本方法公開了一種檢測面粉中過氧化鈣的酶-比色法，包括以下步驟：樣品中加入稀酸反應，然后用稀堿溶液將溶液調節到6.5-8.0，離心，然后加入過氧化物酶、4-氨基安替比林和苯酚的混合磷酸緩沖液，顯色，定容，離心后，取上清液在505nm處測定吸光度，計算樣品中過氧化鈣的含量。本發明專利技術的方法簡單、快捷、準確、干擾小。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及食品安全檢測中過氧化鈣的檢測，尤其是涉及酶-比色法檢測面粉中摻加的過氧化鈣。
技術介紹
過氧化鈣是一種常見的化工原料，淡黃色結晶粉末，分子量72. 08，廣泛用于食品、化工、紡織等行業。在食品行業，常用來改善小麥粉的后熟、面粉增白、麥粉增筋劑、面粉脫色劑、面包改良劑、食用油漂白等領域。為了增加小麥粉的筋道和口感，面粉行業普遍加入過氧化苯甲酰、過氧化鈣作為小麥粉增筋劑、增白劑。我國自2011年5月I日起，禁止在面粉生產中添加過氧化苯甲酰、過氧化鈣[衛生部等七部(局)發布《關于撤銷食品添加劑過氧化苯甲酰、過氧化鈣的公告》(2011年第4號)]。歐盟已經禁止過氧化苯甲酰、過氧化鈣的添加，美國、加拿大、日本等地還允許添加，如美國過氧化鈣最大允許添加量為45mg/kg。·面團改良劑也經常含有過氧化鈣。將過氧化鈣添加到面粉中，長期食用可能會致癌，對人體健康會產生很大的危害。而有些面粉生產廠家為了面粉脫色、加快面粉的熟化，可能違規濫加過氧化苯甲?；蜻^氧化鈣?，F有的國家標準、行業標準和公開文獻中，未發現有測定面粉中過氧化鈣的方法。因此，十分需要建立一個準確可行的面粉中過氧化鈣的檢測方法。一般過氧化鈣主含量的測定有高錳酸鉀滴定法，然而，由于面粉基質干擾大，該方法不能直接用于面粉中過氧化I丐的測定。辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)可以催化過氧化氫參與的多種還原劑的氧化反應，常用的HRP底物有無色的苯胺類和苯酚類衍生物，通過過氧化物酶催化過氧化氫氧化這些底物，生成有顏色的醌式或偶氮類物質，可以用光度法、熒光法測定。辣根過氧化物酶與其它酶的耦合常用于食品中某些成分的分析，如糊精、淀粉、蔗糖、葡萄糖等，但未發現HRP應用于過氧化物檢測的報道。本專利技術建立了一種檢測面粉中過氧化鈣的酶-比色法，該方法快速、準確、有效，有利于政府質檢部門對面粉行業產品的監管，以及檢測機構對面粉的檢測。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種測定面粉中過氧化鈣的方法。為此，本專利技術采用下述技術方案(I)稱取O. 5-2. 5g樣品于50mL離心管中，加入10_20mL有機溶劑提取，目的是除去其他過氧化物的干擾(如過氧化苯甲酰)，潤旋混勻，8000rpm-12000rpm離心5min,棄去上清液。(2)剩余樣品經5-20mL0. 2_1%稀酸轉移至50mL比色管中，進行酸化，渦旋混勻，室溫下振蕩反應10-20min。(3)然后加入稀堿溶液調節溶液pH值到6. 5-8. 0，定容。(4)將上述溶液轉移至50mL離心管中，IOOOOrpm高速離心分離5min，得上清液；(5)取10-20mL上清液加入過氧化物酶試劑溶液l_3mL，30_4(TC恒溫水浴顯色10-20min,冷卻至室溫，定容至25_50mL。(6)在波長505nm處測定吸光度。步驟(I)中所用的有機溶劑，為丙酮。步驟(2)中所用的稀酸，為稀鹽酸或稀硫酸，優選稀硫酸。步驟(2)中所用的稀酸的 質量濃度為O. 2-1% ;所用的烯酸的體積為5_20mL。步驟⑶中所用的稀堿溶液,為20%和O. I %稀氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液,優選稀氫氧化鈉。步驟(5)所用的過氧化物酶為所用的過氧化酶為辣根過氧化物酶過氧化物酶試劑溶液由辣根過氧化物酶、4-氨基安替比林和苯酚的磷酸鹽緩沖液組成。4-氨基安替比林O. 00154mol/L的O. 2mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH = 7. 6),0. 022mol/L苯酚溶液，兩者的體積比I : I組成混合溶液。將辣根過氧化物酶加入到混合溶液中，輕輕混勻，酶活力10U/mL,4°C下可以保存I個月。樣品溶液若不變色，則沒有摻加過氧化鈣，屬于合格的面粉；溶液若有顏色變化，則為摻加有過氧化鈣。過氧化苯甲酰也是面粉加工常用的增白劑，屬于強氧化劑，遇酸會分解為苯甲酸和過氧化氫。為了避免過氧化苯甲酰的干擾，本方法利用過氧化苯甲酰易溶于丙酮的特點，先利用有機溶劑提取以除去過氧化苯甲酰，然后再檢測過氧化鈣。具體實施例方式下面對本專利技術做進一步詳細說明。實施例I :標準曲線配制分析步驟分別稱取含70. 6% (已經用高錳酸鉀標定)的高純試劑過氧化鈣141. 6mg。加入5mLl%稀硫酸，渦旋混勻反應lOmin。然后滴加20 %稀堿溶液調節pH值到5-6左右，然后用O. I %稀堿溶液調節pH為7. 6。加入二次水定容到100ml，得IOOOmg/L標準儲備液。將標準儲備液用水稀釋10倍，得100mg/L標準中間液。分別取標準中間液O. 25mL、0. 5mL、l. 25mL、2. 5mL、5. 0mL、12. 5mL于50mL比色管中，分別加入過氧化物酶試劑溶液2mL，定容到25mL，水浴37°C恒溫顯色lOmin，冷卻至室溫。得系列含lmg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L和50mg/L過氧化I丐標準溶液，同時做試劑空白。在波長505nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，過氧化鈣濃度橫坐標，繪制標準曲線，標準曲線回歸方程Y=23. 39X-0. 031，其中X為過氧化鈣濃度，單位mg/L ；Y為吸光度。相關系數R2 = O. 9999。實施例2 分析步驟精確稱量某品牌餃子粉2g到50ml離心管中，加入丙酮20ml，渦旋震蕩，IOOOOrpm高速離心5min,棄去上清液。剩余樣品經201^1%稀酸轉移至50mL比色管中，進行酸化，渦旋混勻，在室溫下振蕩反應20min。用20%和O. I %的氫氧化鈉溶液和酸度計調整pH值到7. 6，用二次水定容至刻度，轉入50mL離心管，IOOOOrpm高速離心5min。移取20ml上清液到25mL比色管中，加入2mL酶試劑溶液，搖勻，在37°C水浴鍋中恒溫lOmin，顯淺紅色，冷卻至室溫，定容到25mL，在505nm處測定吸光度，用實施例I的標準曲線，計算該樣品中過氧化鈣含量為70. 5mg/kg。上述實施例僅供說明本專利技術之用，而并非是對本專利技術專利的限制；應當指出的是，對于本領域的普通技術人員，在不脫離本專利技術構思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本專利技術的保護范圍；因此，凡跟本專利技術權利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應屬于本專利技術權利要求的覆蓋范圍?！け疚臋n來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測面粉中過氧化鈣的酶？比色法，其特征包括如下步驟：(1)樣品中加入有機溶劑，渦旋混勻，高速離心，棄去清液；(2)加入稀酸反應，然后加入稀堿溶液調節溶液pH值到6.5？8.0，定容，離心；(3)取上清液，加入過氧化物酶和4？氨基安替比林和苯酚的混合磷酸鹽緩沖液，30？40℃恒溫水浴顯色，定容；(4)在波長505nm處測定吸光度，計算面粉中過氧化鈣的含量。
【技術特征摘要】
1.一種檢測面粉中過氧化鈣的酶-比色法，其特征包括如下步驟 (1)樣品中加入有機溶劑，渦旋混勻，高速離心，棄去清液； (2)加入稀酸反應，然后加入稀堿溶液調節溶液pH值到6.5-8. O,定容，離心； (3)取上清液，加入過氧化物酶和4-氨基安替比林和苯酚的混合磷酸鹽緩沖液，30-40°C恒溫水浴顯色，定容； (4)在波長505nm處測定吸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：宋薇，
申請(專利權)人：譜尼測試科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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