一株Pseudomonas?psychrophila?HA-4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌，屬于生物工程、環境工程技術領域，是一株低溫假單胞菌屬菌株，于2012年3月27日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，其保藏號CGMCC?No.5944，是從哈市某污水處理廠曝氣池中的污泥低溫分離得到，該菌株可以以磺胺甲基異惡唑為唯一碳、氮及能源生長，其細胞液體培養可以降解磺胺甲基異惡唑，能夠應用于城市污水中磺胺甲基異惡唑的生物降解，該菌株在低溫條件下對初始濃度為100mg/L的磺胺甲基異惡唑去除率達到35.34%。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物工程、環境工程
,涉及菌株AeotZofflmas psychrophilaHA-4及其在降解磺胺甲基異惡唑中的應用。
技術介紹
藥品與個人護理用品(Pharmaceuticalsand personal care products)主要包括各種處方藥和非處方藥、香料、染發劑、化妝品、遮光劑、發膠、洗發水、香皂等。其中大部分藥物在生物體內未經代謝就直接排入到環境中，另外在藥物的生產過程中以及處理過期與未使用藥物的過程中也會導致其進入水環境中；個人護理用品也會在洗漱和游泳時直接進入水環境。 盡管多數PPCPs在環境中存在的濃度很低，但由于生物富集作用，隨著時間的增力口，PPCPs將最終對生態系統，尤其對水環境產生深遠且不可恢復的影響。水體中PPCPs常用的處理方法有物理法、化學法和生物法等，而生物處理法相較而言被認為是最為環境友好和成本低廉的方法。PPCPs的生物處理與其化合物的結構、初始濃度、初級底物的濃度、接種微生物的來源及培養時間有關。磺胺甲基異惡唑作為一種抗菌藥物被廣泛地應用于人體，它屬于PPCPs中的一種。目前，在我國城市污水處理廠出水中，該藥物的平均濃度水平最高，甚至有負去除的現象存在，而且在北方地區其平均濃度在冬季要高于春季。國外研究表%，Bacillus firmus > Bacillus cereus 、Rhodococcusrhodochrous>Pseudomonas> Flavobacterium ^Aeromonas 等具有降解橫胺甲基異惡唑的能力。目前，國內外研究學者主要研究磺胺甲基異惡唑在常溫條件下的生物降解而在低溫條件下的報道較少。
技術實現思路
本專利技術的目的就是為強化低溫生化系統去除以磺胺甲基異惡唑為代表的PPCPs類污染物的效能，從自然界中分離出菌株psychrophila HA_4,能夠在低溫環境中促進磺胺甲基異惡唑的降解，對低溫城市污水中的磺胺甲基異惡唑的去除奠定理論基礎。是一株低溫假單胞菌屬菌株。本專利技術的技術解決方案是一株Aewt/offlmash HA_4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌，其特征在于是一株低溫假單胞菌屬菌株，于2012年3月27日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，其保藏號CGMCC No. 5944。菌株Psoudomoims psychrophila HA-4是從活性污泥中分離得到，設定溫度(10°c )篩選，具體篩選步驟如下(I)取20mL哈爾濱太平城市污水廠好氧池新鮮活性污泥加入IOOmL含有20mg/L以磺胺甲基異惡唑為唯一碳源、能源的無機鹽培養基三角瓶中，置于溫度為10°C，轉速為150r/min的搖床中培養一周，獲得富集菌液； (2)取IOmL富集菌液加入IOOmL磺胺甲基異惡唑無機鹽培養基三角瓶中，重復步驟(I)的培養條件3 4次，每次磺胺甲基異惡唑的濃度逐級提高，最終至100mg/L，獲得馴化菌液； (3)取100μ L馴化菌液加入含有100mg/L磺胺甲基異惡唑固體無機鹽培養基平板中，涂布法涂勻，置于溫度為10°C的培養箱中，培養一周，獲得單菌落； (4)重復操作步驟(3)3^4次，即完成純種低溫磺胺甲基異惡唑降解菌的獲得； (5)將篩選出的純種低溫磺胺甲基異惡唑降解菌接種到斜面富集培養基，于40C下保存，接種量10% ； 其中無機鹽培養基的成分是3. 5g K2HP04、0. 5gNaCl、l. 5g ΚΗ2Ρ04、0· 15g MgSO4 · 7H20、0. 5g (NH4)2SO4UmL微量元素溶液溶于IOOOmL蒸餾水中，調節pH7. O ;無機鹽固體培養基的成分是在無機鹽培養基的成分中另加入瓊脂2g/L;富集培養基成分為:1.5 g KH2PO4' O. 15 g MgSO4 ·7Η20、O. 5 g (NH4)2SO4^O. 5 g NaCl、3.5g K2HP04、2g蛋白胨、18g瓊脂、1.0 mL微量元素溶液溶于IOOOmL的蒸餾水中，調節pH到 7. O ；微量元素溶液的成分是0. I g CuSO4 · 5H20、O. 3 g MnSO4 · 4Η20、0· 2 g ZnSO4 · 7H20、2. O g NaHCO3 · IOH2O, O. 5 g CoCl2 · 6Η20、0· 05g CaCl2 · 2Η20、0· 5g FeSO4 · 7Η20、0· 02g(NH4)6Mo7O2 · 4Η20 溶于 IOOOmL 的蒸餾水中。步驟(2)獲得的馴化菌液的OD66tl=L 192 ;培養基均是在121°C，高壓滅菌20分鐘后使用。該菌株psychrophila HA-4適宜在(pH 6.0)的培養介質中生長，生長溫度為10°c，其細菌學形態特征為革蘭氏陰性桿菌，無鞭毛，好氧，可降解磺胺甲基異惡唑，能夠以磺胺甲基異惡唑為唯一碳源和能源生長。經過菌種鑒定，得到了長度為1609bp的16S rDNA序列。PCR 引物采用細菌 16S rDNA 的通用引物 F8 (5，-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3)和 R1522 (5，-AAG GAC GTC ATC CAG CCG CA-3，)。用 PCR 儀(GeneAmp, PCR System9700)進行擴增反應。反應體系總體積為25μ1 :超純水16. 2Pl，10xBuffer 2.5 μ , dNTP2 μ ，F8引物I μ ，R22引物I μ ，ExTaq酶O. 3 μ ，總DNA作一定稀釋后取2 μ 于反應體系中。94°C預變性5 min,經過30個循環，其中，98°C變性20 S，55°C退火40 s，72°C延伸1.5 min, 30個循環后再在72°C延伸7 min, 1%瓊脂糖凝膠電泳,紫外檢測。通過Blast程序進行同源性比較，表明該菌株與Pseudomonas psychrophila的同源性高達99%。本專利技術的菌株Aewt/offlmas psychrophila HA_4應用于低溫下污水中磺胺甲基異惡唑的生物處理。本專利技術的菌株psychrophila HA_4在應用前需在帶有磺胺甲基異惡唑的無機鹽培養基中進行馴化，培養條件為菌株在10°C，pH 7.0，低溫好氧培養。該菌株對低溫生境中磺胺甲基異惡唑有較高的降解能力，且具有廣泛的底物廣譜性，見表I : 表I菌株HA-4的底物廣譜性權利要求1.一歡^Pseudomorms psychrophila HA_4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌,其特征在于是一株低溫假單胞菌屬菌株，于2012年3月27日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，其保藏號CGMCC No. 5944。2.根據權利要求I所述的一株Aewt/offlmaspsychrophila HA_4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌，其特征在于菌株適宜在PH 6.0的培養介質中生長，生長溫度為10°C，其細菌學形態特征為革蘭氏陰性桿菌，無鞭毛，好氧，可降解磺胺甲基異惡唑，能夠以磺胺甲基異惡唑為唯一碳源和能源生長。3.根據權利要求I或2所述的一株Aewt/offlmaspsychrophila HA_4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌的篩選方本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一株Pseudomonas?psychrophila?HA?4低溫磺胺甲基異惡唑降解菌，其特征在于是一株低溫假單胞菌屬菌株，于2012年3月27?日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，其保藏號CGMCC?No.5944。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：馬放，蔣本超，李昂，蔡蕊，崔迪，邱天，張斯，龐長瀧，
申請(專利權)人：哈爾濱工業大學宜興環保研究院，
類型：發明
國別省市：
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