一種AKT3基因突變檢測特異性引物和液相芯片制造技術

本發明專利技術公開了一種AKT3基因突變檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對G171R位點的SEQ?ID?NO.7及SEQ?ID?NO.8；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發明專利技術所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現突變位點的野生型和突變型并行檢測。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種AKT3基因突變檢測特異性引物和液相芯片。
技術介紹
AKT是病毒癌基因v-akt的人類同源基因，編碼絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶，在PI3K相關的信號通路中起重要的作用，影響細胞的生存、增殖和侵襲，參與包括細胞凋亡和葡萄糖·代謝在內的細胞過程。目前研究表明，在肺癌和乳腺癌中，AKT基因激活與化療藥物抗性顯著相關，AKT3基因的療效相關突變主要有G171R，G171R(511G>A)突變是第171位的密碼子編碼的甘氨酸突變為精氨酸，AKT3基因突變已成為藥效研究的熱點。目前，對AKT3基因突變進行檢測和分析的方法很少，主要有直接測序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突變造成的限制性內切酶識別位點的改變，如位點丟失或產生新位點，通過PCR擴增某一特定片段，再用限制性內切酶酶切擴增產物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測酶切位點改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒有產生新酶切位點的基因突變檢測。再次，以上這些方法都存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實際應用的需要。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是提供AKT3基因突變檢測液相芯片，該液相芯片可用于檢測AKT3基因常見基因型G171R的野生型和突變型。實現上述目的的技術方案如下一種AKT3基因突變檢測液相芯片，包括有(A).針對AKT3基因G171R位點的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag 序列分別選自 SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 6中的不同兩種；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 14，且所述ant1-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有Gl7IR位點的目標序列的引物。優選地，所述擴增引物為SEQ ID NO. 15 SEQ ID NO. 16。優選地，所述ASPE引物為^SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 7組成的序列以及由SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 8組成的序列。本專利技術的另一目的是提供用于AKT3基因突變檢測的特異性引物。具體技術方案如下用于AKT3基因突變檢測的特異性引物，其為SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8。本專利技術的主要優點在于1.本專利技術所提供的檢測方法與測序法的吻合率高達100%，且檢測所需要的時間遠遠低于常用的測序技術，特別符合實際應用需要。所制備的AKT3基因突變檢測液相芯片具有非常好的信號-噪聲比，并且所設計的探針以及ant1-tag序列之間基本上不存在交叉反應，tag標簽序列、ant1-tag標簽序列的選取以及tag標簽序列與具體ASPE引物的結合，能夠避免交叉反應，實現多個SNP位點的并行檢測。2.本專利技術設計的ASPE引物特異性引物能夠靈敏特異地識別目標檢測的突變位點，準確區分各種型別的基因型；在同一個反應體系中，不同的特異性 引物之間、特異性引物與非目標檢測的PCR擴增產物之間基本上不存在交叉反應，檢測特異性好，交叉反應率低于3% ;除了能夠檢測單個位點突變情況，也能夠同時并行檢測多個突變位點的突變情況，檢測效果一致。3.本專利技術不僅克服了傳統固相芯片敏感性不高，檢測結果的可重復性差的缺陷，同時對現有的液相芯片技術進行改進，使得所制備微球能適用于不同的檢測項目，具有很強的拓展性。檢測的熒光信號值大大提高，從而使得檢測的靈敏度進一步得到提高，信噪比增強，檢測結果更加準確可靠。具體實施例方式實施例1 AKT3基因突變檢測液相芯片，主要包括有一、ASPE 引物針對AKT3基因常見基因型G171R的野生型和突變型，分別設計特異性引物序列。ASPE引物由“tag序列+特異性引物序列”組成。ASPE引物序列如下表所示表I AKT3基因的ASPE弓丨物序列中的tag序列 SEQ ID NO.~~tag 序歹[I ~ICAATAAACTATACTTCTTCACTAA ~2TCAAAATCTCAAATACTCAAATCA 3CTTTTCAATTACTTCAMTCTTCA ~ATTATTCACTTCAAACTAATCTAC 5CTTTTCATCTTTTCATCTTTCAAT 6CTTTCAATTACAATACTCATTACA表2 AKT3基因的ASPE弓丨物序列中的特異性引物序列權利要求1.一種AKT3基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有(A).針對AKT3基因G171R位點的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag序列分別選自 SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 6 中的不同兩種；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 14,且所述ant1-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有G171R位點的目標序列的引物。2.根據權利要求1所述的AKT3基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為SEQ IDN0. 15 SEQ ID NO. 16。3.根據權利要求1或2所述的AKT3基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 7組成的序列以及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 8組成的序列。4.根據權利要求1或2所述的AKT3基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10 個 T。5.用于AKT3基因突變檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物為SEQID NO. 7和 SEQID N08。全文摘要本專利技術公開了一種AKT3基因突變檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為針對G171R位點的SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本專利技術所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現突變位點的野生型和突變型并行檢測。文檔編號C12N15/11GK102994618SQ20111026977公開日2013年3月27日 申請日期2011年9月13日 優先權日2011年9月13日專利技術者許嘉森, 郭靖, 羅小笛 申請人:廣州益善生物技術有限公司本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種AKT3基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對AKT3基因G171R位點的野生型和突變型的ASPE引物：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：SEQID?NO.7和SEQ?ID?NO.8；所述tag序列分別選自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.6中的不同兩種；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti?tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述anti?tag序列選自SEQ?ID?NO.9～SEQ?ID?NO.14，且所述anti?tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有G171R位點的目標序列的引物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：許嘉森，郭靖，羅小笛，
申請(專利權)人：廣州益善生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：