本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種負載抗菌肽的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述制備方法具體包括如下步驟：（1）將0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液與0.01~10.0mg/mL的抗菌肽水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液；（2）取γ-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液滴于殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為0.5~5.0mg/mL，醋酸體積濃度為1~3%，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，離心，取沉淀冷凍干燥，即得負載抗菌肽的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子。本發(fā)明專利技術(shù)制得的負載抗菌肽的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子能減少抗菌肽的初期突釋，有效延長藥物的釋放時間，達到高效使用抗菌肽的目的。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種長效安全的抗菌納米材料的制備方法，具體涉及一種負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，屬于醫(yī)藥工程
技術(shù)介紹
抗菌肽又稱抗微生物肽或肽抗生素，在動植物體內(nèi)分布廣泛，是天然免疫防御系統(tǒng)的一部分。抗菌肽不僅有廣譜抗菌能力，而且對真菌、病毒及癌細胞也有作用。近年來，由于藥物的濫用，藥物殘留和細菌耐藥性等問題日漸嚴重，從而引發(fā)了人們對食品和環(huán)境的關(guān)注，越來越多的國家開始呼吁禁止濫用抗生素。而抗菌肽因其獨特的生物活性，以及不同于傳統(tǒng)抗生素的特殊作用機理，已引起了人們極大的研究興趣，成為分子生物學和生物醫(yī)學研究領(lǐng)域的熱點之一。天然抗菌肽通常是由30多個氨基酸殘基組成的堿性小分子多肽，水溶性好，分子量大約在1. 8^4. OkDa之間。大部分抗菌肽具有熱穩(wěn)定性，在100°C下加熱l(Tl5min仍能夠保持其活性。多數(shù)抗菌肽的等電點大于7，表現(xiàn)出較強的陽離子特征。研究表明，抗菌肽分子通過膜內(nèi)分子間的位移而相互聚集在一起，從而在膜上形成離子通道，使膜蛋白凝集，使細菌不能保持正常的滲透壓而死亡。也有科學家認為是通過影響細胞膜上的能量運轉(zhuǎn)和代謝，從而損傷細胞呼吸鏈的功能而殺死細菌。總之，抗菌肽的作用機理的關(guān)鍵在于通過物理方式和細胞壁發(fā)生作用而產(chǎn)生 的抗菌活性。抗菌肽只對原核生物細胞和真核生物病變細胞有抗菌作用，對正常的真核細胞不起作用。原因在于原核生物和正常真核生物的細胞膜結(jié)構(gòu)不同，正常真核生物細胞膜中含有大量的膽固醇，而膽固醇的存在使膜結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定。此夕卜，高等動物存在高度發(fā)達的細胞骨架系統(tǒng)，其存在也抵抗了抗菌肽的作用。因此，抗菌肽天然就存在靶向性，其能夠靶向抗菌，而不會破壞正常高等動物細胞。但是，抗菌肽被廣泛應用的障礙是天然資源有限，而化學合成和基因工程等合成技術(shù)還不夠成熟，合成抗菌肽成本較高，所以目前在實際應用過程中，就需要一種高效的負載方式，來包埋抗菌肽。高聚物納米材料作為藥物載體已經(jīng)獲得廣泛研究。對于親水性抗菌肽的包埋，可以選擇利用殼聚糖和Y -聚谷氨酸(Y -PGA)作為載體材料，通過殼聚糖和Y -聚谷氨酸之間離子交聯(lián)，制備納米載體。這種納米載體的優(yōu)點是不使用有毒溶劑，制備條件較緩和。這可以避免有機溶劑的存在使抗菌肽不穩(wěn)定，而發(fā)生降解。目前，殼聚糖與Y-聚谷氨酸通過離子交聯(lián)法制備納米粒子的研究并不很多，現(xiàn)有的相關(guān)研究并沒有獲得既能夠大大降低突釋率，又能夠獲得緩慢藥物釋放的高效的藥物包埋納米體系。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，制得的負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子能減少抗菌肽的初期突釋，有效延長藥物的釋放時間，達到高效使用抗菌肽的目的。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案一種負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，是以質(zhì)量比為50 10^50 :f 50的殼聚糖、Y-聚谷氨酸和抗菌肽為原料，首先是通過Y-聚谷氨酸與抗菌肽之間的離子交聯(lián)作用制備成Y -聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子，然后再利用殼聚糖與Y-聚谷氨酸之間存在離子交聯(lián)作用，對制備的Y-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子進行再包裹，得到負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子；具體包括如下步驟(I)將O. 5 5. Omg/mL的Y -聚谷氨酸水溶液與O. ΟΓ Ο. Omg/mL的抗菌肽水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到Y(jié)-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液；(2)取步驟(I)得到的Y -聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液滴于殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為O. 5^5. Omg/ml，醋酸體積濃度為f 3%，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，不會出現(xiàn)沉淀和絮凝現(xiàn)象，然后離心，取沉淀冷凍干燥，即得負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子。本專利技術(shù)中，所述的殼聚糖的脫乙酰度為85% 95%，分子量15 150萬。在本專利技術(shù)中，殼聚糖的脫乙酰度和分子量對于納米粒子的性能影響不大。 本專利技術(shù)中，所述的Y-聚谷氨酸純度在92. 0%與99%之間，分子量10(Tl45萬。本專利技術(shù)中，所述的抗菌肽等電點大于7，可以是各類哺乳動物抗菌肽、兩棲動物抗菌肽、昆蟲動物抗菌肽、植物抗菌肽、細菌抗菌肽和病毒抗菌肽，本專利技術(shù)中主要以人源抗菌肽LL-37為例進行說明。進一步，原料殼聚糖的濃度范圍優(yōu)選為2. 5^5. Omg/mL、Y -聚谷氨酸濃度優(yōu)選為2. 5^5. Omg/mL、抗菌肽的濃度優(yōu)選為O. 4 10. Omg/mL ;殼聚糖、Y -聚谷氨酸和抗菌肽的質(zhì)量比優(yōu)選為50 :25 50 :5 50。本專利技術(shù)所使用的殼聚糖和Y-聚谷氨酸是可在體內(nèi)降解的高分子醫(yī)用材料，生物相容性好，對人體無害；而抗菌肽被包埋在殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子內(nèi)，可以得到更好的保護，提高藥物穩(wěn)定性和利用率。本專利技術(shù)所述的負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子的載藥量為18. 69Γ41. 7%，包封率為30. 29Γ79. 3%, 60小時內(nèi)的釋放量為60. 7% 97. 1%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果在于本專利技術(shù)操作簡單，制得的負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子，可以調(diào)節(jié)抗菌肽的釋放速度，減少給藥次數(shù)，增加了抗菌肽治療的安全性、高效性和可靠性，是比較優(yōu)良的載藥納米體系。附圖說明圖1中，A是實施例1負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸納米粒子的差示掃描量熱分析譜圖；B是實施例2負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸納米粒子的差示掃描量熱分析譜圖；C是實施例3負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸納米粒子的差示掃描量熱分析譜圖。圖2中，A是實施例1負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子的透射電鏡照片出是實施例2負載抗菌肽的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子的透射電鏡照片；C是實施例3負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的透射電鏡照片。圖3中，A是實施例1負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子的體外釋放曲線示意圖；B是實施例2負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的體外釋放曲線示意圖；C是實施例3負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的體外釋放曲線示意圖。具體實施例方式下面以具體實施例對本專利技術(shù)的
技術(shù)實現(xiàn)思路
做進一步說明，但本專利技術(shù)的保護范圍不限于此實施例1 :所要制備的負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸納米粒子，具體重量百分比為殼聚糖/Y-聚谷氨酸/抗菌肽=50/10/1，制備過程如下①殼聚糖溶液的配置將殼聚糖(脫乙酰度為85%，分子量15萬)50. Omg溶于100. OmL的1%的稀醋酸溶液中，室溫下攪拌,配成O. 5mg/mL的殼聚糖醋酸溶液。②將O. 5mg/mL的Y -聚谷氨酸(純度92%，分子量100萬)水溶液與O. 01mg/mL的抗菌肽水溶液10 1體積比混合，不斷攪拌至有微弱藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到Y(jié)-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液；取適量Y -聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液，滴于一定體積的濃度為O. 5mg/mL的殼聚糖稀醋酸溶液中，使得殼聚糖/ Y -聚谷氨酸/抗菌肽(質(zhì)量比)=50/10/1并不斷本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種負載抗菌肽的殼聚糖/γ?聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述制備方法是以質(zhì)量比為50：10~50：1~50的殼聚糖、γ?聚谷氨酸和抗菌肽為原料，具體包括如下步驟：（1）將0.5~5.0mg/mL的γ?聚谷氨酸水溶液與0.01~10.0mg/mL的抗菌肽水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到γ?聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液；（2）取步驟（1）得到的γ?聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液滴于殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為0.5~5.0mg/mL，醋酸體積濃度為1~3%，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，離心，取沉淀冷凍干燥，即得負載抗菌肽的殼聚糖/γ?聚谷氨酸復合納米粒子。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種負載抗菌肽的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述制備方法是以質(zhì)量比為50 :1(T50 50的殼聚糖、Y-聚谷氨酸和抗菌肽為原料，具體包括如下步驟 (1)將O.5^5. Omg/mL的Y-聚谷氨酸水溶液與O. ΟΓ Ο. Omg/mL的抗菌肽水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到Y(jié)-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液； (2)取步驟(I)得到的Y-聚谷氨酸/抗菌肽復合納米粒子溶液滴于殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為O. 5^5. Omg/mL，醋酸體積濃度為Γ3%，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，離心，取沉淀冷凍干燥，即得負載抗菌肽的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載抗菌肽的殼聚糖/Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述的殼聚糖的脫乙酰度為85% 95%，分子量15 150萬。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載抗菌肽的...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫燕，柳永，許堯興，符思達，曹勇，王磊，
申請(專利權(quán))人：杭州師范大學，浙江省農(nóng)業(yè)科學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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