本發明專利技術涉及一種利用HNF1B熒光探針制備的熒光原位雜交檢測試劑盒，還涉及HNF1B熒光探針的制備方法，本發明專利技術的HNF1B熒光探針及相應的試劑盒可用于卵巢透明細胞癌診斷和治療方案選擇。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種利用HNFlB熒光探針制備的熒光原位雜交檢測試劑盒，還涉及HNFlB熒光探針的制備方法，本專利技術的HNFlB熒光探針及相應的試劑盒可用于卵巢透明細胞癌診斷和治療方案選擇。
技術介紹
卵巢癌(ovarian cancer)是女性生殖器官常見的腫瘤之一,發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。卵巢癌的病因尚不清楚，其發病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環境等有關。卵巢癌臨床早期無癥狀，鑒別其組織類型及良惡性相當困難，目前為止，臨床資料統計 五年生存率僅25% 30%。卵巢癌是相對常見的病，大約有1. 4%的女性會患上這種病。發現早，90 %的病人都能活下來；發現遲，癌細胞擴散到卵巢，存活率低于30 %。卵巢透明細胞癌(Ovarian clear cell carcinoma, OCCA)占卵巢癌的5% 11 %,發病平均年齡58歲，與子宮內膜異位癥的關系密切，在病變的卵巢中合并子宮內膜異位癥達24%左右，而同時存在盆腔子宮內膜異位癥病變的達25% 50%左右，這在其他卵巢上皮性癌中是少見的。卵巢透明細胞癌為惡性腫瘤，預后較其它分型更差，與臨床分期有密切關系。卵巢癌檢查有幾種方法，包括細胞學診斷、超聲波檢查、免疫學檢查等，但均不十分成功。目前而言，卵巢惡性腫瘤標志物的敏感性和特異性均不能滿足早期診斷的需要，多用來檢測治療中和/或治療后的病情變化，為評定療效和及時發現腫瘤復發提供依據。肝細胞核因子-1 (HNFI homeobox B, HNF1B)位于17號染色體長臂I區2帶，編碼一種包含同源結構域的轉錄因子超家族成員，編碼蛋白與DNA結合形成同源二聚體，或與 HNFla (hepatocyte nuclear factor1-alpha)結合形成異質二聚體。轉錄因子 HNFlB對胰腺細胞形成和維持血糖穩態具有重要作用。基因突變會導致腎囊腫和非胰島素依賴型糖尿病或稱為第二型糖尿病，在一些癌癥中該基因的表達會發生改變。目前有研究表明，HNFlB是卵巢透明細胞癌的生物標志物，可有效區分透明細胞癌與其它病變類型。臨床研究中通過RNA干擾該基因表達，能達到細胞凋亡目的，使該基因在治療方面有廣闊的應用前景。[Jin L, et al. Regulation of tissue-specific expression of renal organicanion transporters by hepatocyte nuclear factor I a /β and DNA methylation.JPharmacol Exp Ther, 2012Mar ;Stanislas Faguer, et al. Diagnosis, management, andprognosis ofHNFIB nephropathy in adulthood. Kidney International80,768-776 ;Berndt SI,Sampson J,Yeager M,et al. Large-scale fine mapping of the HNFlB locusand prostate cancer risk.Hum Mol Genet.201IAug 15 ；20 (16) :3322-9 ;Brimo F,Herawi M, Sharma R, et al. Hepatocyte nuclear factor-1β expression in clear celladenocarcinomas of the bladder and urethra diagnostic utility and implicationsfor histogenesis. Kim HJ, Bae JS, Lee J, et. al. HNFlBpolymorphism associatedwith development of prostate cancer in Korean patients. Hum Pathol. 201INov ；42(11) :1613-9. Urology. 201IOct ；78 (4) :969. el_6 ;Sohei Yamamoto，Hitoshi Tsuda，Shinsuke Aida, et, al.1mmunohistochemical detection of hepatocyte nuclearfactorIβ in ovarian and endometrial clear-cell adenocarcinomas and nonneoplasticendometrium. Human Pathology Vol. 38.1ssue 7，1074—1080 ；K. Yamaguchi，M. Mandai，T. Oura，N. Matsumura，J. Hamanishi and T. Baba et al.，Identification of an ovarianclear cell carcinoma gene signature that reflects inherent disease biology andthe carcinogenic processes, Oncogene 29(2010), pp.1741-1752.]目前試驗室檢測方法常見的有基于免疫組化的表達分析和基于熒光定量PCR方法(FQ-PCR)或測序技術的突變及缺失分析。 綜上，HNFlB因其在卵巢透明細胞癌中的特異表達特征，有望作為腫瘤鑒別分型和靶向治療的新靶標。但該基因的檢測方法目前僅停留在試驗室階段，市場無靈敏度高、特異性好的檢測試劑。熒光原位雜交技術基于堿基互補原則，用已知序列標記DNA探針與載玻片上的待測DNA/RNA互補雜交，在熒光顯微鏡下檢測雜交信號判斷結果。FISH技術將細胞遺傳學和分子生物學改變聯系起來，讓微小的基因改變顯現于肉眼之下，拓展了細胞遺傳學檢測的范圍，顯著提高了其識別異常染色體的能力。目前已被廣泛應用于腫瘤研究中的基因擴增、易位重排及缺失等檢測。本專利技術利用熒光原位雜交技術，以HNFlB基因區段為靶標，設計并制備熒光探針。利用探針實現對HNFlB基因狀態的檢測，有助于卵巢透明細胞癌鑒別分型和治療方案制定，從而達到早鑒別早治療，提高診療效果。本專利技術提供了一種卵巢透明細胞癌分子標志物HNFlB探針的制備方法，并在此基礎上利用探針自主研制了 HNFlB基因檢測試劑盒，填補了國內該檢測領域的空白，具有十分重大的意義。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是提供HNFlB基因探針(GSP HNF1B)和作為內控的用于17號染色體鑒別的17號染色體著絲粒探針(CSP17)的制備方法。根據本專利技術一個優選的實施方案，GSP HNFlB的制備步驟包括(I)克隆篩選通過NCBI Mapview數據庫檢索所有含有HNFlB (17ql2)基因的克隆，并對這些克隆進行篩選，選擇最優的克隆。(2)克隆培養和鑒定按照篩選確定的克隆編號購買相應的克隆，取100 μ I克隆菌液加入至500ml的TB培養液(氯霉素抗性)中，3本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種輔助卵巢透明細胞癌診斷和治療方案選擇的HNF1B基因狀態熒光原位雜交檢測試劑盒，包括：1)雜交緩沖液、熒光標記探針混合物、未標記的競爭性DNA、DAPI復染劑，和2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其特征在于熒光標記探針混合物包含GSPHNF1B探針和17號染色體著絲粒探針，每人份熒光標記探針混合物中GSP?HNF1B和CSP17探針的使用量均為0.5μl。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李明，何瑰，陳華云，
申請(專利權)人：中山大學達安基因股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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