一種新的多肽--人神經毒素受體結合蛋白29.81和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術

本發明專利技術公開了一種新的多肽－人神經毒素受體結合蛋白２９．８１，編碼此多肽的多核苷酸和經ＤＮＡ重組技術產生這種多肽的方法。本發明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如神經性疾病、精神性疾病等。本發明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發明專利技術還公開了編碼這種新的人神經毒素受體結合蛋白２９．８１的多核苷酸的用途。（*該技術在2020年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽——人神經毒素受體結合蛋白29.81，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。α-Latrotoxin是黑寡婦蜘蛛毒液的一種成分，它是一種有效的突觸前神經毒素。α-Latrotoxin可迅速引起大量神經傳遞素的釋放，它的慢性影響可引起細胞膜破損和接合惡化。α-Latrotoxin結合于位于神經終端突觸前漿膜上的具有高度親和力的受體。從鼠和牛腦中分離出一種與α-Latrotoxin以高度親和力結合的蛋白復合物顯示，它含有一個160-220kDA的大分子蛋白和一個29kDa的小分子蛋白。neurexins是具有細胞膜受體特征的一類膜蛋白。大分子蛋白可剪切不同種類的neurexin Iα，重組neurexin Iα與α-Latrotoxin以高親和力結合。小分子蛋白命名為neurexophilin，它可與neurexin Iα強有力的結合。neurexin Iα基因在神經元中廣泛表達，而neurexophilin基因只在少數抑制性中間神經元中高水平表達。對小鼠兩個明顯不同的neurexophilin基因進行基因組分析表明，一個與大鼠具有高的同源性，在大鼠和小鼠的腦中廣泛表達；另一個與牛具有高同源性，但在嚙齒動物中無mRNA與之相對應，證明嚙齒動物表達不同的neurexophilin基因。這兩種neurexophilin基因并不同時表達，而是在不同細胞中選擇性表達。Neurexophilin具有四個結構域N端信號多肽，N端不保守序列，一個有三個潛在的N糖基化位點但不含有半胱氨酸的保守區域，和一個具有六個保守的半胱氨酸殘基的C端區域。鼠和牛neurexophilins不保守的N端的80個殘基中具有20％的同源性，高度同源的C端序列的169個殘基中具有85％的同源性。Neurexophilin中信號序列的存在以及缺乏憎水穿膜區域顯示，它是一種分泌蛋白。Neurexophilin可與neurexin Iα緊密結合，在α-Latrotoxin發揮作用過程中具有重要地位。Neurexophilin基因的表達的表達與一些相關的神經疾病有關。(Petrenko，et.al，J.Neurosci.16，4360-4369，1996)本專利技術的人的基因與鼠神經毒素受體結合基因Neurexophilin 1在蛋白水平上有98％的同源性。且兩者均含有神經毒素受體結合基因Neurexophilin 1的四個特征結構域。基于以上各點，故認為本專利技術的新基因為神經毒素受體結合蛋白基因，命名為{人神經毒素受體結合蛋白29.81}。并以此推斷其與Neurexophilin1相似，同為神經毒素受體結合蛋白家族的成員，并具有相似的生物學功能。由于如上所述人神經毒素受體結合蛋白29.81蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人神經毒素受體結合蛋白29.81蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人神經毒素受體結合蛋白29.81蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽——人神經毒素受體結合蛋白29.81以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人神經毒素受體結合蛋白29.81的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人神經毒素受體結合蛋白29.81的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產人神經毒素受體結合蛋白29.81的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽——人神經毒素受體結合蛋白29.81的抗體。本專利技術的另一個目的是提供了針對本專利技術多肽——人神經毒素受體結合蛋白29.81的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本專利技術的另一個目的是提供診斷治療與人神經毒素受體結合蛋白29.81異常相關的疾病的方法。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本專利技術還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少99％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO1中21-836位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2063位的序列。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人神經毒素受體結合蛋白29.81蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術還涉及一種體外檢測與人神經毒素受體結合蛋白29.81蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本專利技術多肽的量或生物活性。本專利技術也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。本專利技術還涉及本專利技術的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發育性疾病或免疫性疾病或其它由于人神經毒素受體結合蛋白29.81表達異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本說明書和權利要求書中使用的下列術語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質序列及其片段或部分。當本專利技術中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨基酸序列時，這種“多肽”或“蛋白質”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質分子相關的完整的天然氨基酸。蛋白質或多核苷酸“變體”是指一種具有一個或多個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結構或化學性質，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用色氨酸替換甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個或多個氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改變導致與天然存在的分子相比，一個或多個氨基酸或核苷酸的增加。“替換”是指由不同的氨基酸或核苷酸替換一個或多個氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的結構、本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的多肽－人神經毒素受體結合蛋白２９．８１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛裕民，謝毅，
申請(專利權)人：上海博德基因開發有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]