本發(fā)明專利技術(shù)涉及口腔流體快速免疫層析檢測(cè)。更具體地，本發(fā)明專利技術(shù)涉及與用于檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析試條相分離的口腔流體收集拭子，其基本上由樣品墊、偶聯(lián)物墊、檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊組成，所述墊由至少一種基質(zhì)材料制成，其中所述偶聯(lián)物墊位于所述樣品墊下游，并且用偶聯(lián)物在其上劃條紋；檢測(cè)和對(duì)照區(qū)墊位于偶聯(lián)物墊下游，其中所述檢測(cè)區(qū)固定有與靶分析物特異性結(jié)合的特異性結(jié)合試劑；檢測(cè)區(qū)下游的對(duì)照區(qū)固定有第二捕獲試劑。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及生產(chǎn)所述試條的方法、通過(guò)使用所述試條檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析方法、以及包含此試條的試劑盒。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
口腔流體快速免疫層析檢測(cè)本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00580049809.2、專利技術(shù)名稱為“口腔流體快速免疫層析檢測(cè)”的中國(guó)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，該母案申請(qǐng)是2005年5月20日提交的PCT國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/CN2005/000701進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段的申請(qǐng)。
本專利技術(shù)涉及口腔流體快速免疫層析檢測(cè)。更具體地，本專利技術(shù)涉及用于檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條，收集口腔流體標(biāo)本的方法，生產(chǎn)所述試條的方法、通過(guò)使用該試條檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析方法、以及含有此試條的試劑盒。
技術(shù)介紹
人們已經(jīng)開發(fā)了許多定性或定量檢測(cè)生物體組織和流體中各種分析物的分析方法。當(dāng)前多數(shù)診斷檢測(cè)是采用血液、尿、糞便、活組織檢查或口腔流體。與其它物質(zhì)相比，收集口腔流體唾液和/或口腔粘膜滲出物用于檢測(cè)帶來(lái)相對(duì)較少的隱私侵犯，其相對(duì)安全，并可相對(duì)各易地快速完成。迄今，為開發(fā)用于口腔流體的收集、傳送和樣品處理的測(cè)試條以及為開發(fā)基于口腔流體的分析，尤其是對(duì)各種抗體和代謝物的分析，人們已付出了很多努力。例如，W088/07680公開了通過(guò)復(fù)雜的放射免疫分析法(RIA)、酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)等定性或定量檢測(cè)人或動(dòng)物體液(選自唾液、眼淚、精液、尿和腦脊液)中特定IgM, IgG和IgA的存在或其量的方法，所述方法相對(duì)難以進(jìn)行，費(fèi)時(shí)且花費(fèi)多。美國(guó)專利N0.5，103,836公開了一種從口腔收集物質(zhì)用于檢測(cè)的方法，其包括以下步驟:將以高滲鹽溶液浸透的吸收墊插入口腔，其中高滲溶液的鹽在墊中的濃度可以有效地從口腔中回收高濃度的所述物質(zhì)；從口腔中移除所述墊；保存該墊以隨后從墊中取出所收集物質(zhì)用于ELISA。在本公開文件中公開的吸收墊需要用高滲溶液預(yù)處理以提供高濃度的分析物，且再次使用復(fù)雜的ELISA來(lái)檢測(cè)分析物。美國(guó)專利N0.6，303，081公開了用于從口腔收集和轉(zhuǎn)運(yùn)水性流體到用于檢測(cè)的側(cè)向?qū)游鲈嚄l的檢測(cè)試條。側(cè)向?qū)游鲈嚄l置于外罩(housing)內(nèi)并沿外罩中限定的腔伸展。向所述側(cè)向?qū)游鲈嚄l提供至少一個(gè)檢視(inspection)部位以實(shí)現(xiàn)在側(cè)向?qū)游鲈嚄l上所選部位檢視測(cè)試結(jié)果。多孔芯條(wick)材料在一端從所述外罩伸出到外罩外部的收集部位，在另一端與所述側(cè)向?qū)游鲈嚄l相通。所述多孔芯條材料具有微粒構(gòu)造，所述微粒吸附水性口腔流體以將該流體從口傳送到所述側(cè)向?qū)游鲈嚄l而基本上沒(méi)有吸收。該多孔芯條材料容易將口腔流體釋放到側(cè)向?qū)游鲈嚄l。由于該多孔芯條材料的迂回流路，自然防止從側(cè)向?qū)游鲈嚄l到口腔的反向流動(dòng)。咬合板(bite plate)與所述外罩相連并可插入患者牙齒間以將多孔芯條定位于口腔中來(lái)收集口腔流體。所述咬合板通常通過(guò)牙齒咬合力(occlusalforce)被保持在適當(dāng)位置以將多孔芯條定位于口腔空間中。當(dāng)檢測(cè)試條在口中時(shí)，通過(guò)觀察側(cè)向?qū)游鲈嚄l迅速得到檢測(cè)結(jié)果。在美國(guó)專利申請(qǐng)N0.2002/0192839、美國(guó)專利申請(qǐng)N0.2002/0155029中均公開了用于一步收集口腔流體以檢測(cè)和/或定量口腔流體中分析物的改進(jìn)的檢測(cè)試條和方法，這些專利或申請(qǐng)的內(nèi)容均以其整體通過(guò)參考并入本文。盡管通過(guò)上述檢測(cè)試條的分析法具有直接、快速且不需要復(fù)雜步驟的優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)于檢測(cè)對(duì)象而言，在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中都要咬合檢測(cè)試條是不方便的。此外，對(duì)于具有“無(wú)效”指示的分析，在無(wú)效結(jié)果需要重新檢測(cè)時(shí)，或者對(duì)于比如HIV這樣的常規(guī)需要對(duì)收集標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)的診斷檢測(cè)而言，對(duì)象將不得不一而再再而三地為檢測(cè)而咬合檢測(cè)試條。然而，應(yīng)當(dāng)指出，在初次收集后長(zhǎng)達(dá)一小時(shí)，口腔粘膜滲出物的收集通常減少口腔組織表面可得的富含IgG的滲出物，這將使隨后收集以使用“一站式樣品收集器/檢測(cè)組合”重新檢測(cè)不夠方便，因?yàn)闄z測(cè)對(duì)象必須等到滲出物水平更高，否則用樣品來(lái)檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)可能會(huì)有更低的靈敏度(R.Mink,未出版數(shù)據(jù))。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)是謹(jǐn)記現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺點(diǎn)而做出的，本專利技術(shù)的一個(gè)目的是提供一種簡(jiǎn)單、方便且有成本效益的用側(cè)向免疫層析試條的口腔流體收集方法，其適于靈敏和快速地檢測(cè)口腔流體中分析物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供一種生產(chǎn)所述側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條的方法。本專利技術(shù)的另外一個(gè)目的是提供一種適于靈敏和快速地檢測(cè)口腔流體中分析物的靈敏方法。本專利技術(shù)的另外一個(gè)目的是提供用于靈敏和快速地檢測(cè)口腔流體中分析物的試劑盒。因此，在第一個(gè)方面，本專利技術(shù)提供一種用于檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條，其基本上由樣品墊、偶聯(lián)物墊、檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊組成，所述墊由至少一種基質(zhì)材料制成，其中所述偶聯(lián)物墊位于樣品墊的下游且其上用偶聯(lián)物劃條紋，所述檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊位于該偶聯(lián)物墊的下游且包含檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)，其中檢測(cè)區(qū)固定有特異性結(jié)合試劑，所述特異性結(jié)合試劑特異性地與靶分析物結(jié)合；且對(duì)照區(qū)固定有第二捕獲試劑。在此方面的一個(gè)實(shí)施方案中，待檢測(cè)分析物選自抗以下抗原的抗體:傳染性疾病、激素、生長(zhǎng)因子、治療藥物、濫用藥物及濫用藥物的代謝產(chǎn)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述基質(zhì)材料選自無(wú)機(jī)粉末，比如二氧化硅和氧化鋁；玻璃纖維濾紙；天然聚合材料尤其是基于纖維素的材料、層析紙；合成或改性的天然聚合物比如硝酸纖維素、醋酸纖維素、聚氯乙烯、聚丙烯酰胺、交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖；以及其組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，樣品墊的基質(zhì)材料為玻璃纖維濾紙；偶聯(lián)物墊的基質(zhì)材料為聚酯材料；檢測(cè)墊和對(duì)照墊的基質(zhì)材料為硝酸纖維素膜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，偶聯(lián)物包含與第一捕獲試劑偶聯(lián)的標(biāo)記物，所述第一捕獲試劑捕獲口腔流體中內(nèi)源性抗體。所述標(biāo)記物選自膠體金顆粒；元素或金屬溶膠顆粒，包括硒、銀、鐵或碳；其它珠狀顆粒，包括有色乳膠、脂質(zhì)體和染料顆粒。優(yōu)選地，所述標(biāo)記物為膠體金顆粒。在另一個(gè)實(shí)施方案中,所述第一捕獲試劑選自:抗IgG、IgM或IgA的抗體,蛋白A,蛋白G和伴刀豆球蛋白A。優(yōu)選地，所述第一捕獲試劑為蛋白A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述特異性結(jié)合試劑選自以下的抗原:傳染性疾病、激素、生長(zhǎng)因子、治療藥物、濫用藥物及濫用藥物的代謝產(chǎn)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，傳染性疾病的抗原為代表HIV蛋白免疫決定區(qū)的重組或合成肽，所述HIV蛋白尤其是選自HIV-1的gpl20和gp41以及HIV-2的gp36的HIV包膜蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二捕獲試劑選自:抗IgG、IgM或IgA的抗體、蛋白A、蛋白G和伴刀豆球蛋白A，其中所述抗IgG的抗體為山羊抗人IgG抗體。在第二個(gè)方面，本專利技術(shù)提供生產(chǎn)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所定義的側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條的方法，其包括:a)將偶聯(lián)物在偶聯(lián)物墊上劃條紋；b)將所述特異性結(jié)合試劑固定到檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊的檢測(cè)區(qū)上；c)將第二捕獲試劑固定于檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊的對(duì)照區(qū)上；d)用封閉劑封閉所述每個(gè)墊；以及e)對(duì)齊所得墊使得相互之間流體連通。在一個(gè)實(shí)施方案中，在劃條紋之前，偶聯(lián)物在簡(jiǎn)單或復(fù)合糖溶液中被穩(wěn)定化，其中所述糖溶液包含蔗糖、海藻糖、錫酸鉀以及過(guò)氧化氫脲。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用生物素/鏈親合素連接子將所述特異性結(jié)合試劑固定于檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)上。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用生物素/鏈親合素連接子將所述特異性結(jié)合試劑固定于對(duì)照區(qū)上。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述封閉劑包含非離子型、陽(yáng)離子型、陰離子和兩性離子型的去污劑；糖，包括蔗糖、果糖；或蛋白質(zhì)，包括牛血清白蛋本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條，其基本上由樣品墊、偶聯(lián)物墊、檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊組成，所述墊由至少一種基質(zhì)材料制成，其中所述偶聯(lián)物墊位于所述樣品墊的下游，并且用偶聯(lián)物在其上劃條紋；所述檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊位于偶聯(lián)物墊的下游，且含有檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)，其中所述檢測(cè)區(qū)固定有特異性結(jié)合靶分析物的特異性結(jié)合試劑；且所述對(duì)照區(qū)固定有第二捕獲試劑。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于檢測(cè)口腔流體中分析物的側(cè)向流免疫層析檢測(cè)試條，其基本上由樣品墊、偶聯(lián)物墊、檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊組成，所述墊由至少一種基質(zhì)材料制成，其中 所述偶聯(lián)物墊位于所述樣品墊的下游，并且用偶聯(lián)物在其上劃條紋； 所述檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)墊位于偶聯(lián)物墊的下游，且含有檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)，其中 所述檢測(cè)區(qū)固定有特異性結(jié)合靶分析物的特異性結(jié)合試劑；且 所述對(duì)照區(qū)固定有第二捕獲試劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試條，其中所述待檢測(cè)的分析物選自抗以下之抗原的抗體:傳染性疾病、激素、生長(zhǎng)因子、治療藥物、濫用藥物及濫用藥物的代謝產(chǎn)物。3.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試條，其中所述基質(zhì)材料選自無(wú)機(jī)粉末，比如二氧化硅和氧化鋁；玻璃纖維濾紙；天然聚合材料尤其是基于纖維素的材料、層析紙；合成或改性的天然聚合物比如硝酸纖維素、醋酸纖維素、聚氯乙烯、聚丙烯酰胺、交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖；以及其組合。4.根據(jù)權(quán)利要求3的檢測(cè)試條，其中所述用于樣品墊的基質(zhì)材料是玻璃纖維濾紙。5.根據(jù)權(quán)利要求3的檢測(cè)試條，其中所述用于偶聯(lián)物墊的基質(zhì)材料是聚酯材料。6.根據(jù)權(quán)利要求3的檢測(cè)試條，其中所述用于檢測(cè)墊和對(duì)照墊的基質(zhì)材料是硝酸纖維素膜。7.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)試條，其中所述偶聯(lián)物包含與第一捕獲試劑偶聯(lián)的標(biāo)記物，所述第一捕獲試劑捕獲口腔流體的內(nèi)源性抗體。8.根據(jù)權(quán)利要求7的檢測(cè)試條，其中所述標(biāo)記物選自膠體金顆粒；元素或金屬溶膠顆粒，包括硒、銀、鐵或碳；其它珠狀顆粒，包括有色乳膠、脂質(zhì)體和染料顆粒。9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的檢測(cè)試條，其中所述標(biāo)記物是膠體金顆粒。10.根據(jù)權(quán)利要求7的檢測(cè)試條，其中所述第一捕獲試劑選自抗IgG、IgM或IgA的抗體，蛋白A,蛋白G和伴刀?球蛋白Α。11.根據(jù)權(quán)利要求8的檢測(cè)試條，其中所述第一捕獲試劑是蛋白Α。12...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：約翰·邁克爾·恩尼斯，保羅·羅伯特·史密斯，羅納德·威廉·明克，詹姆斯·理查德·喬治，托比·德沃拉赫·戈特弗里德，格倫·邁克爾·福德，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京瑪諾生物制藥有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京;11
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