一種短小芽孢桿菌GBSC66及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種分離于西藏具促生和防病作用的低溫適生短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）GBSC66?CGMCC?No.3379及其在防治油菜菌核病害中的應(yīng)用。所述的短小芽孢桿菌是從西藏工布加達(dá)鎮(zhèn)松多草根根圍土中分離獲得的生防芽孢桿菌，其在低溫條件下生長(zhǎng)良好，利于促生和生防作用的發(fā)揮，對(duì)于油菜菌核病的生防效果可達(dá)69%，增加產(chǎn)量17%，具有很好的應(yīng)用前景。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
—種短小芽孢桿菌GBSC66及其應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于微生物和農(nóng)業(yè)病害防治
，涉及短小芽孢桿菌，具體涉及一種低溫適生短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66及其在防治油菜菌核病害中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
油菜是我國(guó)主要的油料作物，油菜菌核病是由子囊菌亞門真菌核盤菌 (Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜生產(chǎn)中的重要病害之一。油菜菌核病在油菜的整個(gè)生育期均可發(fā)病，結(jié)實(shí)期發(fā)生最重。莖、葉、花、角果均可受害，莖部受害最重。莖部染病初現(xiàn)淺褐色水潰狀病斑，后發(fā)展為具輪紋狀的長(zhǎng)條斑，邊緣褐色，濕度大時(shí)表生棉絮狀白色菌絲，偶見黑色菌核，病莖內(nèi)髓部爛成空腔，內(nèi)生很多黑色鼠糞狀菌核。油菜菌核病在我國(guó)為油菜三大病害之首，冬、春栽培區(qū)域均有發(fā)生，給生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重?fù)p失。常年株發(fā)病率高達(dá)10%-30%，嚴(yán)重的達(dá)80%以上；病株一般減產(chǎn)70%-100%。目前防治油菜菌核病的主要手段為噴灑化學(xué)農(nóng)藥，后者的大量應(yīng)用不僅造成了空氣、水源、土壤和食物的污染，更重要的是經(jīng)過化學(xué)農(nóng)藥的定向選擇使許多病原菌產(chǎn)生了抗藥性，為該病的防治帶來了更大的困難，嚴(yán)重威脅我國(guó)油菜生產(chǎn)安全。近年來，越來越多的地區(qū)采用綜合防治的方法來防治油菜菌核病，其中尤以生物農(nóng)藥發(fā)揮著重要的作用。根際微生物種類繁多，其中有很多種類能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)、防治植物病害、增加作物產(chǎn)量，這類微生物一般被稱為植物根圍促生細(xì)菌(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria,簡(jiǎn)稱 PGPR)。PGPR與植物之間有很好的互利共生關(guān)系，不僅能使植物產(chǎn)生誘導(dǎo)抗病性，而且可以提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。所以，從PGPR分離和利用具有促生和防病作用的益生菌并應(yīng)用于植物病害的防治和增加產(chǎn)量，具有很重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。CN 101270344A公開了一株對(duì)油菜菌核病有抑制作用的拮抗菌X-Ol菌株的分離篩選，抗菌活性物質(zhì)的分離與應(yīng)用。該專利技術(shù)的X-Ol菌株為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)，能夠分泌一種分子量為1042. 9DA的脂肽類抗生素ITURIN A。該專利技術(shù)還公開了利用X-Ol菌株制備脂肽類抗生素ITURIN A的方法。離體生防試驗(yàn)表明，該專利技術(shù)制備的脂肽類抗生素ITURINA對(duì)油菜菌核病菌具有明顯的抑制效果，脂肽類抗生素ITURIN A濃度為 100MG/ML時(shí)防治油菜菌核病的效果達(dá)100%，濃度為10MG/ML時(shí)的防治效果達(dá)到40. 7%。CN 101603009B公開了一株對(duì)核盤菌菌核具有強(qiáng)寄生、致腐活性的盾殼霉菌株的分篩選、鑒定及在微生物菌劑中的應(yīng)用，還公開了 ZS-ISB菌劑的半敞開式固體發(fā)酵培養(yǎng)方法及在防治油菜菌核病中的應(yīng)用。該專利技術(shù)的微生物菌劑對(duì)油菜菌核病等植物真菌病害具有良好的生防效果。CN 101935620A公開了一種具有抑制油菜菌核病菌的綠色產(chǎn)色鏈霉菌 JZGl 17 (Streptomyces viridochromogenes),還提供了利用該菌株來有效抑制菜菌核病菌在油菜體內(nèi)的擴(kuò)散，減少發(fā)病率，提高產(chǎn)量和品質(zhì)，并有助于生物防治產(chǎn)品開發(fā)，進(jìn)而促進(jìn)該病害的安全控制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的之一在于針對(duì)當(dāng)前油菜菌核病防治中存在的問題，提供一種短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)，其對(duì)油菜菌核病菌等病原菌具有良好的抑菌效果，有潛在的生防價(jià)值。本專利技術(shù)目的之二在于提供該短小芽孢桿菌在防治油菜菌核病中的應(yīng)用。為達(dá)到上述目的之一，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案一種短小芽孢桿菌，分類命名為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66,于 2009年11月2日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.3379。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66CGMCC No. 3379，是從西藏工布加達(dá)鎮(zhèn)的松多草根圍土中分離獲得。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)GBSC66CGMCC No. 3379的形態(tài)特征和生理生化特征革蘭氏染色陽性，桿狀，能在10°c生長(zhǎng)，是一種低溫適生菌，但是不能在50°C生長(zhǎng)，能耐受PH5. 7和7%NaCl的培養(yǎng)，接觸酶試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)和酪素試驗(yàn)均為陽性，淀粉水解試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、厭氧生長(zhǎng)試驗(yàn)和丙酸鹽利用試驗(yàn)均為陰性。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66CGMCC No. 3379的分子鑒定特征 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66CGMCCN0. 3379的部分16S rRNA序列，獲得長(zhǎng)度為487bp的片段，其測(cè)序結(jié)果如序列表所示，在GenBank中經(jīng)與已知的 16S rRNA序列進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)與Bacilluspumilus GQ911554. I的相似性為99%。根據(jù)菌株的革蘭氏染色、形態(tài)特征、生理生化特征以及16S rRNA序列分析的結(jié)果， 參照《芽孢桿菌屬》(蔡妙英等譯，農(nóng)業(yè)出版社，1988年)和《微生物分類學(xué)》(張繼忠，上海復(fù)旦大學(xué)出版社，1995)的檢索表進(jìn)行檢索，本專利技術(shù)的菌株經(jīng)多相分類鑒定為短小芽孢桿菌 (Bacillus pumilus)，命名為 GBSC66。含有短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)GBSC66CGMCC No. 3379的菌劑也屬于本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。為達(dá)到上述目的之二，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案所述短小芽抱桿菌(Bacillus pumiIus)GBSC66CGMCC No. 3379在防治油菜菌核病中的應(yīng)用。具體的技術(shù)方案如下所述短小芽抱桿菌(Bacillus pumiIus)GBSC66CGMCC No. 3379對(duì)于油菜菌核病菌具有顯著的抑菌效果。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumiIus)GBSC66CGMCC No. 3379對(duì)于酵母菌具有顯著的抑菌效果。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumiIus)GBSC66CGMCC No. 3379對(duì)于油菜具有顯著的促進(jìn)生長(zhǎng)效果。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66CGMCC No. 3379菌株的應(yīng)用方法為發(fā)酵培養(yǎng)一稀釋一噴灑一效果測(cè)定。所述短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus) GBSC66CGMCC No. 3379菌株的發(fā)酵培養(yǎng)， 其培養(yǎng)基組成為葡萄糖 20g/L, L-谷氨酸 5g/L，MgSO4 O. 5g/L，KC10. 5g/L，KH2PO41g/L, Fe2SO4 · 6H20 0. 15mg/L, MnSO4 · H2O 5. Omg/L, CuSO4 · 5H200. 16mg/L，其余為過濾水，調(diào)節(jié)至ρΗ7· O。本專利技術(shù)提供的短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)GBSC66CGMCC No. 3379是一種對(duì)油菜菌核病有良好防治效果的芽孢桿菌，并且是一種低溫適生菌，可以在10°c的溫度下生長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境無污染，能夠顯著抑制油菜菌核病菌和酵母菌，還能夠顯著促進(jìn)油菜生長(zhǎng)，具有潛在的生防價(jià)值。附圖說明圖I 是實(shí)施例 2 的短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus) GBSC66CG本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種短小芽孢桿菌，其特征在于，分類命名為短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）GBSC66，于2009年11月2日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC?No.3379。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種短小芽孢桿菌，其特征在于，分類命名為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)GBSC66，于2009年11月2日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為 CGMCC No. 3379。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的短小芽孢桿菌(BacilluspumiIus)GBSC66CGMCCNo. 3379，其特征在于，是從西藏工布加達(dá)鎮(zhèn)的松多草根圍土中分離獲得。3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus) GBSC66CGMCCNo. 3379，其特征在于，形態(tài)特征和生理生化特征為革蘭氏染色陽性，桿狀，能在10°C生長(zhǎng)，但是不能在50°C生長(zhǎng)，能耐受pH5. 7和7%NaCl的培養(yǎng)，接觸酶試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)和酪素試驗(yàn)均為陽性，淀粉水解試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、厭氧生長(zhǎng)試驗(yàn)和丙酸鹽利用試驗(yàn)均為陰性。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus) GBSC66CGMCCNo. 3379，其特征在于，其16S rRNA的部分核苷酸具有如序列表所示序列。5.權(quán)利要求1-4之一所述的短小芽孢桿菌(BacilluspumiI...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高學(xué)文，伍輝軍，沈波，薛鵬琪，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：無錫亞克生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：