TORCH五項(xiàng)IgM抗體檢測(cè)試劑盒及其制備制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種病原微生物的檢測(cè)試劑，特別涉及一種TORCH五項(xiàng)IgM抗體檢測(cè)試劑盒及其制備，該試劑盒用于檢測(cè)樣本中TORCH五項(xiàng)，即弓形蟲（TOX）、風(fēng)疹病毒（RV）、巨細(xì)胞病毒（CMV）和單純性皰疹1型和2型病毒（HSV-I/II）的IgG類的抗體。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及ー種病原微生物的檢測(cè)試劑，特別涉及ー種TORCH五項(xiàng)IgM抗體(條帶免疫印跡法)檢測(cè)試劑盒及其制備方法。該試劑盒用于檢測(cè)樣本中TORCH五項(xiàng)，即弓形蟲(T0X)、風(fēng)疹病毒(RV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)和單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒(HSV-1/II)的IgG類的抗體。
技術(shù)介紹
TORCH指可導(dǎo)致先天性宮內(nèi)感染及圍產(chǎn)期感染，從而引起圍產(chǎn)兒畸形的ー組病原微生物的英文名稱縮寫，其中T (Toxopasma)是弓形蟲，R(Rubella. Virus)是風(fēng)疫病毒，C (Cytomegalo. Virus)是巨細(xì)胞病毒，H(Herpes. Virus)即是單純皰疫 I/II 型。TORCH 這組微生物感染有著共同的特征，均可造成母嬰感染。孕婦由于內(nèi)分泌改變和免疫力下降易發(fā)生原發(fā)感染，而既往感染的孕婦體內(nèi)潛在的病毒也容易被激活而發(fā)生復(fù)發(fā)感染。孕婦發(fā)生TORCH感染時(shí)，病毒可通過(guò)胎盤或產(chǎn)道傳播感染胎兒，引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎或畸胎等，以及引起新生兒多個(gè)系統(tǒng)、多個(gè)器官的損害，造成不同程度的智力障礙等癥狀。TORCH的感染與優(yōu)生優(yōu)育有重要而密切的關(guān)系。弓形蟲(TOX):孕早期弓形蟲感染引起的胎兒畸形主要包括腦積水、小腦畸形、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎及腦鈣化。血行感染可引起胎兒多器官壞死性損害，如肝脾腫大、心肌炎及血小板減少癥等。風(fēng)疹病毒(RV):主要通過(guò)呼吸道傳播，孕婦感染后能使胎兒致畸，病毒通過(guò)胎盤感染胎兒形成先天性感染，稱為先天性風(fēng)疹綜合癥(CRS)，主要是先天性白內(nèi)障、先天性心臟病和神經(jīng)性耳聾，20周后感染者幾乎無(wú)影響。風(fēng)疹感染發(fā)生在孕期越早，胎兒的致畸也越嚴(yán)重。巨細(xì)胞病毒(CMV):感染后能引起宮內(nèi)胎兒生長(zhǎng)遲緩、小頭形、腦炎、視網(wǎng)膜脈膜炎、黃疸、肝脾腫大、溶血性貧血等，新生兒死亡率較高，圍產(chǎn)期母乳排毒所致的CMV感染率為 63%。單純皰疹病毒(HSV I/II型)通常潛伏在神經(jīng)節(jié)，妊娠時(shí)母體的生理變化使HSV活化，孕早期感染能破壞胚芽面導(dǎo)致流產(chǎn)，孕中晩期雖少發(fā)畸胎，但可引起胎兒和新生兒發(fā)病。因此，為減少病殘兒的出生率及提高出生人口素質(zhì)，臨床工作者應(yīng)進(jìn)一歩加強(qiáng)對(duì)孕婦的宣傳教育，積極做好TORCH感染的血清學(xué)篩查以便及早發(fā)現(xiàn)不良妊娠并及時(shí)處理；對(duì)新生兒也應(yīng)常規(guī)開展TORCH檢測(cè)，了解新生兒TORCH感染情況，以便早干預(yù)、早治療。TORCH感染的篩查對(duì)優(yōu)生優(yōu)育具有重要現(xiàn)實(shí)意義。TORCH五項(xiàng)中IgG類抗體為TORCH既往感染或感染期的重要指標(biāo)；IgM為早期感染指標(biāo)，胎盤中特異性IgM的檢測(cè)是診斷胎兒宮內(nèi)感染的可靠依據(jù)；而TORCH五項(xiàng)中IgG抗體和IgM抗體的聯(lián)合檢測(cè)，是判斷TORCH早期感染或既往感染的重要方法。我國(guó)常用ELISA酶聯(lián)免疫技術(shù)或金標(biāo)快速檢測(cè)技術(shù)分別檢測(cè)TOCRH五項(xiàng)IgM或IgG類抗體，但該方法的檢測(cè)結(jié)果易受到類風(fēng)濕因子等方面的干擾，缺乏精確度。免疫印跡法是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為ー抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。其原理是經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。目前應(yīng)用條帶免疫印跡技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)TOCRH五項(xiàng)IgM或IgG類抗體的方法未見報(bào)道，本專利技術(shù)經(jīng)過(guò)研究，用條帶免疫印跡法測(cè)定TOCRH五項(xiàng)IgM或IgG類抗體，精確度高，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，無(wú)干擾，價(jià)格便宜。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供ー種高靈敏度、高特異性、質(zhì)量穩(wěn)定，操作方面，價(jià)格便宜并能滿足TORCH五項(xiàng)IgM類抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法。本專利技術(shù)的TORCH五項(xiàng)IgM抗體(條帶免疫印跡法)檢測(cè)試劑盒,包含以下試劑I)包被有TORCH五項(xiàng)IgM類抗體的總裂解抗原的檢測(cè)試劑條，2)樣本稀釋液，3)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的酶工作液，4)顯色劑 A，5)顯色劑 B，6) 20倍濃縮洗液。其中I)所述檢測(cè)試劑條，所用材料包括載體板,如PVC等材質(zhì)類載體板,硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜，弓形蟲(TOX)裂解抗原、風(fēng)疹病毒(RV)裂解抗原、巨細(xì)胞病毒(CMV)裂解抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒(HSV-1/II)裂解抗原、抗人IgM等TORCH原料配制成包被液制成的5條包被線。其中所述檢測(cè)試劑條的制備方法包括以0. OlM pH7. 2-7. 4的磷酸鹽緩沖液作為包被稀釋液，將弓形蟲裂解抗原、風(fēng)疹病毒裂解抗原、巨細(xì)胞病毒裂解抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒裂解抗原、抗人IgM稀釋到0. 5-5mg/ml，然后在硝酸纖維素膜或PVDF膜上依次劃線包被將包被膜凍干或晾干，然后粘貼在PVC材質(zhì)類載體板上制成包被膜，然后切成3-5mm寬的檢測(cè)試劑條，包被劃線速度l-2ul/cm。其制備方法包括I)包被原料選擇選擇合適濃度和效價(jià)的IgG類弓形蟲(TOX)裂解抗原和特異性重組抗原、風(fēng)疹病毒(RV)裂解抗原和特異性重組抗原、巨細(xì)胞病毒(CMV)裂解抗原和特異性重組抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒(HSV-1/II)裂解抗原和特異性重組抗原、人IgG抗體等原料。2)包被膜制備以0. OlM pH7. 2-7. 4的磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)作為包被稀釋液，將5項(xiàng)TORCH包被原料稀釋成合適的工作濃度，然后在硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜上依次劃線包被質(zhì)控檢測(cè)線(C線)抗人IgM、檢測(cè)線弓形蟲(TOX)裂解抗原、風(fēng)疹病毒(RV)裂解抗原、巨細(xì)胞病毒(CMV)裂解抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒(HSV-1/II)裂解抗原共5條包被線，將包被膜凍干或晾干，然后粘貼在PVC等材質(zhì)類載體板上制成包被膜，然后切成3-5_寬的檢測(cè)試劑條，即制備成檢測(cè)試劑條。祥見附圖1:所述包被液工作濃度可為0. 5_5mg/ml，包被劃線速度l-2ul/cm。其中2)所述的樣本稀釋液其配方組成如下磷酸ニ氫鈉0.59g 磷酸氫ニ鈉5.8g 氯化鈉9.00g 硫柳汞鈉0.2g BSA0.05-2g純化水加至IOOOml調(diào)pH 值為 7. 2-7. 4其中3)所述的酶工作液配方組成如下選擇特異性的抗 抗人IgM (如抗人IgM特異性片段ii鏈)的單克隆抗體,用過(guò)碘酸鈉法標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，制成原酶，ELISA效價(jià)> 1:5000。配制酶工作液稀釋液 磷酸ニ氫鈉0.59g 磷酸氫ニ鈉5.8g氯化鈉9.00g硫柳汞鈉0.2gBSA0.05-2g酶穩(wěn)定劑0.5-2%純化水加至IOOOml調(diào)pH 值為 7. 2-7. 4配制酶工作液將原酶用酶工作液稀釋液稀釋至合適的濃度即得酶工作液。如終濃度濃度為1:2000 1:4000 (v:v)的酶工作液。其中4)所述顯色劑A的配方組成如下檸檬酸5. OOgNa2HP04 12H2017.45gH202 (30%)Iml純化水加至IOOOml其中5)所述顯色劑B的配方組成如下檸檬酸5. OOgNa2HP04 12H2017.45gTMB 2HCL0本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種TORCH五項(xiàng)IgM抗體檢測(cè)試劑盒，包含以下試劑：1）包被有TORCH五項(xiàng)IgM類抗體的總裂解抗原的檢測(cè)試劑條，2）樣本稀釋液，3）標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的酶工作液，4）顯色劑A，5）顯色劑B，6）20倍濃縮洗液。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種TORCH五項(xiàng)IgM抗體檢測(cè)試劑盒，包含以下試劑 1)包被有TORCH五項(xiàng)IgM類抗體的總裂解抗原的檢測(cè)試劑條， 2)樣本稀釋液， 3)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的酶工作液， 4)顯色劑A， 5)顯色劑B， 6)20倍濃縮洗液。2.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試劑盒，其中所述檢測(cè)試劑條，所用材料包括載體板，硝酸纖維素膜或PVDF膜，弓形蟲裂解抗原、風(fēng)疹病毒裂解抗原、巨細(xì)胞病毒裂解抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒裂解抗原、抗人IgM。3.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試劑盒，其中所述檢測(cè)試劑條的制備方法包括 以O(shè). OlM pH7. 2-7. 4的磷酸鹽緩沖液作為包被稀釋液，將弓形蟲裂解抗原、風(fēng)疹病毒裂解抗原、巨細(xì)胞病毒裂解抗原、單純性皰疹I(lǐng)型和2型病毒裂解抗原、抗人IgM稀釋到·O.5-5mg/ml，然后在硝酸纖維素膜或PVDF膜上依次劃線包被將包被膜凍干或晾干，然后粘貼在PVC材質(zhì)類載體板上制成包被膜，然后切成3-5mm寬的檢測(cè)試劑條，包被劃線速度l-2ul/cm。4.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試劑盒,其中2)所述的樣本稀釋液其配方組成如下磷酸二氫鈉O Wg 磷酸氫二鈉5.8g氯化鈉9.00g 硫柳萊鈉0.2gBSA0.05-2g純化水加至IOOOml調(diào) pH 值為 7. 2-7.4。5.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試劑盒，其中3)所述的酶工作液配方組成如下 選擇特異性的抗人IgM的單克隆抗體，用過(guò)碘酸鈉法標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶，制成原酶，ELISA 效價(jià)≥ 1:5000， 配制酶工作液稀釋液磷酸二氫鈉0.59g 磷酸氫二鈉5.8g 氯化鈉9.00g 硫柳萊納0.2g BSA0.05-2g 酶穩(wěn)定劑0.5-2%純化水加至IOOOml 調(diào)PH值為7. 2-7. 4 將原酶用酶工作液稀釋液稀釋至合適的濃度即得酶工作液。6.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試劑盒， 其中4)所述顯色劑A的配方組成如下 朽1檬酸5. OOg Na2HP04 · 1...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李艷召，戈軍，曹建榮，張誌，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京金豪制藥股份有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：