一種MEK1基因突變檢測特異性引物和液相芯片制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種MEK1基因突變檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對Q56P位點的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10；針對K57N位點的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12；針對D67N位點的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14；和/或針對P124L位點的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發(fā)明專利技術(shù)所提供的檢測液相芯片的檢測結(jié)果與測序法的吻合率高達100％，實現(xiàn)多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種MEKl基因突變檢測特異性引物和液相芯片。
技術(shù)介紹
MEKl基因參與大量的生命過程并在胚胎發(fā)育過程中扮演重要角色，有研究表明，MEKl基因突變高頻率出現(xiàn)在腫瘤中，而研究熱點一般集中在Q56P、K57N、D67N和P124L等4個位點。目前，對MEKl基因突變進行檢測和分析的方法很少，主要有直接測序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突變造成的限制性內(nèi)切酶識別位點的改變，如位點丟失或產(chǎn)生新位點，通過PCR擴增某一特定片段，再用限制性內(nèi)切酶酶切擴增產(chǎn)物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測酶切位點改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒有產(chǎn)生新酶切位點的基因突變檢測。再次，以上這些方法都存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實際應(yīng)用的需要。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一是提供MEKl基因突變檢測液相芯片，該液相芯片可用單項或者并行于檢測MEKl基因四種常見基因型Q56P、K57N、D67N和P124L的野生型和突變型。一種MEKl基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有(A).針對MEKl基因不同突變位點分別設(shè)計的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對Q56P位點的SEQ ID NO. 9及SEQ ID NO. 10 ;針對K57N位點的SEQID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12 ;針對 D67N 位點的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14 ;和 / 或針對P124L 位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO.1 SEQ IDNO. 8 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO. 17 SEQ ID NO. 24，且所述ant1-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應(yīng)突變位點的目標(biāo)序列的引物。優(yōu)選地，所述擴增引物為針對Q56P、K57N、D67N位點的SEQ ID NO. 25和SEQ IDNO. 26 ;和 / 或針對 P124L 位點的 SEQ ID NO. 27 和 SEQ ID NO. 28。優(yōu)選地，所述ASPE弓丨物為針對Q56P位點的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 9組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 10組成的序列；針對K57N位點的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 11組成的序列及由SEQ ID N O. 4和SEQ ID NO. 12組成的序列；針對D67N位點的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 14組成的序列；和/或針對P124L位點的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ IDNO. 8和SEQ ID NO. 16組成的序列。本專利技術(shù)的另一目的是提供用于MEKl基因突變檢測的特異性引物。實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下用于MEKl基因突變檢測的特異性引物，其為針對Q56P位點的SEQ ID NO. 9及SEQ ID NO. 10 ;針對K57N位點的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12 ;針對D67N位點的 SEQ IDNO. 13 及 SEQ ID NO. 14 ;和 / 或針對 P124L 位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16。本專利技術(shù)的主要優(yōu)點在于1.本專利技術(shù)所提供的檢測方法與測序法的吻合率高達100%，且檢測所需要的時間遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常用的測序技術(shù)，特別符合實際應(yīng)用需要。所制備的MEKl基因突變檢測液相芯片·具有非常好的信號-噪聲比，并且所設(shè)計的探針以及ant1-tag序列之間基本上不存在交叉反應(yīng)，tag標(biāo)簽序列、ant1-tag標(biāo)簽序列的選取以及tag標(biāo)簽序列與具體ASPE引物的結(jié)合，能夠避免交叉反應(yīng)，實現(xiàn)多個突變位點的并行檢測。2.本專利技術(shù)通過專利技術(shù)人長期積累的設(shè)計經(jīng)驗和大量的實驗操作，從眾多的特異性引物中選取了最優(yōu)的組合。本專利技術(shù)設(shè)計的ASPE引物特異性引物能夠靈敏特異地識別目標(biāo)檢測的突變位點，準(zhǔn)確區(qū)分各種型別的基因型；在同一個反應(yīng)體系中，不同的特異性引物之間、特異性引物與非目標(biāo)檢測的PCR擴增產(chǎn)物之間基本上不存在交叉反應(yīng)，檢測特異性好，交叉反應(yīng)率低于3% ;除了能夠檢測單個位點突變情況，也能夠同時并行檢測多個突變位點的突變情況，檢測效果一致。3.本專利技術(shù)的檢測方法步驟簡單，四種突變位點檢測可通過一步PCR即可完成2條含有4個突變位點的目標(biāo)序列的擴增，避免了反復(fù)多次PCR等復(fù)雜操作過程中存在的諸多不確定因素，因而可大大提高檢測準(zhǔn)確率，體現(xiàn)了精確的同時定性、定量分析特征。4.本專利技術(shù)不僅克服了傳統(tǒng)固相芯片敏感性不高，檢測結(jié)果的可重復(fù)性差的缺陷，同時對現(xiàn)有的液相芯片技術(shù)進行改進，使得所制備微球能適用于不同的檢測項目，具有很強的拓展性。檢測的熒光信號值大大提高，從而使得檢測的靈敏度進一步得到提高，信噪比增強，檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。具體實施例方式實施例1 MEKl基因突變檢測液相芯片，主要包括有一、ASPE 引物針對MEKl基因四種常見基因型Q56P、K57N、D67N和P124L的野生型和突變型，分別設(shè)計特異性引物序列。ASPE引物由“tag序列+特異性引物序列”組成。ASPE引物序列如下表所示表I MEKl基因的ASPE弓丨物序列(tag序列+特異性引物序列)權(quán)利要求1.一種MEKl基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有(A).針對MEKl基因不同突變位點分別設(shè)計的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為針對Q56P位點的SEQ ID NO. 9及SEQ ID NO. 10 ;針對K57N位點的SEQ IDNO. 11 及 SEQ ID NO. 12 ;針對D67N位點的 SEQ ID NO. 13及 SEQ ID NO. 14 ;和/或針對P124L位點的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 8 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO. 17 SEQ ID NO. 24，且所述ant1-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應(yīng)突變位點的目標(biāo)序列的引物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的MEKl基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為針對 Q56P、K57N、D67本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種MEK1基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有：(A).針對MEK1基因不同突變位點分別設(shè)計的野生型和突變型的ASPE引物：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為：針對Q56P位點的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10；針對K57N位點的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12；針對D67N位點的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14；和/或針對P124L位點的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；所述tag序列選自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.8；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti?tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti?tag序列選自SEQ?ID?NO.17～SEQ?ID?NO.24，且所述anti?tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補配對；(C).用于擴增出需要檢測的、具有相應(yīng)突變位點的目標(biāo)序列的引物。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：許嘉森，劉志明，
申請(專利權(quán))人：廣州益善生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：