本發(fā)明專利技術(shù)公開一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌及其應用，該拮抗菌為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus?amyloliquefaciens）CGMCC?No.?6491。通過在新疆阜康郊區(qū)多年種植的農(nóng)田中采取土壤樣品進行拮抗菌的篩選，獲得具有較強抑菌活性的菌株，經(jīng)過進一步篩選、馴化選育，并通過對所獲菌株進行形態(tài)特征及16S?rRNA序列測定及系統(tǒng)發(fā)育分析，初步確定了其分類地位；同時對該細菌的發(fā)酵液的抑菌率、穩(wěn)定性等特性進行了深入研究，作為防治蔬菜土傳病害拮抗菌提供了新的選擇，其拮抗作用對于番茄枯萎病、黃瓜枯萎病、辣椒疫霉病和辣椒炭疽病的解決具有突出的技術(shù)效果，具有廣泛的應用價值。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及農(nóng)業(yè)微生物應用
，具體說，本專利技術(shù)涉及一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌及其在防治蔬菜土傳病害中的應用
技術(shù)介紹
在新疆由于其獨特的地理及氣候條件，設施農(nóng)業(yè)成為蔬菜種植的主要模式之一， 并且隨著國家及自治區(qū)對菜籃子工程的重視，設施農(nóng)業(yè)的發(fā)展速度及規(guī)模逐年提高和擴大，但由于設施農(nóng)業(yè)病蟲害易發(fā)、難控制的現(xiàn)實情況，因此對于病蟲害的防控也提出了更高的要求，尤其是設施農(nóng)業(yè)中的蔬菜病害尤為嚴重，而土傳病害是防控的主要目標之一；土傳病害是指生活在土壤中的病原體或者土壤中病株殘體中的病菌，從作物根部或莖部侵害而引起的病害；設施農(nóng)業(yè)蔬菜土傳病害主要有蔬菜根結(jié)線蟲病、瓜類枯萎病、黃萎病、苗期的立枯、猝倒病等；設施農(nóng)業(yè)蔬菜栽培，由于受地理條件限制，輪作倒茬困難，連作周期長，加上溫度、濕度等條件有利于各種病害的發(fā)生、傳播，土傳病害防治難度較大，近年來，其發(fā)病率高、危害性大，已成為影響設施農(nóng)業(yè)蔬菜生產(chǎn)效益的主要障礙因素，嚴重制約著蔬菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展;AM真菌叢枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal簡稱AMF, AM真菌，舊稱 VA菌)普遍存在于世界各地的土壤中，其宿主包括苔蘚植物、蕨類植物、裸子植物和被子植物；據(jù)統(tǒng)計，地球上90%的維管植物和農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中大多數(shù)作物都能形成叢枝菌根；叢枝菌根真菌與植物共生可以增加植物根部的吸收面積，增加對礦質(zhì)營養(yǎng)特別是對磷素的吸收，因此能促進植物地上部和根部的吸收，同時還能提高植物的抗逆性；針對單個AMF對于作物的生長、病害的防治，AM真菌與PGPR相互作用的效應與機制等的報道、研究較多，但是能與AM真菌協(xié)同抗病促生的拮抗菌還未見公開報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有技術(shù)中針對與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌的未有報道及防控土傳病害拮抗菌的研究的現(xiàn)狀，本專利技術(shù)旨在提供一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌解淀粉芽孢桿菌 {Bacillus amyloliquefaciens)及其作為防治蔬菜土傳病害拮抗菌中的應用，通過試驗驗證，采用本專利技術(shù)提供的解淀粉芽孢桿菌{Bacillus具有拮抗作用的細菌對于番茄枯萎病、黃瓜枯萎病、辣椒疫霉病的解決具有突出的技術(shù)效果，作為防治蔬菜土傳病害拮抗菌具有廣泛而適用的價值。本專利技術(shù)采用主要的技術(shù)方案通過在新疆阜康郊區(qū)多年種植的農(nóng)田中采取土壤樣品進行拮抗菌的篩選，獲得具有較強抑菌活性的的菌株，經(jīng)過進一步篩選、馴化選育，獲得一株編號為S-13。通過對所獲菌株進行形態(tài)特征及16S rRNA序列測定及系統(tǒng)發(fā)育分析，初步確定了其分類地位；同時對該細菌S-13的發(fā)酵液的抑菌率、穩(wěn)定性等特性進行了深入研究，作為防治蔬菜土傳病害拮抗菌提供了新的選擇，其拮抗作用對于番茄枯萎病、黃瓜枯萎病、辣椒疫霉病和辣椒炭疽病的解決具有突出的技術(shù)效果。本專利技術(shù)具體提供的一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌芽孢桿菌(Macillus amyloli quefaci ens ),通過在新疆阜康郊區(qū)多年種植的農(nóng)田土壤中分離、篩選和培養(yǎng)，獲得一批作為防治蔬菜土傳病害的微生物菌株，從中篩選出一株編號為S-13的菌株，防治蔬菜土傳病害具有穩(wěn)定而顯著的效果，經(jīng)微生物學分類與鑒定，屬于解淀粉芽孢桿菌 amyloliquefaciens)。具體的，本專利技術(shù)提供的一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌解淀粉芽孢桿菌 {Bacillus amyloliquefaciens'),命名為S_13。該菌株已于申請日前保藏于布達佩斯條約微生物國際保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)。地址 北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101。保藏日期是2012年9月3日，保藏號是CGMCC No. 6491。經(jīng)微生物學鑒定為芽孢桿菌UaciJAz1S amyloliquefaciens\該菌株最適生長條件為溫度32° C，培養(yǎng)基為固體LB,培養(yǎng)條件pH 7.0-7. 2，時間14-16h;菌落中等大小、扁平，表面干燥、有褶皺，邊緣不整齊，不透明；顯微觀察其菌體呈短桿狀，芽孢中生，不膨大；依照第九版《伯杰氏系統(tǒng)細菌學鑒定手冊》(iBergey, s Manual of Sys tema tic Bac terio -logy)))和《常用細菌系統(tǒng)鑒定手冊》對S-13菌株進行形態(tài)學測定，生理生化檢測確定S-13菌株為芽孢桿菌{Bacillus中的成員。通過BLAST同源比對,菌株S_13的16S rRNA序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫中進行BLAST分析后，構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，參見附圖2所示，菌株S-13與Bacillus amyloli quefaci ens⑶323369. I處于最小分支，是其近似種；菌株16S rRNA序列提交至GeneBmk中獲得基因登錄號為JN676212。因而將菌株S-13確定為解淀粉芽孢桿菌 (.Baci Ilus amyloli quefaci ens )。進一步，本專利技術(shù)提供與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌芽孢桿菌S-13 {Bacillus amyloli quefaci ens )作為防治蔬菜土傳病害的應用。同時，本專利技術(shù)證明，提供的與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌芽孢桿菌S-UiMcillus amyloli quefaci ens )作為番爺枯萎病、黃瓜枯萎病、辣椒疫霉病拮抗菌的應用，具有良好的拮抗能力、廣譜拮抗作用。本專利技術(shù)進一步提供了菌種的保存條件，采用培養(yǎng)基成分蛋白胨1%(W/V)，酵母膏O.5% (W/V)，氯化鈉 1% (W/V)，瓊脂 2% (W/V)，pH 7. 0-7.2,121° C 滅菌 20 分鐘。培養(yǎng)條件在其LB培養(yǎng)基斜面上32° C條件下，培養(yǎng)14-16小時，后采用無菌的脫脂牛奶為保護劑，真空冷凍干燥后低溫保存；平時使用保存在LB培養(yǎng)基的斜面上，4° C冰箱保存?zhèn)溆谩Ｍㄟ^實施本專利技術(shù)具體的
技術(shù)實現(xiàn)思路
，可以達到以下有益效果。(I)本專利技術(shù)提供了分離得到的芽孢桿菌CGMCC No. 6491，是一種解淀粉芽孢桿菌，作為防治蔬菜土傳病害的應用具有較高的價值，尤其是能夠針對本地生境分離出的適應本地氣候及生長環(huán)境的拮抗菌對于提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，構(gòu)建良好的生態(tài)環(huán)境具有積極作用。(2)本專利技術(shù)針對設施農(nóng)業(yè)中幾種常見的蔬菜病害篩選出一株具有較好拮抗能力、 廣譜拮抗作用的芽孢桿菌CGMCC No. 6491，經(jīng)過16S rRNA序列擴增、比對、進化樹的建立初步鑒定為芽抱桿菌屬，ifeciJJiAs amyloli quefaci ens⑶323369. I的近似種。拮抗菌S-13具有廣譜抗真菌活性，能夠抑制番茄枯萎病原菌、辣椒疫霉病病原菌、辣椒炭疽病病原菌、黃瓜枯萎病病原菌等真菌，在平板對峙培養(yǎng)條件下表現(xiàn)良好，對于病原菌菌絲的生長具有明顯的抑制作用，并且拮抗菌S-13經(jīng)過抗生素誘導后的定殖研究表明，S-13能夠在植株的根部土壤、根、莖、葉等不同部位都有定殖，是一株優(yōu)良的拮抗菌株。同時為了能在今后方便、 高效的利用，優(yōu)化了其發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝，使芽孢率與產(chǎn)量得到大幅提高，對于產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有積極作用。該菌種芽孢桿菌S-13與AMF作為協(xié)同抗病促生的拮抗菌，具有良好的效果，作為防治蔬菜土傳病害的應用具有潛在的應用價值，特別是作為番茄枯萎病、黃瓜本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌，其特征在于，拮抗菌為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus?amyloliquefaciens）CGMCC?No.?6491。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種與AMF協(xié)同抗病促生的拮抗菌，其特征在于，拮抗菌為解淀粉芽孢桿菌{Bacillus amyloliquefaciens^) CGMCC No. 6491。2.如權(quán)利要求I所述的拮抗菌解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaciens)CGMCCNo. 6491作為防治蔬菜土傳病害中的應用。3.如權(quán)利要求I所述的拮抗菌解淀粉芽孢桿菌amyloli...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：詹發(fā)強，侯敏，崔衛(wèi)東，楊蓉，龍宣杞，張慧濤，侯新強，
申請(專利權(quán))人：新疆農(nóng)業(yè)科學院微生物應用研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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