釋本專利技術，但本專利技術并不受這些實施例的限制。實施例1耐熱保護劑的制備本實施例中如果無特殊說明，百分數均指重量百分含量。其中，酪蛋白水解物購自ShanHai Richu Bioscience Co. · Ltd,批號 090901 ;聚乙烯基吡咯烷酮(K-30)購自國藥集團化學試劑有限公司，批號F20111009 ;普魯尼克68 (Pluronic F 68)購自上海生工生物有限公司，批號HJ0522B2012。耐熱保護劑I配方海藻糖68%，甘氨酸6%，明膠3%，酪蛋白水解物6%，聚乙烯基吡咯烷酮 6%，甘油5%，普魯尼克686%。耐熱保護劑2配方海藻糖 38%，蔗糖 20%，精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和異亮氨酸各2%，明膠6%，酪蛋白水解物10%，聚乙烯基吡咯烷酮 3%，甘油3%，普魯尼克6810 %。耐熱保護劑3配方海藻糖、蔗糖、乳糖和菊糖各15%，精氨酸、甘氨酸和蛋氨酸各2%，明膠10%，酪蛋白水解物8%，聚乙烯基吡咯烷酮 4%，甘油8%，普魯尼克684%。耐熱保護劑4配方鹿糖48%,精氨酸10%，明膠10%，酪蛋白水解物6%，聚乙烯基吡咯烷酮10%，甘油10%， 普魯尼克68 6%。耐熱保護劑5配方乳糖77%，蛋氨酸2%，谷氨酸6%，明膠3%，酪蛋白水解物3%，聚乙烯基吡咯烷酮3%，甘油3%，普魯尼克683%。耐熱保護劑6配方菊糖40%,谷氨酸和異亮氨酸各6%，明膠12%，酪蛋白水解物11%，聚乙烯基吡咯烷酮11%，甘油11%，普魯尼克683%。按照各耐熱保護劑的配方稱取各成分，獲得耐熱保護劑1-6。實施例2 雞新城疫活疫苗凍干粉的制備及其耐熱性能 (O耐熱保護劑的制備按實施例1方法制得耐熱保護劑I 一 6。( 2 )雞新城疫病毒液(活病毒液)的準備由南京天邦生物科技有限 公司提供雞新城疫病毒液。具體制備方法按照《獸用生物質量質量標準匯編》(2006-2008)相關要求，制備雞新城疫病毒液(La Sota株)，每羽份病毒液病毒含量為107_%id5(i (雞胚檢驗法)。(3)雞新城疫活疫苗凍干粉的制備 ①用溶劑溶解耐熱保護劑，得到保護劑溶液；將耐熱保護劑I與無菌注射用水按照質量比為3 7混合，待耐熱保護劑I完全溶解后， 用O. 22 μ m的微孔濾膜過濾除菌，得到保護劑溶液1，4°C保存備用。按照制備保護劑溶液I的方法，將耐熱保護劑2-6，分別配制成相應的保護劑溶液。不同之處在于，保護劑溶液2中溶劑為無菌PBS緩沖液(pH7. 2)，耐熱保護劑2與無菌 PBS緩沖液(pH7. 2)按照質量比為3 6 ;保護劑溶液3中的溶劑為無菌生理鹽水，耐熱保護劑3與無菌生理鹽水按照質量比為3 8混合；保護劑溶液4和5的配制方法同保護劑溶液 2 ;保護劑溶液6的配制方法同保護劑溶液3。PBS 緩沖液(ρΗ7· 2):將 8. 5g NaCl,3. 5g Na2HPO4 · 12H20 和 O. 25g NaH2PO4 · 2H20 溶于蒸懼水，定容至1000ml。咨保護劑溶液I — 6分別與雞新城疫病毒液(活病毒液)混合，得到活疫苗I — 6。其中活疫苗I中保護劑溶液I與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:1?；钜呙?中保護劑溶液2與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:0. 5?；钜呙?中保護劑溶液3與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:2。活疫苗4中保護劑溶液4與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:1.5?；钜呙?中保護劑溶液5與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:0. 5。活疫苗6中保護劑溶液6與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:2。③將活疫苗I用真空冷凍干燥機按照下述方法進行干燥將活疫苗I在常壓、溫度為_40°C條件下保持2小時，在真空度為O.1mbar溫度為_10°C條件下保持10小時，在真空度為O. Olmbar溫度為10°C條件下保持2小時，即得雞新城疫活疫苗凍干粉I。將活疫苗2用真空冷凍干燥機按照下述方法進行干燥將活疫苗2在常壓、溫度為_65°C條件下保持6小時，在真空度為10. Ombar溫度為4°C條件下保持26小時，在真空度為5. Ombar溫度為28°C條件下保持8小時，即得雞新城疫活疫苗凍干粉2。將活疫苗3用真空冷凍干燥機按照下述方法進行干燥將活疫苗3在常壓、溫度為_52°C條件下保持4小時，在真空度為5. Ombar溫度為_3°C條件下保持18小時，在真空度為2. 5mbar溫度為20°C條件下保持5小時，即得雞新城疫活疫苗凍干粉3。按照活疫苗I的干燥方法，將活疫苗4干燥后得到雞新城疫活疫苗凍干粉4。按照活疫苗2的干燥方法，將活疫苗5干燥后本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種耐熱保護劑，按照質量百分含量由下列物質組成：?低聚糖40%～80%，氨基酸3%～12%，明膠3%～12%，酪蛋白水解物3%～12%，聚乙烯基吡咯烷酮3%～12%，甘油3%～12%，普魯尼克?68?3%?12%。

【技術特征摘要】
1.一種耐熱保護劑，按照質量百分含量由下列物質組成 低聚糖40% 80%， 氨基酸3% 12%， 明膠3% 12%, 酪蛋白水解物3% 12%， 聚乙烯基吡咯烷酮3% 12%， 甘油3% 12%, 普魯尼克-68 3%-12%ο2.根據權利要求1所述耐熱保護劑，其特征在于所述低聚糖選自海藻糖、蔗糖、乳糖和菊糖中的一種或兩種以上的混合物。3.根據權利要求2所述耐熱保護劑，其特征在于所述氨基酸選自精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和異亮氨酸中的一種或兩種以上的混合物。4.一種權利要求1 一 3之一所述耐熱保護劑在制備活疫苗凍干粉中的應用。5.根據權利要求4所述應用，其特征在于用溶劑溶解耐熱保護劑，得到保護劑溶液；將保護劑溶液與活病毒液混合，得到活疫苗；將活疫苗進行...

【專利技術屬性】
技術研發人員：盧宇，呂芳，鄧碧華，張金秋，侯繼波，
申請(專利權)人：江蘇省農業科學院，
類型：發明
國別省市：