本發明專利技術公開了一種靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法，其特征是：藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體（BDI-1）和絲裂霉素(MMC)，其合成方法是用戊二醛為交聯固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結合，制成粒徑為280～350納米的白蛋白載絲裂霉素（MMC-NS）納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3-（2-毗啶基二琉）丙酸酯（SPDP）使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團（PDP），得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BDI-1-SH分子反應，得到分子中含有抗人膀胱癌抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BDI-1-MMC-NS。本發明專利技術的藥物對膀胱癌有很強的靶向性，對膀胱癌的殺傷力強，而對正常組織細胞作用較小。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種，具體說是一種分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白和絲裂霉素的藥物及其制備方法。
技術介紹
膀胱癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人們的生命和健康，其中90%以上是尿路上皮癌(移行)細胞癌(transitional cell carcinoma, TCC),其中約10%最終發展為肌層浸潤性或轉移性膀胱癌，遠期療效不佳，由于其較高的發病率及復發率，膀胱灌注化療對于非肌層浸潤性膀胱是主要治療方法之一。目前膀胱灌注化療藥物有絲裂霉素(簡稱MMC)、喜樹堿、吡柔吡星、表柔比星及柔紅霉素等多種。膀胱癌高復發率原因之一是對抗癌藥物耐藥性的產生，體外實驗證實這些藥物對癌細胞有明顯殺傷作用，但由于其選擇性太差，在殺傷癌細胞的同時也殺傷大量的正常細胞，且其有效劑量與毒性劑量往往很接近，容易出現并發癥，影響病人的生活質量，如何實現化療藥物對腫瘤細胞的特異性殺傷成為提高藥物治療效果的可能途徑。靶向藥物的出現，大大降低了藥物的副作用。所謂靶向藥物治療就是使藥物瞄準腫瘤部位，在局部保存相對高的濃度，延長藥物的時間，提高對腫瘤的殺傷力，而對正常組織細胞作用較小。絲裂霉素是從頭狀鏈霉菌培養液中分離提取的一種廣譜抗腫瘤抗生素，對多種癌癥有抗癌作用，其作用原理可使細胞的DNA解聚，同時阻礙DNA的復制，從而抑制腫瘤細胞分裂。絲裂霉素為細胞周期非特異性藥物，其抗腫瘤譜較廣，作用迅速，但治療指數不高，毒性較大。因此通過對絲裂霉素進行改性，制成靶向藥物來降低它的副作用，成為研究的熱點
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種，通過乳化熱固化法用戊二醛為交聯固化劑，把絲裂霉素分子載在白蛋白分子上，制備成280 350nm白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯(STOP)使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應，得到具有靶向性和緩釋功能的抗膀胱癌藥物，本專利技術的抗膀胱癌藥物對膀胱癌有特異靶向性，降低了絲裂霉素的副作用，藥物對腫瘤細胞殺傷力強，藥效持久，且對正常組織細胞作用小。本專利技術的技術方案如下 ，其特征是藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)和絲裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛為交聯固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結合，制成粒徑為280 350納米的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應，得到分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BD1-1-MMC-NS。所述的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球的制備方法為 (al)用生理鹽水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O. 15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解絲裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液； (a2 )按照體積比，環己烷乳化劑MMC牛血白蛋白溶液為100:3. O 4. O: O. 5，把物料放入反應器中，用攪拌器攪拌均勻；用功率為200 400W的超聲波乳化15min，加入戊二醛飽和甲苯溶液，加入量按照環己烷的體積計算，環己烷戊二醛飽和甲苯溶液為100:2，在20 40°C下攪拌反應2h，反應完成后把反應器內的所有物料放入離心機，在2000 4000r/min的轉速下離心2min,棄去沉積的大微球,然后在500 800r/min轉速下離心3min，得到所需要的納米微球，用環己烷洗滌納米微球，洗滌后的納米微球加入丙酮和乙醇胺，常溫攪拌lh，過濾，所得固體用異丙醇洗滌，再用丙酮洗滌，最后用凍干機凍干，得到MMC-NS凍干粉，粒徑為280 350nm。所述的MMC-NS-PDP的制備方法為 (bl)用O.Olmol/L的無菌PBS緩沖溶液(即磷酸鹽緩沖溶液)溶解MMC-NS，使每毫升含MMC-NS 2 3mg，與SPDP無水乙醇溶液混合，常溫攪拌反應30min，投料摩爾比為SPDP:MMC-NS=20:1 ;用離心機離心，得到沉淀； (b2)用O. 01mol/L的無菌PBS緩沖溶液與沉淀混合均勻，用離心機離心，得到沉淀；(b3)重復步驟(b2)三次，以除去多余的SPDP，得到純凈的MMC-NS-PDP，用0. 02 mo I /L無菌PBS緩沖液溶解，配置成2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液。`所述的BD1-1-SH為BD1-1與SPDP反應，BD1-1分子引入吡啶二硫基(PDP)，得到BD1-1-PDP，然后用二硫蘇糖醇(DTT)還原得到巰基，即為BD1-1-SH。所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物(BD1-1-MMC-NS)的其制備方法，步驟為用0. 02 mo I / L無菌PBS緩沖液溶解BD1-1-SH，配置成每毫升含Img的BD1-1-SH，等體積加入b3步驟得到的2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液，在4 10°C下攪拌16 20h，然后在10000 15000r/min下離心30s 15min,取沉淀用0. 02 mo I / L無菌PBS離心洗漆3 4次，得到的沉淀物即為BD1-1-MMC-NS。所述的乳化劑為span40、span60、span80、span83和span85中的一種或它們的組合物。本專利技術的優點是1.本專利技術采用乳化熱好固化法，同時使用超聲乳化技術，得到的白蛋白載絲裂霉素粒徑為280 350nm，納米微球大小均勻，分散性好，表面光滑，對藥物的靶向特異性有非常積極的作用。2.本專利技術通過絲裂霉素與白蛋白偶聯固化，把絲裂霉素載在白蛋白上，使絲裂霉素緩慢釋放，使藥物的作用時間延長，減少副作用。3.本專利技術用抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)與白蛋白載絲裂霉素偶聯制成靶向藥物，使制成的藥物對腫瘤細胞的選擇性更強，絕大部分藥物只靶向結合膀胱癌細胞，釋放出絲裂霉素，殺死癌細胞，而不損害正常的膀胱粘膜細胞。附圖說明圖1為單個MMC-NS藥物放大20萬倍的掃描電鏡 圖2為形狀規則、分散性良好的MMC-NS藥物放大15萬倍掃描電鏡 圖3為MMC-NS藥物的粒徑分布圖，納米微球的粒徑測試結果粒徑=314. 18±31· 093nm ； 圖4為MMC-NS納米微球與EJ人膀胱癌細胞圖，從圖中看出，MMC-NS很少與EJ人膀胱癌細胞結合，掃描電鏡可見腫瘤細胞表面有豐富的突起和微絨毛； 圖5為靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物(BD1-1-MMC-NS)與EJ人膀胱癌細胞結合圖，從圖中看出，BD1-1-MMC-NS與EJ人膀胱癌細胞結合得很好，BD1-1-MMC-NS把腫瘤細胞大部分覆蓋了，掃描電鏡可見腫瘤細胞表面突起和微絨毛明顯減少，說明BD1-1-MMC-NS對腫瘤細胞有非常好的殺傷力。具體實施例方式實施例1 本專利技術的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備包括如下步驟 a.白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微本文檔來自技高網...
【技術保護點】
靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征是：藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體（BDI?1）和絲裂霉素（MMC），合成方法是用戊二醛為交聯固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結合，制成粒徑為280～350納米的白蛋白載絲裂霉素（MMC?NS）納米微球，然后用異型雙功能連接劑N?琥珀酰亞胺基?3?（2?毗啶基二琉）丙酸酯使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團，得到MMC?NS?PDP分子，最后MMC?NS?PDP與BDI?1?SH分子反應，得到分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BDI?1?MMC?NS。
【技術特征摘要】
1.靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征是藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)和絲裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛為交聯固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結合，制成粒徑為280 350納米的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應，得到分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BD1-1-MMC-NS。2.根據權利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征在所述的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球的制備方法為(1)用生理鹽水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O.15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解絲裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(2)按照體積比，環己烷乳化劑MMC牛血白蛋白溶液為100:3.O 4.0:0. 5，放入反應器中，用攪拌器攪拌均勻；用功率為200 400W的超聲波乳化15min，加入戊二醛飽和甲苯溶液，加入量按環己烷的體積比計算，環己烷戊二醛飽和甲苯溶液100:2，在20 40°C下攪拌反應2h，反應完成后的所有物料放入離心機，在2000 4000r/min的轉速下離心2min,棄去沉積的大微球,然后在500 800r/min轉速下離心3min,得到所需要的納米微球，用環己烷洗滌納米微球，洗滌后的納米微球加入丙酮和乙醇胺，常溫攪拌lh，過濾，所得固體用異丙醇洗滌，再用丙酮洗滌，最后用凍干機凍干，得到MMC-NS凍干粉，粒徑為280 350nmo3...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李云龍，周紅華，
申請(專利權)人：李云龍，周紅華，
類型：發明
國別省市：
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