一株能將奎寧酮轉化為(R)-3-奎寧醇的諾卡氏菌及轉化方法技術

本發明專利技術公開了一株諾卡氏菌WY1202及用該菌發酵奎寧酮生產(R)-3-奎寧醇的方法。本發明專利技術菌種以奎寧酮鹽酸鹽為唯一碳源，是從天津市西青區農家果園土壤中篩選而得。菌株Nocardia?sp.WY1202現保藏在中國普通生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCCNo.5095。生產方法為：采用諾卡氏菌WY1202為菌種，經過一級種子培養和二級發酵擴大培養，取發酵培養液，離心收集菌體并洗滌菌體，將菌體重懸于緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，反應24-48h后，離心分離，上清液調pH值至堿性，減壓旋干，得到的殘留物用有機溶劑固液萃取，濾液旋干得到(R)-(-)-3-奎寧醇，且產物的產率為95％、純度為96％、e.e.值＞95％，反應過程中操作簡單，能耗低，符合綠色化學要求，可應用于較大規模的(R)-(-)-3-奎寧醇生物轉化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物工程領域，本專利技術涉及一種發酵合成手性奎寧醇的菌株及其生產方法。
技術介紹
權利要求1.諾卡氏菌Nocardiasp. WY1202,保藏單位為中國普通微生物菌種保藏中心,保藏編號為 CGMCC No. 5095。2.由權利要求I所述菌株能轉化奎寧酮為(R)_3-奎寧醇。3.權利要求I所述菌株的發酵培養方法，其包括步驟 1)種子培養 將諾卡氏菌Nocardia sp. WY1202接入滅菌后的種子液體培養基中，于30 37°C，200 250r/min培養24 48h，得到種子液， 液體培養基的配制如下葡萄糖10 20g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L,氯化鈉lg/L, pH 為 7. O ; 2)發酵培養 將步驟(I)得到的種子液體按接種量I 10%接種到發酵培養基中進行發酵培養，培養條件30 37°C，搖床轉速200 250r/min，發酵時間48 60h，即得到諾卡氏菌的發酵液， 所述發酵培養基的成分為葡萄糖15 20g/L,酵母提取物3g/L,蛋白胨7g/L,磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，硫酸鎂O. 5g/L，氯化鈉lg/L，pH為7. O。4.一種制備權利要求2所述的(R)-3-奎寧醇的方法，其包括如下步驟 1)收集菌體發酵培養權利要求I所述的菌株，得到發酵液，離心收集菌體，得到濕菌體； 2)轉化反應用磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液洗滌濕菌體后重新懸浮于同一緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，在20-50°C搖床上反應，反應24-48h后，停止反應； 3)分離純化(R)-3-奎寧醇產品 反應液離心分離，上清液用無機堿調節pH值到9-14，然后減壓旋蒸，得到的殘留物用二氯甲烷等有機溶劑固液萃取，濾液旋干得部分(R)_3-奎寧醇產品。濾餅溶于二氯甲烷等有機溶劑中攪拌半小時后過濾，濾液旋干得到粗產品，再用丙酮等有機溶劑重結晶得另一部分(R)-3-奎寧醇產品。5.本領域技術人員可以根據本專利技術作出各種改變或變形，只要不脫離本專利技術的技術思想，均屬于本專利技術權利要求所定義的范圍。全文摘要本專利技術公開了一株諾卡氏菌WY1202及用該菌發酵奎寧酮生產(R)-3-奎寧醇的方法。本專利技術菌種以奎寧酮鹽酸鹽為唯一碳源，是從天津市西青區農家果園土壤中篩選而得。菌株Nocardia sp.WY1202現保藏在中國普通生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCCNo.5095。生產方法為采用諾卡氏菌WY1202為菌種，經過一級種子培養和二級發酵擴大培養，取發酵培養液，離心收集菌體并洗滌菌體，將菌體重懸于緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，反應24-48h后，離心分離，上清液調pH值至堿性，減壓旋干，得到的殘留物用有機溶劑固液萃取，濾液旋干得到(R)-(-)-3-奎寧醇，且產物的產率為95％、純度為96％、e.e.值＞95％，反應過程中操作簡單，能耗低，符合綠色化學要求，可應用于較大規模的(R)-(-)-3-奎寧醇生物轉化生產。文檔編號C12N1/20GK102952761SQ20111024464公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月25日 優先權日2011年8月25日專利技術者李鍵煚, 王玉, 吳洽慶, 朱敦明 申請人:天津工業生物技術研究所本文檔來自技高網...

【技術保護點】
諾卡氏菌Nocardia?sp.WY1202，保藏單位為中國普通微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC?No.5095。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李鍵煚，王玉，吳洽慶，朱敦明，
申請(專利權)人：天津工業生物技術研究所，
類型：發明
國別省市：