一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法技術

一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，屬于生物技術領域。通過輕輕地倒轉瓶子約3次來混合樣品緩沖液；將滴管的口腔粘膜滲出液分配至試管中；然后取下一支由包所提供的潔凈拭子；立即將拭予放于盛有樣品緩沖液的管中；將拭子往復插入樣品緩沖液管中6-8次，靠住管壁摩擦拭子的兩側；從管中取出拭子；口腔粘膜滲出液現在已準備好用于檢測；轉移200μl此口腔粘膜滲出液到空試管；從罐中取出一個測定試條并立刻重新蓋好罐；避免用手觸及試條中央的膜表面；將測定試條置于含有200μl稀釋標本的管中，使測定試條上的箭頭指向下；記錄將測定試條加至樣品的時間；20分鐘以后讀取檢測結果；然后將試條、管和拭子棄于生物危險品廢物容器中。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及ー種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，屬于生物

技術介紹
人們已經開發了許多定性或定量檢測生物體組織和流體中各種分析物的分析方法。如一種診斷口腔疾病的試劑，選用孟加拉紅為染色劑，其與腫瘤細胞DNA多聚酶有親和力，其著色對口腔癌的診斷有特異性，其著色深淺度能鑒別口腔癌和癌前損害，制備出孟加拉紅口腔癌診斷試劑由以下原料構成碳酸氫鈉、甲醛或こ醇、孟加拉紅、蒸餾水，均按一定比例配制。ー種人唾液中變形鏈球菌和茸毛鏈球菌的檢測方法，首先是設計引物，所提供的套式聚合酶鏈式反應包括二次PCR，4對引物，變形鏈球菌兩對正反引物和茸毛鏈球菌兩對正反引物；其次是細菌染色體DNA及唾液染色體DNA提取；第三是第一次PCR，依次加入兩對引物，四種dNTP混合物及模板DNA和Taq酶；第四是第二次PCR，將第一次PCR產物稀釋，加入另外兩對引物，進行擴增；第五是電泳。收集口腔唾液用于檢測帶來相對較少的隱私侵犯，其相對安全，并可相對容易地快速完成。盡管通過上述檢測試條的分析法具有直接、快速且不需要復雜步驟的優點，但對于檢測對象而言，在整個檢測過程中都要咬合檢測試條是不方便的。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供ー種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，一種簡單、方便且有成本效益的用側向免疫層析試條的口腔粘膜滲出液收集方法，其適于靈敏和快速地檢測口腔粘膜滲出液中分析物。—種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，含有以下步驟；首先，通過輕輕地倒轉瓶子約3次來混合樣品緩沖液(以pH7. 2+/-0. 2磷酸鉀緩沖的 0. 15M氯化鈉、0. 1% Triton X-100、15%熱滅活雞血清、30 y g/ml 親合素、0. 2% Tween 80、0. 2% Tetronic T-904 和 0. 0285% (活性成分)ProClin 950)；從瓶子取下瓶蓋并將緩沖液充填到滴管中至刻線；將滴管的口腔粘膜滲出液分配至試管中；然后取下一支由包所提供的潔凈拭子；抓住拭子手柄，避免觸及拭子的織物端；隨后，施加適當壓力并輕柔地以拭子織物端來回地擦拭上齒齦線。在ロ的一角開始輕柔而緩慢地擦拭直至到達ロ的另一角，然后沿上齒齦線擦拭返回出發點，時間為5-6秒；然后轉動拭子以使用拭子的另ー側擦拭下齒齦；使用拭子的另ー側輕柔而緩慢地來回擦拭下齒齦線；在ロ的一角開始，在ロ的另一角結束，然后沿下齒齦線擦拭返回出發處，時間為5~6 秒；立即將拭予放于盛有樣品緩沖液的管中；緊握拭子手柄，將拭子往復插入樣品緩沖液管中6-8次，靠住管壁摩擦拭子的兩側；從管中取出拭子；口腔粘膜滲出液現在已準備好用于檢測；轉移200 U I此口腔粘膜滲出液到空試管；將使用以下的測定試條檢測此試樣；如果要對口腔粘膜滲出液進行多于ー個檢測試條的檢測，可將多個200 Ul試樣轉移到單個空試管；打開裝有測定試條的罐；從罐中取出一個測定試條并立刻重新蓋好罐；避免用手觸及試條中央的膜表面；將測定試條置于含有200 Ul稀釋標本的管中，使測定試條上的箭頭指向下；將計時器設定為20分鐘，或記錄將測定試條加至樣品的時間；20分鐘以后讀取檢測結果；然后將試條、管和拭子棄于生物危險品廢物容器中。本專利技術的優點是可容易地快速用于許多病癥的診斷，這些病癥需要對唾液中的分析物進行免疫檢測，特別容易 使用本專利技術的概念用于性傳播疾病檢測，比如丙肝抗體和こ肝抗體。具體實施例方式顯然，本領域技術人員基于本專利技術的宗g所做的許多修改和變化屬于本專利技術的保護范圍。實施例1 :使用本領域技術人員所知的方法，適用于本專利技術的測定試條可從任何來源包括天然，化學合成或重組生產而獲得。例如，優選的SEQ ID No.1至5的肽部分可使用固相肽合成技術化學合成，或通過可操作性將編碼期望肽的核酸連接到表達栽體中并在合適宿主中表達所述核酸而進行重組生產。一旦分離，可使用已知技術將所述肽生物素化。可使用任何本領域技術人員所知的方法將合適的抗原固定到基質，所述方法不破壞抗原對靶抗體的特異性結合。對于吸水性基質，使用本領域技術人員公知的技術，通常在封閉之前將復合物的鏈親合素偶聯到基質。優選地，在含有至少4:1比率的鏈親合素結合位點等價物對比每一生物素結構的溶液中實現偶聯，盡管其它比率比如0.5:1、1:1、2:1、3:1和5:1以及所有中間(分數)比率也包括在內，作為本專利技術的一部分。對于吸水性基質，最終復合物可簡單地施加到基質材料并干燥，隨后用用合適的封閉劑進行封閉。具有足夠高分子量而可以直接與基質結合的合適抗原比如很多重組蛋白不必通過生物素/鏈親合素連接子的方法來附著。在所述測定試條插入口腔粘膜滲出液之后15至60分鐘之間可觀察到標記物信號，更優選地在15至50分鐘之間，最優選地在20至45分鐘之間。在檢測開始之后早于15分鐘或遲于50分鐘讀取檢測結果可能給出錯誤的結果；通過如上所述的有色標記物產生的信號通常能不經進一歩處理而直接從檢測試條檢測到；熒光標記物可能需要熒光計進行檢測。在本領域技術人員所熟知的方法中，使用銀鹽溶液可增強由金屬溶膠標記物產生的信號；與之相似，當使用酶時，標記物必須與酶標記物的底物接觸，以產生可檢測產物。因此，這些增強方法偏離了采用有色顆粒標記物和溶膠進行的常規ー步法測定，因為在檢測標記物之前基質必需與顯像液(銀鹽或底物溶液)進行接觸。舉例說明根據本專利技術的一個優選實施方案的口腔粘膜滲出液快速免疫層析檢測的程序，為進行測試，以聚酯拭子擦拭對象的上下齒齦，然后將所述拭子置于試管中約IOOOu I唾液樣品緩沖液(pH 7. 2+/-0. 2磷酸鉀緩沖的0. 15M氯化鈉、0. l%Triton X-100、15% 熱滅活雞血清.30 u g/ml 親合素、0. 2%Tween 80,0. 2%Tetronic T-904 以及 0. 0285%(活性成分)ProClin 950)中并在試管中混合。壓出拭子中的流體并棄掉，將200 Ul此標本混合物轉移到潔凈試管以進行測定；將測定試條豎直地放入含有200 ii I標本混合物的試管中。當稀釋的標本沿測定試條向上遷移時，其使試條上微紅色蛋白G-膠體金試劑再水化，且標本中IgG與蛋白G-膠體金顆粒結合而形成IgG/偶聯物復合物。所述IgG/偶聯物復合物繼續沿試條向上遷移，首先到達測定試條的檢測區(所述檢測區含有能與抗HIV抗體結合的HIV抗原)并被固定于檢測區的抗原線上且出現微紅色的有色線；這指示反應性或陽性結果；線的強度并不與標本中存在的抗體量成比例。檢測區中缺少有色線指示標本不含有抗HIV抗體；IgG/偶聯物復合物繼續沿測定試條向上遷移直到其到達對照區；對照區含有固定于測定試條上線中的山羊抗人F(ab，)2IgG片段抗體。剰余的IgG/偶聯物復合物與固定化F(ab’)2片段結合，且出現微紅色的有色線；對照線的出現是檢測運行正常且含有IgG的證據；無論樣品對HIV-1或HIV-2的抗體是反應性的還是非反應性的，在進行所有有效的檢測期間微紅色對照線都將在對照區出現。標本繼續遷移經過對照區進入最終的吸收墊，所述吸收墊幫助拉動IgG/偶聯物復合物通過試條井清除任何背景顔色。在將測定試條引入稀釋標本中15分鐘但不超過60分鐘之后，對結果進行解釋；在檢測開始之后早于15分鐘或遲于60分鐘讀取檢本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，其特征在于含有以下步驟；首先，通過輕輕地倒轉瓶子約3次來混合樣品緩沖液，以pH7.2+/?0.2磷酸鉀緩沖的0.15M氯化鈉、0.l%?Triton?X?100、15%熱滅活雞血清、30μg/ml親合素、0.2%?Tween?80、0.2%?Tetronic?T?904和0.0285%活性成分，ProClin?950；從瓶子取下瓶蓋并將緩沖液充填到滴管中至刻線；將滴管的口腔粘膜滲出液分配至試管中；然后取下一支由包所提供的潔凈拭子；抓住拭子手柄，避免觸及拭子的織物端；隨后，施加適當壓力并輕柔地以拭子織物端來回地擦拭上齒齦線；在口的一角開始輕柔而緩慢地擦拭直至到達口的另一角，然后沿上齒齦線擦拭返回出發點，時間為5?6秒；然后轉動拭子以使用拭子的另一側擦拭下齒齦；使用拭子的另一側輕柔而緩慢地來回擦拭下齒齦線；在口的一角開始，在口的另一角結束，然后沿下齒齦線擦拭返回出發處，時間為5?6秒；立即將拭予放于盛有樣品緩沖液的管中；緊握拭子手柄，將拭子往復插入樣品緩沖液管中6?8次，靠住管壁摩擦拭子的兩側；從管中取出拭子；口腔粘膜滲出液現在已準備好用于檢測；轉移200μl此口腔粘膜滲出液到空試管；將使用以下的測定試條檢測此試樣；如果要對口腔粘膜滲出液進行多于一個檢測試條的檢測，可將多個200μl試樣轉移到單個空試管；打開裝有測定試條的罐；從罐中取出一個測定試條并立刻重新蓋好罐；避免用手觸及試條中央的膜表面；將測定試條置于含有200μl稀釋標本的管中，使測定試條上的箭頭指向下；將計時器設定為20分鐘，或記錄將測定試條加至樣品的時間；20分鐘以后讀取檢測結果；然后將試條、管和拭子棄于生物危險品廢物容器中。...

【技術特征摘要】
1.一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，其特征在于含有以下步驟；首先，通過輕輕地倒轉瓶子約3次來混合樣品緩沖液，以pH7. 2+/-0. 2磷酸鉀緩沖的O.15M 氯化鈉、O. 1% Triton X-100、15% 熱滅活雞血清、30 μ g/ml 親合素、O. 2% Tween 80、O.2% Tetronic T-904 和 O. 0285% 活性成分，ProClin 950 ；從瓶子取下瓶蓋并將緩沖液充填到滴管中至刻線；將滴管的口腔粘膜滲出液分配至試管中；然后取下一支由包所提供的潔凈拭子；抓住拭子手柄，避免觸及拭子的織物端；隨后，施加適當壓力并輕柔地以拭子織物端來回地擦拭上齒齦線；在口的一角開始輕柔而緩慢地擦拭直至到達口的另一角，然后沿上齒齦線擦拭返回出發點，時間為5-6秒；然后轉動拭子以使用拭子的另一側擦拭下齒齦；使用拭子的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉滿江，
申請(專利權)人：北京瑪諾生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：