一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒及其使用方法技術

本發明專利技術涉及一種膠體金檢測技術，尤其涉及一種間接標記的用于檢測食物中藥物殘留的試劑盒及其使用方法，屬于食品安全快速檢測技術領域。一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒,包括檢測板和金標微孔，檢測板包括載體膜和膠體金結合墊，膠體金結合墊附著于載體膜上的一端，所述金標微孔上包被有單克隆抗體與膠體金的結合物；所述載體膜上設有檢測區和質控區，檢測區上固定有特異性結合抗原，質控區上固定有二抗。本發明專利技術采用間接方法標記不僅避免了特異性抗體的標記損傷，節省特異性抗體的用量，還能提高產品的特異性和靈敏度。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種膠體金檢測技術，尤其涉及一種間接標記的用于檢測食物中藥物殘留的試劑盒及其使用方法，屬于食品安全快速檢測

技術介紹
目前，對于食物中藥物殘留的檢測，例如，水產品中的呋喃唑酮的檢測的方法，常見的有化學比色法、液相色譜法、酶聯免疫法、膠體金法等。其中，前面三種方法存在一些缺陷，不能滿足現場快速檢測的要求，主要表現在化學比色法的干擾比較多導致特異性變差，檢測的靈敏度也不高，達不到市場的要求；液相色譜法的特異性好，靈敏度也比較高，但是需要特殊的儀器設備，專業的操作人員，檢測費用很高，檢測所需時間也比較長，一般需 要隔天才能出檢測結果，單個樣本的檢測費用基本都在2000左右，不適合廣泛的推廣；酶聯免疫法需要使用酶標儀，需要專業的操作人員，操作時間比膠體金法要長2小時左右，不適合現場操作，費用也比膠體金法稍高，若檢測樣本較少，費用也將成倍高于膠體金法。膠體金法利用抗原與抗體的高度專一性特異反應來進行檢測，具有高靈敏度和高特異性，操作過程簡單，不需要使用特殊的儀器設備，所需時間較短，5 8分鐘即可判讀，事前需要進行樣本處理的也能在2個小時內出結果，而且結果可用肉眼判讀，適合現場檢測，可以較好的實現我國食品安全領域快速、準確的檢測要求。因為檢測樣本的原因，如水產品容易死亡，特別是在流通的環節，必須使用快速方法進行檢測，以上數種方法中也只有免疫膠體金法能夠滿足要求。然而現有技術中，人們在使用膠體金法檢測時，都是在單克隆抗體上用膠體金直接標記，不僅抗體用量大，且會導致被標記抗體的活性出現明顯的下降，從而導致產品靈敏度降低。例如，申請號為200810224933. 3的中國專利技術專利，公開了一種檢測禽流感的試紙條及其制備方法，該試紙條包括以下部分墊板、硝酸纖維素膜、兩個結合墊和兩片吸水濾紙，所述的硝酸纖維素膜含有金標記的AIV單克隆抗體、AIV血清和羊抗鼠IgG，所述的結合墊是含有脫脂酪蛋白、金標記的AIV單克隆抗體、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃纖維膜。在使用該種方法時，就容易出現膠體金用量大，抗體活性降低的技術問題，從而導致靈敏度降低。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是提供一種間接標記的檢測食物中藥物殘留的試劑盒。它具有檢測靈敏度高的優點。本專利技術的上述目的可以通過以下技術方案得以實現的。一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒，包括檢測板和金標微孔，檢測板包括載體膜和膠體金結合墊，膠體金結合墊附著于載體膜上的一端，所述金標微孔上包被有單克隆抗體與膠體金的結合物；所述載體膜上設有檢測區和質控區，檢測區上固定有特異性結合抗原，質控區上固定有二抗； 所述單克隆抗體與膠體金的結合物具體為，膠體金標記在抗抗體上而所述抗抗體與單克隆抗體特異性結合，的一種結合物。本專利技術的上述目的還通過以下技術方案得以實現的。一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒，包括檢測板，檢測板包括載體膜和膠體金結合墊，膠體金結合墊附著于載體膜上的一端，所述膠體金結合墊上包被有單克隆抗體與膠體金的結合物；所述載體膜上設有檢測區和質控區，檢測區上固定有特異性結合抗原，質控區上固定有二抗； 所述單克隆抗體與膠體金的結合物具體為，膠體金標記在抗抗體上而所述抗抗體與單克隆抗體特異性結合，的一種結合物。 本專利技術采用的方法是膠體金免疫層析法，膠體金是一種負電荷的疏水膠，靠靜電粒子相互排斥作用來維持穩定的膠體體系，直徑從幾納米到幾十納米不等。由于不同直徑的膠體金的光散射各異，所以其溶膠顏色的深淺相應發生顯著的變化，這就是膠體金用于被動凝集試驗的基礎。同時由于膠體金金顆粒對蛋白質有很強的吸附功能，可與SPA，Igg，毒素、糖蛋白、酶、抗生素和激素等多種物質非共價結合，從而使其成為免疫反應的優良標記物。本專利技術所述單克隆抗體與膠體金的結合物，為膠體金標記在抗抗體上而所述抗抗體與單克隆抗體特異性結合，的一種結合物。而這種結構的結合物是采用間接標記的方法制備的。方法為不對目標抗體進行直接的標記，而采用標記抗抗體，然后把目標抗體加入標記抗抗體的膠體金溶液中。如要標記鼠抗AOZ-BSA抗體，不對該抗體直接進行標記，而采用標記羊抗鼠抗體，標記好以后，將鼠抗AOZ-BSA抗體加入標記好的羊抗鼠膠體金溶液，利用標記好的羊抗鼠溶液會和鼠源性抗體結合的特點，以達到對鼠抗AOZ-BSA抗體進行膠體金標記的目的。這樣做的優點在于，標記過程中，抗體的效價會降低，因未對單抗進行標記，效價降低的只是羊抗鼠抗體，如果效價降低出現在單克隆抗體上，那么會降低靈敏度；而且因為效價降低，單抗的使用量必須增加，以保證檢測時足夠的顯色指示，這也會導致產品靈敏度的降低。本專利技術采用間接標記法，標記在二抗上，如羊抗鼠IgG，此時效價降低的是羊抗鼠IgG，而單克隆抗體才是檢測的關鍵，因此羊抗鼠效價的降低，并不會對結果產生影響，從而有效地提高了檢測的靈敏度，同時還節省了單克隆抗體的用量。作為上述技術方案的優選，所述檢測板還包括樣品墊、吸水墊、載體板和背襯，所述載體膜附著在背襯上，背襯附著在載體板上；樣品墊設在膠體金結合墊上，所述載體膜上相對于所述膠體金結合墊的另一端設有吸水墊。作為上述技術方案的優選，所述載體板采用塑料板，所述載體膜采用硝酸纖維素薄膜。本專利技術從一個創新角度出發，提供了兩種技術方案的試劑盒。一種是具有金標微孔的，一種是沒有金標微孔的。具有金標微孔的試劑盒，檢測時，待檢溶液先加入金標微孔中，反應后轉移到檢測板的樣品墊上，樣品溶液因載體膜的毛細管作用向另一端擴散。在移動的過程中，會發生相應的抗原抗體反應，并通過免疫膠體金的顏色顯示出來。如果樣品溶液含有相應藥物殘留，藥物將和膠體金顆粒上的抗體先行反應，因此當膠體金顆粒隨樣品溶液擴散至檢測區時，膠體金顆粒上抗體的活性位點因被樣品溶液中的藥物占據而無法與檢測區上特異性抗原結合；所以當樣品中的藥物含量超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測區將較質控區顯色淡甚至無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中藥物含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測區顯色與質控區相近或偏深，判定為陰性。無金標微孔的試劑盒，其單克隆抗體與膠體金的結合物是包被在膠體金結合墊上的，使用時直接將待檢溶液滴在樣品墊上。然檢測的判定方法以及檢測的原理都是一致的。本專利技術的目的之二是提供一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒的使用方法。一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒的使用方法，它采用了具有金標微孔的試劑盒的技術方案中對待測樣品進行檢測，檢測時將樣品溶液滴加在金標微孔中，等待數分鐘后，轉移到檢測板上，等待數分鐘后，肉眼觀察，若檢測區較之質控區顯色淡或無顯色，判定為陽性，反之，判定為陰性。一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒的使用方法，它采用了無金標微孔的試劑盒的技術方案對待測樣品進行檢測，檢測時將樣品溶液滴加在檢測板上，等待數分鐘后，肉眼觀 察，若檢測區較之質控區顯色淡或無顯色，判定為陽性，反之，判定為陰性。作為上述技術方案的優選，所述樣本處理是將樣本組織中的藥物萃取出來，然后進行稀釋或濃縮的一種技術手段。有些樣本可以通過簡單的常規處理就能直接用于檢測，而有些樣本則不行，因此需要通過樣本處理，把樣本中的待檢物質提取出來，從而達到檢測目的。通過溶液配方的配比組合，使得不同樣本間的差異最小化，同時，保證樣本的前處理工藝具有本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測食物中藥物殘留的試劑盒,包括檢測板和金標微孔，檢測板包括載體膜和膠體金結合墊，膠體金結合墊附著于載體膜上的一端，其特征在于：所述金標微孔上包被有單克隆抗體與膠體金的結合物；所述載體膜上設有檢測區和質控區，檢測區上固定有特異性結合抗原，質控區上固定有二抗；所述單克隆抗體與膠體金的結合物具體為，膠體金標記在抗抗體上而所述抗抗體與單克隆抗體特異性結合，的一種結合物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：周崇盈，查美蘭，
申請(專利權)人：湖州艾維德生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：