本發明專利技術公開了一種A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原酶聯診斷試劑盒，包括由A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板、標本稀釋液、酶標二抗、洗滌液、顯色液、終止液構成。本發明專利技術提供試劑盒的檢測結果與美國R&D試劑盒腦膜炎奈瑟菌A+C型IgM?ELISA檢測試劑盒的一致性高，靈敏度為98%，特異度為99.7%。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及腦膜炎奈瑟菌的檢測，具體是ー種A、C型腦膜炎奈瑟菌酶聯診斷試劑盒及其制備方法。
技術介紹
腦膜炎奈瑟菌是ー種革蘭氏陰性雙球菌，通過呼吸道傳染引起的流行性腦脊髓膜炎(簡稱流腦)是ー種對人類危害嚴重的傳染性疾病，此外還可引起菌血癥、肺炎、關節炎、結膜炎、心肌炎、泌尿系統等多種炎癥，是ー種常見和多發疾病。腦膜炎奈瑟球菌可分為A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E和W135共13個血清群，對人類致病的多屬A、B、C群，其他類群在帶菌者中經常發現，但很少致病。我國的流腦流行菌群仍以A群為主，但近年來也發人群中的絕大多數人對腦膜炎奈瑟球菌易感，該菌可寄生于正常人的鼻咽腔內，處于這種寄 生狀態的細菌并不導致任何病理變化，亦不引起任何疾病癥狀；但這種帶菌狀態可以持續I周到數月之久，這種處于潛伏感染狀態的帶菌者在人群中的比例可高達50% 85%。人群中的帶菌者是造成流行性腦脊髄膜炎流行的最重要的傳染源，由于腦膜炎奈瑟菌的惟一自然宿主是人，因此，在人群較為密集的場所，容易造成細菌的高效率的傳播，特別是在兒童、中小學生為最易感人群，極易在短時間內造成兒童發病流行，所以，控制人群中的帶菌者傳染源成為控制流腦流行的重要環節之一。目前國內市場上腦膜炎奈瑟菌的各種免疫診斷試劑盒質量參差不齊，既無統ー的質量標準，又在無序生產與應用，給腦膜炎奈瑟菌的預防和診治造成嚴重障礙。目前雖有國外試劑商提供同類商品化診斷試劑盒用于檢測，但是此種試劑盒價格十分昂貴，限制了臨床的廣泛使用。
技術實現思路
針對現有技術存在的上述問題和缺陷，本專利技術的目的是提供ー種A、C型腦膜炎奈瑟菌酶聯診斷試劑盒及其制備方法，即可用于腦膜炎奈瑟菌全菌的定性和定量的檢測。為實現上述專利技術目的，本專利技術采用的技術方案如下ー種A、C型腦膜炎奈瑟菌酶聯診斷試劑盒，由A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板、標本稀釋液、酶標ニ抗、洗漆液、底物液、終止液構成,具體組份為(I)、標本稀釋液含10%小牛血清和2%抗人IgG的0. 01M、pH7. 4的磷酸鹽緩沖液；(2)、洗滌液含有0. 05%Tween20的磷酸鹽緩沖液；(3)、酶標ニ抗辣根過氧化物酶標記的鼠抗人IgM單抗；(4)、底物液TMB-H000尿素溶液；(5)，終止液2mol/LH2S04 溶液；所述A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板通過如下步驟制得(I)、在96孔酶標板的每孔內加入0. IMNaHCO3稀釋的5%戊ニ醛200uL，于37°C溫箱中放置80-90分鐘,然后用去離子水洗漆96孔酶標板3-5次,甩干,備用；(2)、將A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌等體積混合后，用包被液按I :1000 1100的體積比稀釋后，包被處理后的96孔酶標板，每孔95-105ul ;然后于37°C溫箱中烘干10-18小時；(3)、取過夜烘干的抗原包被96孔酶標板用200uL用PBS稀釋的10%小牛血清的填滿，然后于35-38°C下封閉1-2小吋，即得抗原包被酶標反應板；其中，所述的A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌的濃度為3X 109cfu/mL。制備上述A、C型腦膜炎奈瑟菌酶聯診斷試劑盒的方法，包括制備A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板和配置其標本稀釋液、酶標ニ抗、洗滌液、底物液、終止液；其中 所述A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板通過如下步驟制得(I)、在96孔酶標板的每孔內加入0. IMNaHCO3稀釋的5%戊ニ醛200uL，于37°C溫箱中放置80-90分鐘,然后用去離子水洗漆96孔酶標板3-5次,甩干,備用；(2)、將A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌等體積混合后，用包被液按I :1000 1100的體積比稀釋后，包被處理后的96孔酶標板，每孔95-105ul ;然后于37°C溫箱中烘干10-18小時；(3)、取過夜烘干的抗原包被96孔酶標板用200uL用PBS稀釋的10%小牛血清的填滿，然后于35-38°C下封閉1-2小吋，即得抗原包被酶標反應板；其中，所述的A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌的濃度為3X 109cfu/mL。作為ー種優選方案，所述的標本稀釋液中2%抗人IgG的0. 01M、pH7. 4的磷酸鹽緩沖液是由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、硫柳汞 0. lg，加雙蒸水至lOOOmL，調至 pH7.4 制得；所述的洗滌液是由NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、Tween-200. 5ml、硫柳萊0. lg、加雙蒸水至1000ml,調至pH7. 4制得；所述的底物液是經200mg3、3’、5、5’ 一四甲基聯苯胺、IOOml無水こ醇、加雙蒸水至1000ml得底物液A ；Na2HPO414. 60g、朽1檬酸9. 33g、0. 75%過氧化氫尿素6. 4ml、加雙蒸水至1000ml，調至pH5. (T5. 5得底物液B ;將底物液A和底物液B按I : I I. 5的體積比混合制得；所述的終止液是由IOOml濃硫酸緩慢滴加引入600ml雙蒸水中不斷攪拌，然后加雙蒸水至900ml制得。本專利技術提供試劑盒的檢測結果與美國R&D試劑盒腦膜炎奈瑟菌A+C型IgMELISA檢測試劑盒的一致性高，靈敏度為98%，特異度為99. 7%。具體實施例方式以下結合具體實施例，進ー步闡明本專利技術。應理解，下述實施例僅用于說明本專利技術而不用于限制本專利技術的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。比例和百分比基于重量，除非特別說明。實施例(I)、試劑包被液(0.05mol/L,pH9. 6 的碳酸鈉_碳酸氫鈉緩沖液)=Na2CO3L 5g、NaHC032. 9g、Na2N3O. 2g,加雙蒸水至 1000ml,調至 pH9. 6 ；標本稀釋液(含10%小牛血清和2%抗人IgG的0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)pH7. 4)，PBS :由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、硫柳汞 0. lg，加雙蒸水至lOOOmL，調至pH7. 4，即得；封閉液(10%小牛血清IPRS溶液)小牛血清100ml XPBS (pH7. 4) 900ml ；洗滌液(PBST,pH7. 4):由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、Tween200. 5ml、硫柳萊 0. lg、加雙蒸水至 1000ml,調至 pH7. 4 ；酶標ニ抗(HRP*鼠抗人IGM單抗)辣根過氧化物酶標記的鼠抗人IgM單抗；底物液(TMB-H202尿素溶液) ①底物液A(3、3’、5、5’ -四甲基聯苯胺，TMB) :TMB200mg，無水こ醇100ml，加雙蒸水至 IOOOrnl ②底物液B緩沖液(0. Imol/L檸檬酸-0. 2mol/L磷酸氫ニ鈉緩沖液，pH5. 0 5.4) Na2HP0414. 60g,梓檬酸9. 33g, 0. 75%過氧化氫尿素6. 4ml,加雙蒸水至1000ml,調至pH5. 0-5. 5 ；⑧本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種A、C型腦膜炎奈瑟菌酶聯診斷試劑盒，其特征在于：它由A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板、標本稀釋液、酶標二抗、洗滌液、底物液、終止液構成，具體組份為：標本稀釋液：含10%小牛血清和2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸鹽緩沖液；洗滌液：含有0.05%Tween20的磷酸鹽緩沖液；酶標二抗：辣根過氧化物酶標記的鼠抗人IgM單抗；底物液：TMB？H000尿素溶液；終止液：2mol/LH2S04溶液；所述A、C型腦膜炎奈瑟菌抗原包被酶標反應板通過如下步驟制得：1)、在96孔酶標板的每孔內加入0.1MNaHC03稀釋的5%戊二醛200uL，于37℃溫箱中放置80？90分鐘，然后用去離子水洗滌96孔酶標板3？5次，甩干，備用；2)、將A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌等體積混合后，用包被液按1：1000～1100的體積比稀釋后，包被處理后的96孔酶標板，每孔95？105ul；然后于37℃溫箱中烘干10？18小時；3)、取過夜烘干的抗原包被96孔酶標板用200uL用PBS稀釋的10%小牛血清的填滿，然后于35？38℃下封閉1？2小時，即得抗原包被酶標反應板；其中，所述的A型腦膜炎奈瑟菌和C型腦膜炎奈瑟菌的濃度為3×l09cfu/mL。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳克，
申請(專利權)人：吳克，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。