本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種新型的細(xì)菌限制型培養(yǎng)基。此培養(yǎng)基適合于培養(yǎng)大腸桿菌，志賀氏菌，耶爾森氏菌等多種兼性厭氧型革蘭氏陰性細(xì)菌。本培養(yǎng)基各種營養(yǎng)成分根據(jù)細(xì)菌生長所需的最低營養(yǎng)進(jìn)行調(diào)配，既可以使細(xì)菌得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)，又可以通過缺失一個或多個成分而設(shè)立細(xì)菌生長的營養(yǎng)壓力條件；相比傳統(tǒng)的天然培養(yǎng)基，本培養(yǎng)基具有重復(fù)性強(qiáng)，對細(xì)菌生長所需的所有微量元素都能嚴(yán)格控制等優(yōu)點(diǎn)，可以應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室中有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領(lǐng)域。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種新型的細(xì)菌限制型培養(yǎng)基，適合于培養(yǎng)大腸桿菌，志賀氏菌，耶爾森氏菌等多種兼性厭氧型革蘭氏陰性細(xì)菌。本培養(yǎng)基各種營養(yǎng)成分根據(jù)細(xì)菌生長所需的最低營養(yǎng)進(jìn)行調(diào)配，既可以使細(xì)菌得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)，又可以通過缺失一個或多個成分而設(shè)立細(xì)菌生長的營養(yǎng)壓力條件，從而廣泛適用于實(shí)驗(yàn)室中有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
細(xì)菌的生長需要從外界獲取營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)主要以有機(jī)和無機(jī)化合物的形式為微生物所利用，也有小部分以分子態(tài)的氣體形式被利用。根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)在機(jī)體中生理功能的不同，可以將他們分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子和水五大類。培養(yǎng)基是人工配置，適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)，已有細(xì)菌培養(yǎng)基的種類繁多，對細(xì)菌的生長繁殖作用不一常用的LB、麥芽汁培養(yǎng)基等天然培養(yǎng)基雖然營養(yǎng)成分豐富，但重復(fù)性差，不適合實(shí)驗(yàn)室的定量分析；而常用的合成培養(yǎng)基又不能根據(jù)實(shí)際需要變換營養(yǎng)成分，或者變換成分后細(xì)菌就不在生長。因此，實(shí)驗(yàn)人員希望能有一種重復(fù)性強(qiáng)、每種成分都可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)、細(xì)菌生長速度不會受到很大影響的培養(yǎng)基能夠問世。本 專利技術(shù)的目的在于提供一種能克服已有產(chǎn)品不足的細(xì)菌限制型培養(yǎng)基，具有穩(wěn)定性好、便于重復(fù)、細(xì)菌生長速度快、所有成分可依照需要調(diào)節(jié)等特點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的要點(diǎn)在于選擇合適的組分進(jìn)行合理混配，經(jīng)pH調(diào)節(jié)、過濾除菌而成的一種新型的細(xì)菌限制型培養(yǎng)基。本專利技術(shù)所涉及的配方包含五大類基本營養(yǎng)要素碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子和水。碳源是在微生物生長過程中為微生物提供碳素來源的物質(zhì)，它們在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過一系列復(fù)雜的化學(xué)變化后成為微生物自身的細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物，并且通常碳源物質(zhì)也是微生物的能源物質(zhì)。細(xì)菌對碳源物質(zhì)具有選擇性，糖類是一般微生物較容易利用的良好碳源和能源物質(zhì)；此外，有機(jī)酸、醇、脂類、CO2及碳酸鹽等也可作為微生物利用的碳源物質(zhì)。在本專利技術(shù)中，我們采取了微生物最易采用的葡萄糖酸鉀作為主要的碳源物質(zhì)，并配以檸檬酸以保障培養(yǎng)基中碳源的充足。為微生物提供氮素來源的是氮源物質(zhì)，這類物質(zhì)主要用來合成細(xì)胞中的含氮物質(zhì)，一般不能作為能源。能被微生物利用的氮源物質(zhì)包括蛋白質(zhì)及其不同程度的降解產(chǎn)物(胨、肽、氨基酸等)、銨鹽、硝酸鹽、嘌呤、嘧啶等。大分子的蛋白質(zhì)通常要被進(jìn)一步降解成小分子的肽和氨基酸后才能被微生物吸收利用，以此在本專利技術(shù)中，我們采用了 20種最易被細(xì)胞利用的左旋氨基酸直接作為氮源物質(zhì)，并配以銨鹽以使細(xì)菌可以用最快的速度開始生長繁殖。無機(jī)鹽是為細(xì)菌的生命活動提供除碳、氮源之外的各種重要元素，是微生物生長必不可少的一類營養(yǎng)物質(zhì)，它們在機(jī)體的生理功能主要是作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞的滲透壓平衡、控制細(xì)胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長的能源物質(zhì)等。微生物生長所需的無機(jī)鹽一般有磷酸鹽、硫酸鹽、氯化物以及含有鈉、鉀、鈣、鎂、鐵等金屬元素的化合物。根據(jù)細(xì)菌生長的基本所需，本專利技術(shù)中采用的無機(jī)鹽成分有K2HP04、MnCl2、Na2S203、葡萄糖酸鉀、CaCl2、FeSO4, MgCl2等，這些成分也可以根據(jù)人為需要進(jìn)行調(diào)整，從而進(jìn)行細(xì)菌的營養(yǎng)壓力實(shí)驗(yàn)。生長因子通常指那些微生物生長所必須而且需要量很小，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機(jī)體生長需要的有機(jī)化合物，最早發(fā)現(xiàn)的生長因子在化學(xué)本質(zhì)上都是維生素。維生素在機(jī)體中所起的作用主要是作為酶的輔基或輔酶參與新陳代謝。本專利技術(shù)采用了硫胺素(VBl)、DL-泛酸鈣(VB5)、D-生物素(VH)這三種維生素作為培養(yǎng)基中的生長因子。 除了選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基的配置還需要考慮到pH條件的控制和營養(yǎng)物質(zhì)濃度及合適的配比。每種微生物對最適pH的要求不同，以鼠疫耶爾森氏菌為例，最適pH為7. 2，為了控制培養(yǎng)基的pH值，我們在配比各成分后用NaOH或者HCl進(jìn)行條件，然后加入pH緩沖液HEPES，以保證在細(xì)菌培養(yǎng)的過程中產(chǎn)酸產(chǎn)氣不會過多的影響培養(yǎng)基的pH值。本專利技術(shù)產(chǎn)品的制備方法是(I)按配比將所述組分10X鹽溶液、2X穩(wěn)定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及IOOXFeSO4溶液混合，并攪拌均勻；(2)用NaOH或者鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至7. 2 ;(3)加入Na2S2O3,補(bǔ)充去離子水至最終體積IOOml ；(4)無菌濾器過濾除菌，4°C儲存。本專利技術(shù)同已有的細(xì)菌培養(yǎng)基相比具有如下優(yōu)點(diǎn)(I)根據(jù)細(xì)菌生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行調(diào)配，可以使細(xì)菌得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)從而快速生長；(2)重復(fù)性強(qiáng)，可進(jìn)行各種元素的準(zhǔn)確定量；(3)每種成分都可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)，可以通過缺失一個或多個成分，方便快捷地設(shè)立細(xì)菌生長的營養(yǎng)壓力條件；(4)廣泛適用于實(shí)驗(yàn)室中有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領(lǐng)域；(5)穩(wěn)定性好，儲存液可以保存半年以上；(6)對人體無毒、無刺激，無腐蝕性、無不良?xì)馕丁＞唧w實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步的詳細(xì)說明按照下表所列數(shù)據(jù)及其所屬步驟進(jìn)行配置I.鹽溶液(10 X 儲存液)IOOml 成份(分子量)IOx儲存液濃度終濃度配置IOOOml_mmol/L (用量g)_(mmol/L)_所需質(zhì)量_K2HPO43.H2O (228.22) 25 (0.57055)2.50.57055檸檬酸Η2θ(210.14) 100 (2.1014) 10.0 2.1014NH4C1 (53.49) 100 (0.5349) 10.0 0.5349MnCk.4 H2O (197.92)_0.1 (0.00198)_OOl_0.00198_2. IOX 維生素儲存液(IOOml)權(quán)利要求1.本專利技術(shù)涉及一種新型的細(xì)菌限制性培養(yǎng)基，其特征在于具有如下的配方10X鹽溶液、2X穩(wěn)定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100XL-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及100 XFeS04溶液以一定比例進(jìn)行混合。2.—種權(quán)利要求I所述細(xì)菌限制性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下步驟 (1)按配比將所述組分10X鹽溶液、2X穩(wěn)定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100XCaC12溶液及100XFeS04溶液混合，并攪拌均勻； (2)用NaOH或者鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至7.2 ; (3)加入Na2S203，補(bǔ)充去離子水至最終體積IOOml； (4)無菌濾器過濾除菌，4°C儲存。全文摘要本專利技術(shù)涉及一種新型的細(xì)菌限制型培養(yǎng)基。此培養(yǎng)基適合于培養(yǎng)大腸桿菌，志賀氏菌，耶爾森氏菌等多種兼性厭氧型革蘭氏陰性細(xì)菌。本培養(yǎng)基各種營養(yǎng)成分根據(jù)細(xì)菌生長所需的最低營養(yǎng)進(jìn)行調(diào)配，既可以使細(xì)菌得到充足的營養(yǎng)物質(zhì)，又可以通過缺失一個或多個成分而設(shè)立細(xì)菌生長的營養(yǎng)壓力條件；相比傳統(tǒng)的天然培養(yǎng)基，本培養(yǎng)基具有重復(fù)性強(qiáng)，對細(xì)菌生長所需的所有微量元素都能嚴(yán)格控制等優(yōu)點(diǎn)，可以應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
本專利技術(shù)涉及一種新型的細(xì)菌限制性培養(yǎng)基，其特征在于具有如下的配方：10×鹽溶液、2×穩(wěn)定氨基酸溶液、10×維生素溶液、100×HEPES、100×葡萄糖酸鉀、100×L?色氨酸、50×L?天冬酰胺、50×L?谷氨酰胺、100×CaCl2溶液及100×FeSO4溶液以一定比例進(jìn)行混合。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張洪濤，曲奕，
申請(專利權(quán))人：張洪濤，曲奕，
類型：發(fā)明
國別省市：
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