本發明專利技術涉及生物檢測領域，尤其涉及應用免疫層析技術區分檢測兩種及兩種以上具有相似分子結構有機化合物的方法。本發明專利技術在免疫層析膜的兩個檢測區之間增加一個阻斷區，阻止了與前一檢測區反應的標記物-抗體/受體復合物進入下一檢測區出現交叉反應而導致的假陰性的發生，實現了用同一試紙條對兩種或兩種以上結構相似有機化合物的區分檢測。與現有技術相比，本方法在檢測分子結構相似有機化合物方面具有特異性更強的特點，實現了分子結構相似有機化合物的聯合檢測，既降低了檢測成本，又縮短了檢測時間。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測領域，尤其涉及應用免疫層析技術區分檢測兩種及兩種以上具有相似分子結構有機化合物的方法。
技術介紹
免疫層析技術是上世紀80年代初期的一種簡便快速檢測技術，由該技術制成的免疫層析試紙條通常由以下幾部分組成底板及粘貼在底板上的樣品墊、結合墊、纖維素膜、吸收墊等。由于該技術具有使用方便、快捷等特點，尤其適用于大批量樣品的快速篩查，已經廣泛應用于蛋白質、微生物、小分子(有機化合物)檢測領域。有機化合物(如抗生素)具有分子量小、分子結構簡單，抗原位點少的特點，所以在用免疫學方法對這些分子進行檢測時無法采用夾心法進行檢測，只能采用競爭法進行檢測。原材料的優劣、特別是抗原、抗體/受體質量的好壞將直接關系到用這些材料制備出來的免疫層析試紙條的靈敏性和特異性。而由于某些有機化合物的分子結構很相似，用現有生物技術制備出的有機化合物的抗體或受體，往往與兩種或兩種以上分子結構相似的有機化合物有交叉反應，用這種抗體/受體制成的免疫層析試紙條難以對分子結構接近的有機化合物進行區分檢測。以克倫特羅和沙丁胺醇為例，這兩種物質的分子結構非常相似，現有抗體制備技術制備出的克倫特羅抗體，除了能與克倫特羅發生反應外，還易與沙丁胺醇或沙丁胺醇-載體蛋白偶聯物發生反應，如果將此抗體機械地用于制備克倫特羅和沙丁胺醇聯檢免疫層析試紙條在檢測沙丁胺醇易出現假陰性，不能對分子結構相似的有機化合物進行區分檢測。
技術實現思路
本專利技術旨在提供一種可區分檢測兩種及兩種以上分子結構相似有機化合物的免疫層析試紙條的制備方法。I)本專利技術的一個技術方案是(為了便于說明，假定A和B是兩種分子結構相似的有機化合物)提供一種免疫層析試紙條，該試紙條由底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、標記物結合墊、免疫層析復合膜、吸水紙，標記物結合墊上含有標記物-A的抗體/受體復合物、標記物-B的抗體/受體復合物。如上所述的試紙條，其特征是在免疫層析復合膜上分別設有A檢測區、B檢測區，分別包被有A-載體蛋白偶聯物、B-載體蛋白偶聯物，A檢測區和B檢測區之間設有一個阻隔區。如上所述的試紙條，其特征是若A的抗體/受體易于與B-載體蛋白偶聯物發生交叉反應，則A檢測區靠近樣品墊一端、B檢測區遠離樣品墊，A檢測區和B檢測區之間的阻隔區包被能捕獲標記物-A的抗體/受體復合物的物質,能夠捕獲沒有被A檢測區捕獲的標記物-A的抗體/受體復合物。2)為了實現上述目的，本專利技術的另一個技術方案是(為了便于說明，假定A和B是兩種分子結構相似的有機化合物)提供一種檢測裝置，包括試紙條和反應杯兩部分試紙條包括底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、免疫層析復合膜、吸水紙；反應杯內含有標記物-A的抗體/受體復合物、標記物-B的抗體/受體復合物。如上所述的試紙條，其特征是在免疫層析復合膜上分別設有A檢測區、B檢測區，分別包被有A-載體蛋白偶聯物、B-載體蛋白偶聯物，A檢測區和B檢測區之間設有一個阻隔區。如上所述的試紙條，其特征是若A的抗體/受體易于與B-載體蛋白偶聯物發生交叉反應，則A檢測區靠近樣品墊一端、B檢測區遠離樣品墊，A檢測區和B檢測區之間的阻隔區包被能捕獲標記物-A的抗體/受體復合物的物質,能夠捕獲沒有被A檢測區捕獲的標記物-A的抗體/受體復合物。本專利技術在免疫層析膜的兩個檢測區之間增加一個阻斷區，阻止了與前一檢測區反應的標記物-抗體/受體復合物進入下一檢測區進行交叉反應而導致的假陰性的發生，實現了用同一試紙條對兩種或兩種以上結構相似有機化合物的區分檢測。與現有技術相比，本方法在檢測分子結構相似有機化合物方面具有特異性更強的特點，實現了分子結構相似有機化合物的聯合檢測，既降低了檢測成本，又縮短了檢測時間。附圖說明下面結合附圖對本專利技術做進一步說明。圖1是本專利技術中有標記物結合墊的免疫層析試紙條結構示意圖。圖2是本專利技術中無標記物結合墊的免疫層析試紙條結構示意圖。圖中1:樣品塾；2 :免疫層析復合I旲；3 :A檢測區；4 :阻斷區；5 :B檢測區；6 :吸水紙；7 :標記物結合墊。具體實施例方式盡管本專利技術的內容是結合本實例進行說明，但是不能認為是對本專利技術專利的限制，本專利技術的范圍由所附權利要求書限定。另外，本領域的技術人員在所附權利要求書限定的范圍內對本專利技術進行各種改動或修飾，這些改動或修飾形式同樣屬本專利技術的保護范圍。實施列I試紙條+反應杯模式聯檢試紙條的制備(瘦肉精三聯檢)I)試紙條的制備樣品墊的制備將纖維素膜剪成1. 5 X 30cm規格的條帶，備用；免疫層析復合膜的制備將硝酸纖維素膜剪成2. 5 X 30cm規格的條帶，在NC膜上依次(自樣品墊到吸水紙方向)噴涂萊克多巴胺-OVA偶聯物(lmg/ml)、克倫特羅-BSA偶聯物(lmg/ml)、抗克倫特羅抗體的抗體(10mg/ml)、沙丁胺醇-BSA偶聯物(lmg/ml),室溫晾干;吸水紙的制備將吸水紙裁成3. 5 X 30cm的條帶，備用；試紙條的組裝將吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊依次貼在PVC底板上，彼此之間有2_的搭接，隨后切成5_寬的試紙條，2-8°C干燥保存。2)反應杯的制備按照100 U L/孔的量，往96孔微孔板中加入膠體金標記的沙丁胺醇抗體、膠體金標記的萊克多巴胺抗體、膠體金標記的克倫特羅抗體混合液；冷凍干燥孔內的膠體金標記抗體；將凍干后的膠體金標記抗體置于干燥環境中保存。實施例2單一試紙條模式聯檢試紙條的制備(瘦肉精三聯檢)I)試紙條的制備樣品墊的制備將纖維素膜剪成1. 5 X 30cm規格的條帶，備用；標記物結合墊的制備按照10 U L/cm的量往玻璃纖維素膜上噴涂膠體金標記的沙丁胺醇抗體、膠體金標記的萊克多巴胺抗體、膠體金標記的克倫特羅抗體混合液，將噴涂好的玻璃纖維素膜置于室溫干燥，備用。免疫層析復合膜的制備免疫層析復合膜的制備將硝酸纖維素膜剪成2. 5X30cm規格的條帶，在NC膜上依次(自樣品墊到吸水紙方向)包被萊克多巴胺-BSA偶聯物(lmg/ml)、克倫特羅-BSA偶聯物(lmg/ml)、抗克倫特羅抗體的抗體(10mg/ml)、沙丁胺醇-OVA偶聯物(lmg/ml),室溫晾干；吸水紙的制備將吸水紙裁成3. 5 X 30cm的條帶，備用；試紙條的組裝將吸收墊、免疫層系復合膜、標記物結合墊、樣品墊依次貼在PVC底板上，彼此之間有2_的搭接，并切成5_寬的試紙條，2-8 °C干燥保存。實施例3沙丁胺醇、克倫特羅聯檢試紙條的制備I)試紙條的制備樣品墊的制備將纖維素膜剪成1. 5 X 30cm規格的條帶，備用；標記物結合墊的制備按照10 U L/cm的量往玻璃纖維素膜上噴涂膠體金標記的沙丁胺醇抗體、膠體金標記的克倫特羅抗體混合液，將噴涂好的玻璃纖維素膜置于室溫干燥，備用。免疫層析復合膜的制備免疫層析復合膜的制備將硝酸纖維素膜剪成2.5X 30cm規格的條帶，在NC膜上依次(自樣品墊到吸水紙方向)包被克倫特羅-BSA偶聯物(lmg/ml)、抗克倫特羅抗體的抗體(10mg/ml)、沙丁胺醇-BSA偶聯物(lmg/ml),室溫晾干;吸水紙的制備將吸水紙裁成3. 5 X 30cm的條帶，備用；試紙條的組裝將吸收墊、免疫層系復合膜、標記物結合墊、樣品墊依次貼在PVC底板上，彼此之間有2_的搭接，并切成5_寬的試紙條，2-8 °C干燥保本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種聯合檢測兩種或兩種以上具有相似分子結構有機化合物(以下各權項均假定A和B是兩種分子結構相似的有機化合物)的免疫層析裝置，包括底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、標記物結合墊、免疫層析復合膜、吸水紙，標記物結合墊上含有標記物?A的抗體/受體復合物、標記物?B的抗體/受體復合物，免疫層析復合膜上設有A檢測區、B檢測區，在A檢測區和B檢測區之間設有一個阻斷區。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱海，王西麗，李細清，李金峰，
申請(專利權)人：深圳市易瑞生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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