一株能將奎寧酮轉化為(S)-3-奎寧醇的紅串紅球菌及轉化方法技術

本發明專利技術公開了一株紅串紅球菌WY1406及用該菌發酵奎寧酮生產(S)-3-奎寧醇的方法。本發明專利技術菌種以奎寧酮鹽酸鹽為唯一碳源，是從天津市西青區農家果園土壤中篩選而得。菌株Rhodococcus?erythropolis?WY1406現保藏在中國普通生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC?No.5096。生產方法為：采用紅串紅球菌WY1406為菌種，經過一級種子培養和二級發酵擴大培養，取發酵培養液，離心收集菌體并洗滌菌體，將菌體重懸于緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，反應10-48h后，離心分離，上清液調pH值至堿性，減壓旋干，得到的殘留物用有機溶劑固液萃取，濾液旋干得到(S)-(+)-3-奎寧醇，且產物的產率為95％、純度為95％、e.e.值＞99％，反應過程中操作簡單，能耗低，符合綠色化學要求，可應用于較大規模的(S)-(+)-3-奎寧醇生物轉化制備。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物工程領域，涉及一種發酵合成(S)-(+)-3-奎寧醇的菌株及其生產方法。
技術介紹
權利要求1.紅串紅球菌Rhodococcuserythropolis WY1406,保藏單位為中國普通微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC No. 5096。2.由權利要求I所述菌株能轉化奎寧酮為(S)-3-奎寧醇。3.權利要求I所述菌株的發酵培養方法，其包括步驟 1)種子培養 將紅串紅球菌Rhodococcus erythropolis WY1406接入滅菌后的種子液體培養基中，于30°C，200 250r/min培養20 36h,得到種子液， 液體培養基的配制如下葡萄糖10 20g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L,氯化鈉lg/L, pH 為 7. O ; 2)發酵培養 將步驟(I)得到的種子液體按接種量I 5%接種到發酵培養基中進行發酵培養。培養條件30°C，搖床轉速200 250r/min，發酵時間24 36h，即得到紅串紅球菌的發酵液， 所述發酵培養基的成分為蔗糖15 20g/L，酵母提取物7g/L，蛋白胨3g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，硫酸鎂O. 5g/L，氯化鈉lg/L，pH為7. O。4.一種制備權利要求2所述的(S)-3-奎寧醇的方法，其包括如下步驟 1)收集菌體發酵培養權利要求I所述的菌株，得到發酵液，離心收集菌體，得到濕菌體； 2)轉化反應用磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液洗滌濕菌體后重新懸浮于同一緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，在20-60°C搖床上反應，反應10-48h后，停止反應； 3)分離純化(S)-(+)-3-奎寧醇產品 反應液離心分離，上清液用無機堿調節pH值到9-14，然后減壓旋蒸，得到的殘留物用二氯甲烷等有機溶劑固液萃取，濾液旋干得部分(S)-3-奎寧醇產品，濾餅溶于二氯甲烷等有機溶劑中攪拌半小時后過濾，濾液旋干得到粗產品，再用丙酮等有機溶劑重結晶得另一部分(S)-3-奎寧醇產品。5.本領域技術人員可以根據本專利技術作出各種改變或變形，只要不脫離本專利技術的技術思想，均屬于本專利技術權利要求所定義的范圍。全文摘要本專利技術公開了一株紅串紅球菌WY1406及用該菌發酵奎寧酮生產(S)-3-奎寧醇的方法。本專利技術菌種以奎寧酮鹽酸鹽為唯一碳源，是從天津市西青區農家果園土壤中篩選而得。菌株Rhodococcus erythropolis WY1406現保藏在中國普通生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.5096。生產方法為采用紅串紅球菌WY1406為菌種，經過一級種子培養和二級發酵擴大培養，取發酵培養液，離心收集菌體并洗滌菌體，將菌體重懸于緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，反應10-48h后，離心分離，上清液調pH值至堿性，減壓旋干，得到的殘留物用有機溶劑固液萃取，濾液旋干得到(S)-(+)-3-奎寧醇，且產物的產率為95％、純度為95％、e.e.值＞99％，反應過程中操作簡單，能耗低，符合綠色化學要求，可應用于較大規模的(S)-(+)-3-奎寧醇生物轉化制備。文檔編號C12N1/20GK102952760SQ20111024464公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月25日 優先權日2011年8月25日專利技術者王玉, 李建煚, 吳洽慶, 朱敦明 申請人:天津工業生物技術研究所本文檔來自技高網...

【技術保護點】
紅串紅球菌Rhodococcus?erythropolis?WY1406，保藏單位為中國普通微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC?No.5096。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王玉，李建煚，吳洽慶，朱敦明，
申請(專利權)人：天津工業生物技術研究所，
類型：發明
國別省市：