產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌及應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌及應(yīng)用。該原油降解菌的名稱為銅綠假單胞菌MZ01，于2012年7月12日保藏于位于中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.6354。該菌株主要產(chǎn)脂類，其CMC值為0.1g/l，并能將水的表面張力從72.0mN/m降至29.9mN/m，其對(duì)疏水性有機(jī)物具有明顯的乳化和增溶作用，而且作用持久；其于25℃、pH值為7，轉(zhuǎn)速為150rpm的條件下5d可將原油從200mg/l降至約92mg/l左右，石油總?cè)コ蕿檫_(dá)52%以上，其中該菌株對(duì)原油的降解率在30%以上。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種菌株，特別涉及一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
表面活性劑是一種既有親水基團(tuán)又有親油基團(tuán)的物質(zhì)，其具有潤(rùn)濕或抗粘、乳化或破乳、起泡或消泡以及增溶、分散、洗滌、防腐、抗靜電等作用，是一種用途非常廣泛的精細(xì)化工產(chǎn)品。表面活性劑除了在日常生活中作為洗滌劑，其他應(yīng)用幾乎可以覆蓋所有的精細(xì)化工領(lǐng)域。然而化學(xué)表面活性劑的大量使用可能引起土壤或者水體的二次污染，并且大多數(shù)化學(xué)表面活性劑都難以被再次利用因而會(huì)在環(huán)境中滯留。因此，對(duì)環(huán)境友好的生物表面活性劑越來(lái)越受到人們的關(guān)注。生物表面活性劑是天然表面活性劑的一種，主要是指微生物在一定培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的一些具有明顯降低表面張力的代謝產(chǎn)物。與化學(xué)合成的表面活性劑相比，生物表面活性劑除具有降低表面張力、穩(wěn)定乳化液和發(fā)泡等相同特性外，還具有一般化學(xué)表面活性劑所不具備的環(huán)境友好特性，如無(wú)毒、可自然生物降解、生態(tài)安全等優(yōu)點(diǎn)。另外生物表面活性劑也常比化學(xué)表面活性劑具有更高的表面活性，乳化能力也更強(qiáng)，在醫(yī)藥、化妝品、洗滌劑和食品等工業(yè)方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。特別是在難降解疏水性有機(jī)物如多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、石油烴的修復(fù)中，生物表面活性劑發(fā)揮著重要的作用，它使疏水性有機(jī)物乳化并明顯增溶，使得降解菌更容易降解這些物質(zhì)。另外，生物表面活性劑在極端環(huán)境中依然能發(fā)揮作用，其不受溫度等外界環(huán)境的影響，而一般的化學(xué)表面活性劑對(duì)環(huán)境條件要求嚴(yán)格，在極端環(huán)境下得不到應(yīng)有的效果。而且，生物表面活性劑可以被微生物利用，不會(huì)在環(huán)境中長(zhǎng)期殘留，對(duì)環(huán)境不會(huì)產(chǎn)生有害影響。然而，生物表面活性劑目前還是難以商業(yè)化利用，主要是因?yàn)槠洚a(chǎn)率低以及底物成本高，純化過(guò)程投資大。獲得能大量代謝的生物表面活性劑的菌種是解決目前生物表面活性劑成本高的一種途徑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌。本專利技術(shù)的另一目的在于提供所述產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌的應(yīng)用。本專利技術(shù)的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌，名稱為銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) MZ01,于2012年7月12日保藏于位于中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No. 6354 ；所述的銅綠假單胞菌MZOl的形態(tài)為菌落光滑、球型，邊緣平整，呈淺綠色，屬革蘭氏陰性菌，電子顯微鏡下觀察該菌體的形態(tài)為球菌；所述的銅綠假單胞菌MZOl的16S rDNA如SEQ ID NO. I所示；所述的產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌在制備生物表面活性劑以及石油降解中的應(yīng)用。本專利技術(shù)相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果(I)本專利技術(shù)提供的菌株主要產(chǎn)脂類，其CMC值為O. lg/Ι，并能將水的表面張力從 72. OmN/m降至29. 9mN/m，其對(duì)疏水性有機(jī)物具有明顯的乳化和增溶作用，而且作用持久。(2)本專利技術(shù)提供的菌株25°C、pH值為7，轉(zhuǎn)速為150rpm的條件下5d可將原油從 200mg/l降至約92mg/l左右，石油總?cè)コ蕿檫_(dá)52%以上，其中該菌株對(duì)原油的降解率在 30%以上。附圖說(shuō)明圖I是菌株MZOI的形態(tài)觀察圖，其中，A為平板菌落照片圖，B為電鏡圖。圖2是MZOl菌株所產(chǎn)生的表面活性劑的紅外光譜圖。圖3是MZOI產(chǎn)生的表面活性劑的1H譜分析結(jié)果圖。圖4是MZOI產(chǎn)生的表面活性劑的13C譜分析結(jié)果圖。圖5是生物表面活性劑的CMC值測(cè)定結(jié)果圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本專利技術(shù)的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例IMZOl的篩選分離。采集廣州某煉油廠附近石油污染土壤，取2g 土壤添加到培養(yǎng)基A中，放置30°C， 150rpm搖床中振蕩過(guò)夜。將原油作為唯一碳源添加至培養(yǎng)基A對(duì)土壤中的菌株反復(fù)馴化培養(yǎng)(放置30°C，150rpm搖床中振蕩5d，5d之后再次接種至新鮮含2g原油的培養(yǎng)基A中，重復(fù)三次該步驟對(duì)土壤中的菌株進(jìn)行馴化)，原油(來(lái)源于廣州中石化公司)的添加量為每升培養(yǎng)基A中加入2g原油。培養(yǎng)基A (以下使用的培養(yǎng)基A的組成同此處)的組成為每升富集培養(yǎng)基中添加 Iml微量元素，pH值為7.0 ;每升富集培養(yǎng)基中含有0.5 克 MgSO4. 7Η20、0· 02 克 CaCl2. 2Η20、1 克 NH4NO3U 克 NaCl,3克酵母提取物、I. 5克ΚΗ2Ρ04、2克K2HPO4，水定容至IL ；每升微量元素中含有0.I 克 ZnSO4. 7Η20、0· 3 克 MnS04.H20、0. I 克 FeSO4. 7H20、 O. I 克 CaCl2. 2Η20、0· I 克 CoCl2. 6H20、0. Ol 克 CuSO4. 5H20、0. Ol 克 AlK(SO4)2. 12H20、0. Ol 克 Η3Β03、0· 0137 克(NH4)2Mo2O7'O. 0107 克 MgSO4. 7Η20，水定容至 1L。經(jīng)反復(fù)馴化并分離純化得到若干株產(chǎn)表面活性劑以及降解原油的菌株，利用油滴坍塌實(shí)驗(yàn)、乳化指數(shù)測(cè)試以及發(fā)酵液表面張力測(cè)定篩選出能較好產(chǎn)表面活性劑的菌株，篩選結(jié)果如表I所示。同時(shí)利用DCPIP試劑的氧化還原顯色反應(yīng)篩選出能有效降解原油的菌株，得到菌株MZOl是既產(chǎn)表面活性劑又能很好降解原油的菌株。平板觀察該菌落的形態(tài)(如圖I所示)，其呈淺綠色，不規(guī)則形，邊緣平整，菌落表面光滑濕潤(rùn)。電子顯微鏡下觀察該菌體的形態(tài)為球菌，直徑為707 870nm。將其送至測(cè)序公司(廣東省微生物分析檢測(cè)中心) 測(cè)其16SrDNA，得到的序列如下所示，通過(guò)NCBI BLAST，其與銅綠假單胞菌屬相似同源性達(dá) 100%,因此鑒定該菌為銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。將其命名為銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)MZ01,于2012年7月12日保藏于位于中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6354。表Ii 油滴坍塌實(shí)驗(yàn)乳化分析農(nóng)面張力大小本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌，其特征在于名稱為銅綠假單胞菌（Pseudomonas?aeruginosa）MZ01，于2012年7月12日保藏于位于中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.6354。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌，其特征在于名稱為銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) MZ01,于2012年7月12日保藏于位于中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6354。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的產(chǎn)脂類生物表面活性劑的原油降解菌，其特征在于所述的銅綠假單胞菌MZOl的形態(tài)為菌落...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭楚玲，章慧，黨志，楊琛，盧桂寧，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華南理工大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：