與GLP-2受體特異性結合的藥物融合體制造技術

本發明專利技術公開了一類結合GLP-2R短肽的藥物融合體，還公開了該類藥物融合體的制備方法及利用該藥物融合體治療炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥的方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于基因工程領域，涉及一類與GLP-2受體結合的特異性藥物融合體及其應用。主要涉及通過基因工程手段將具有活性的、能與GLP-2受體有效結合的多肽片段(幻 通過連接鏈與由(X)n鏡像氨基酸序列組成的多肽片段(X’)n連接在一起，在連接鏈處有聚合物、脂肪酸和糖修飾任一種修飾。所形成的藥物融合體包含2段反向重復的多肽片段序列(幻 與(X’)n。本專利技術還涵蓋了該多肽及其修飾產物在治療炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥中的應用。
技術介紹
腸胃道是消化、吸收營養的主要場所，當機體的腸胃道遭到破壞時，腸胃道對營養物質的消化和吸收能力下降。很多生長因子如表皮生長因子、轉化生長因子、胰島素樣生長因子-I都參與腸上皮生長的調控，能再生、修復損傷的腸粘膜。但缺乏特異性，常常伴隨機·體的不良反應。近年來研究發現，類胰高糖素肽-2 (Glucagon-like peptide-2, GLP-2)通過與其受體(胰高糖素樣肽-2受體,Glucagon-like peptide-2 receptor, GLP-2R)結合，可有效減少胃排空和分泌，并調節小腸內膜細胞的生長、增殖和修復，抑制其凋亡。該藥增加了這些細胞的數量，后者可增加小腸吸收、減少腹瀉。因此補充足夠的GLP-2成為炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥治療的關鍵(Estall et al. , Current PharmaceuticalDesigns, 2006, V12:1731-1750. )0目前基于該機理開發的用于糖尿病治療的多肽主要基于內源性GLP-2(胰高糖素樣肽-2)改造的多肽-替度魯肽(Teduglutide)。為降低二肽基肽酶對上述多肽的酶切，該肽將GLP-2的N端第二位的丙氨酸突變為甘氨酸。但這類多肽分子量比較小，因此應用于臨床時患者治療的依從性不佳。為延長該類小肽的半衰期，一般通用的做法是將該類活性多肽進行聚合物的化學修飾、微球包埋或蛋白融合(包括Fe融合和人血白蛋白融合)。但上述的幾種常規解決手段存在下述潛在問題(I) PEG修飾的長效化制劑，其聚合物直接修飾在GLP-2或其類似物的尾部。由于聚合物和GLP-2或其類似物相比，其分子體積較大，存在的空間位阻效應會影響GLP-2與其受體(GLP-2R)的有效結合，造成體內生物學活性顯著下降；(2)Fc融合多肽后其半衰期的延長并不如所預期的那樣顯著(US Pat.No. 6，756，480，引入這里作為參考)；(3)其它形式如人血白蛋白融合或微球包埋在患者體內有引發免疫原性降低治療效果的風險。盡管替度魯肽已經在美國處于注冊的狀態，但患者在需要每天用藥一次，患者的依從性不佳。目前未有長效的、高活性的GLP-2受體激動劑。因此，在炎性腸道疾病及相關領域中，存在進一步改良GLP-2受體激動劑的極大的、迫切的需要，以在臨床上發揮更佳的治療效果。
技術實現思路
針對上述不足，本專利技術提供了下述構型的化合物權利要求1.具有下式的與GLP-2受體特異性結合的藥物融合體2.根據權利要求I所述的藥物融合體，其結構特征在于所述藥物融合體中包含2段反向重復的多肽序列(互為鏡像的(幻 與(X’)n)，所述的2段重復序列((幻 與(X’)n)通過連接鏈Y連接在一起；在連接鏈的部位有聚合物、脂肪酸或糖其中任一種修飾；X與Y間和X’與Y間不存在或有1-20個氨基酸殘基間隔。3.根據權利要求I和權力要求2所述，η是2。4.根據權利要求I和權力要求2所述，η是I。5.根據權利要求1-4所述，藥物融合體中連接鏈Y包含一個可發生化學修飾的氨基酸位點。6.根據權利要求1-4所述，藥物融合體中X選自 在SEQ ID No: I、No: 2給出的序列; (a)的氨基酸序列中，具有在一個或多個位置的氨基酸被絲氨酸替換； Ca)的氨基酸序列中，具有在一個或多個位置的氨基酸被甘氨酸替換； Ca)的氨基酸序列中，具有在一個或多個位置的氨基酸被丙氨酸替換。7.根據權利要求1-5項所述的藥物融合體中，連接鏈Y長度為3-20個氨基酸，所述連接鏈包括但不限于SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :4給出的氨基酸序列。8.任一項在前權利要求所述，制備的藥物融合體中X片段的N端和X’片段的C端為組氨酸。9.根據權利要求5所述修飾，可發生化學修飾的氨基酸位點為半胱氨酸。10.任一項在前權利要求所述，藥物融合體的化學修飾，包括但不限于脂肪酸修飾、聚乙二醇修飾、包含乙氧基重復結構的嵌段共聚物修飾、糖修飾任一種。11.根據權利要求10所述修飾，是通過Z末端的化學反應基團和連接鏈Y上游離的半胱氨酸反應進行修飾，制備藥物融合體。12.根據權利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為脂肪酸，所述脂肪酸的碳鏈長度為5-30個。13.根據權利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。14.根據權利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為包含乙氧基重復結構的嵌段共聚物，所述的包含乙氧基重復結構的嵌段共聚物的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。15.根據權力要求13所述的藥物融合體，聚乙二醇包括線性的聚乙二醇和分枝型聚乙二醇。16.任一項在前權利要求所述的藥物融合體的X片段，選自GLP-2(1-33)或其類似物。17.—種編碼權利要求1-9、權利要求16任一項的多肽的核苷酸序列。18.—種包含權利要求17的表達載體的宿主細胞。19.權利要求18的宿主細胞為真核細胞。20.權利要求18的宿主細胞為原核細胞。21.任一項在前權利要求所述的藥物融合體在治療炎性腸道疾病的應用。22.任一項在前權利要求所述的藥物融合體在治療克羅恩(Chron’s)疾病的應用。23.任一項在前權利要求所述的藥物融合體在治療短腸綜合癥的應用。全文摘要本專利技術公開了一類結合GLP-2R短肽的藥物融合體，還公開了該類藥物融合體的制備方法及利用該藥物融合體治療炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥的方法。文檔編號A61P29/00GK102949731SQ20111040447公開日2013年3月6日 申請日期2011年12月8日 優先權日2011年9月16日專利技術者于鵬展 申請人:西藏海思科藥業集團股份有限公司本文檔來自技高網...

【技術保護點】
具有下式的與GLP?2受體特異性結合的藥物融合體：X是能結合胰高糖素樣肽?2受體（Glucagon?like?peptide?2?receptor,?GLP?2R）的多肽片段；Y是連接鏈；X’是X的鏡像多肽片段；Z是聚合物、脂肪酸或糖類中的一種；b不存在，或是獨立的、包括1?20個氨基酸殘基的多肽片段；n=1?8。548502dest_path_image001.jpg

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：于鵬展，
申請(專利權)人：西藏海思科藥業集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：