本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種HRAS基因檢測(cè)特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對(duì)Codon?12位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.16及SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.20、和/或SEQ?ID?NO.21；針對(duì)Codon?13位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.22及SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.24、和/或SEQ?ID?NO.25；和/或針對(duì)Codon?61位點(diǎn)的SEQ?IDNO.26及SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29、和/或SEQ?ID?NO.30；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)所提供的檢測(cè)液相芯片的檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序法的吻合率高達(dá)100％，實(shí)現(xiàn)多個(gè)突變位點(diǎn)的野生型和突變型并行檢測(cè)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種HRAS基因突變檢測(cè)特異性引物和液相芯片。
技術(shù)介紹
ras基因參與細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的調(diào)控，參與多種腫瘤的形成與發(fā)展。ras基因家族與人類(lèi)腫瘤相關(guān)的特征性基因有三種，即H-ras、K-ras和N_ras，它們分別定位于11、12、I號(hào)染色體。ras族癌基因活化是某些腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子基礎(chǔ)，其中，點(diǎn)突變是ras族基因活化的重要方式，而ras族基因第12位、13位和61位密碼子的點(diǎn)突變可使其獲得轉(zhuǎn)化細(xì)胞 的能力。因此對(duì)腫瘤細(xì)胞ras基因點(diǎn)突變的檢測(cè)，對(duì)了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展，以及監(jiān)測(cè)惡性腫瘤的治療效果具有重大意義，對(duì)臨床工作具有重要指導(dǎo)意義。其中，HRAS(v-Ha-ras Harvey rat sarcoma viral oncogene homo log)基因定位于11號(hào)染色體，由946個(gè)腺嘌呤、2287個(gè)胞嘧啶、2113個(gè)鳥(niǎo)嘌呤、1107個(gè)胸腺嘧啶組成。HRAS基因突變及其突變率與地理環(huán)境條件、種族、致癌原的不同有關(guān)，有研究表明，HRAS點(diǎn)突變與胃癌的某些分子生物學(xué)行為相關(guān)，而且有可能成為判斷胃癌患者預(yù)后的有用指標(biāo)。本專(zhuān)利技術(shù)所開(kāi)發(fā)的HRAS基因突變檢測(cè)液相芯片涉及的突變位點(diǎn)如下表所示 基因位點(diǎn)__mm__密碼子HRAS12-w (野生型)__GGC G12S (突變型)__AGC^ , ^ G12C (突變型) TGCCodonI2 -- G12R (突變型)__GGG G12D (突變型)__GAC G12V (突變型)GTC--- 13-w (野生型)__GGT ^ G13S (突變型) AGT CodonI3 -- G13R (突變型)__CGT__G13C (突變型)__TGT Codon6161-w (野生型)__CAG Q61K (突變型)__AAG___Q61R (突變型)__CGG Q61L (突變型)__CTG___Q61H (突變型)__CAC目前，對(duì)HRAS基因突變進(jìn)行檢測(cè)和分析的方法很少，主要有直接測(cè)序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突變?cè)斐傻南拗菩詢?nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的改變，如位點(diǎn)丟失或產(chǎn)生新位點(diǎn)，通過(guò)PCR擴(kuò)增某一特定片段，再用限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測(cè)酶切位點(diǎn)改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒(méi)有產(chǎn)生新酶切位點(diǎn)的基因突變檢測(cè)。再次，以上這些方法都存在著檢測(cè)通量的局限性，每次只能檢測(cè)一種突變類(lèi)型，不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的之一是提供HRAS基因突變檢測(cè)液相芯片，該液相芯片可用于單項(xiàng)或者并行檢測(cè)HRAS基因Codon 12的正?；蛐图拔宸N突變型G12S、G12C、G12R、G12D、G12V，Codon 13的正常基因型及三種突變型G13S、G13R、G13C，以及Codon 61的正?；?型及四種突變型Q61K、Q61R、Q61L、Q61H。實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下一種HRAS基因突變檢測(cè)液相芯片，包括有(A).針對(duì)HRAS基因不同突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對(duì)Codon 12位點(diǎn)的SEQ ID NO. 16以及SEQ ID NO. 17、SEQ IDNO. 18,SEQ IDN0. 19,SEQ ID NO. 20 和 SEQ ID NO. 21 中的一種以上;針對(duì) Codon 13 位點(diǎn)的SEQ ID NO. 22 以及 SEQ ID NO. 23、SEQ ID NO. 24 和 SEQ ID NO. 25 中的一種以上；和 / 或針對(duì) Codon 61 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 26 以及 SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和SEQ ID NO. 30中的一種以上；所述tag序列選自SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 15 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO. 31 SEQ ID NO. 45，且所述ant1-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)；(C).用于擴(kuò)增出需要檢測(cè)的、具有相應(yīng)突變位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。優(yōu)選地，所述擴(kuò)增引物為針對(duì)HRAS基因Codon 12和/或Codon 13位點(diǎn)的SEQ IDNO. 46 及 SEQ ID NO. 47 ;和 / 或針對(duì) Codon 61 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 48 及 SEQ ID NO. 49。優(yōu)選地，所述ASPE引物為:針對(duì)Codon 12位點(diǎn)的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 16組成的序列以及由SEQ ID NO. 2及SEQ ID NO. 17組成的序列、由SEQ ID NO. 3和SEQ IDNO. 18組成的序列、由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 19組成的序列、由SEQ ID NO. 5和SEQ IDNO. 20組成的序列、和/或由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 21組成的序列；針對(duì)Codon 13位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 22組成的序列以及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 23組成的序列、由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 24組成的序列、和/或由SEQ ID NO. 10和SEQ IDNO. 25組成的序列；和/或針對(duì)Codon 61位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 26組成的序列以及由 SEQ ID NO. 12 和 SEQ IDN0. 27 組成的序列、由 SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 28組成的序列、由SEQ ID NO. 14和SEQ IDN0. 29組成的序列、和/或由SEQ ID NO. 15和SEQID NO. 30組成的序列。本專(zhuān)利技術(shù)的另一目的是提供用于HRAS基因突變檢測(cè)的特異性引物。實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下用于HRAS基因突變檢測(cè)的特異性引物，其為所述特異性引物序列為針對(duì)Codon12位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 16 以及 SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ ID NO. 20和 SEQ ID NO. 21 中的一種以上；針對(duì) Codon 13 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 22 以及 SEQ ID NO. 23、SEQ IDN0. 24 和 SEQ ID NO. 25 中的一種以上；和 / 或針對(duì) Codon 61 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 26以及 SEQ IDN0. 27、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和 SEQ ID NO. 30 中的一種以上。本專(zhuān)利技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)在于1.本專(zhuān)利技術(shù)所提供的檢測(cè)方法與測(cè)序法的吻合率高達(dá)100%。且檢測(cè)所需要的時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常用的測(cè)序技術(shù)，特別符合實(shí)際應(yīng)用需本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種HRAS基因突變檢測(cè)液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對(duì)HRAS基因不同突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：針對(duì)Codon?12位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.16以及SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.18、SEQ?IDNO.19、SEQ?ID?NO.20和SEQ?ID?NO.21中的一種以上；針對(duì)Codon?13位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.22以及SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.24和SEQ?ID?NO.25中的一種以上；和/或針對(duì)Codon?61位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.26以及SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29和SEQ?ID?NO.30中的一種以上；所述tag序列選自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.15；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti?tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti?tag序列選自SEQ?ID?NO.31～SEQ?ID?NO.45，且所述anti?tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)；(C).用于擴(kuò)增出需要檢測(cè)的、具有相應(yīng)突變位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。...
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：許嘉森，吳詩(shī)揚(yáng)，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：廣州益善生物技術(shù)有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。