雙層式免疫層析試紙制造技術

本實用新型專利技術公開了一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I包含上樣墊I(1)等，在硝酸纖維素膜I(5)的上表面分別設置膠體金墊I(2)和吸樣墊I(4)，上樣墊I(1)位于膠體金墊I(2)的上表面；試紙組件II包含上樣墊II(11)等；在硝酸纖維素膜II(15)的下表面分別設置膠體金墊II(12)和吸樣墊II(14)，上樣墊II(11)位于膠體金墊II(12)的下表面；支撐板I(7)的背面與支撐板II(17)的背面固定相連。本實用新型專利技術還同時公開了另一種雙層式免疫層析試紙。該雙層式免疫層析試紙能用于同時檢測結核分枝桿菌分泌蛋白CFP-10和ESAT-6。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及一種雙層式免疫層析試紙。
技術介紹
據世界衛生組織統計，全球已有近1/3的人口感染了結核分枝桿菌，在某些發展中國家的成人中結核分枝桿菌攜帶率高達80%，其中約5% -10%攜帶者可發展為活動性結核病。我國結核病人數居全球第二位，每年死于結核病的人是各類傳染病死亡人數總和的兩倍多。近二十年由于艾滋病的流行，感染了人類免疫缺陷病毒(HIV)的結核分枝桿菌攜帶者發展為活動性結核病的可能性比未感染HIV者高30-50倍。結核病又成為了威脅人類健康的全球性衛生問題，更是影響我國發展的重大社會和經濟問題。結核病的實驗室診斷主要依賴細菌學涂片和培養檢查。由于方法所限，嚴重影響了結核病的及時診斷。因此，多年來國內外學者一直在尋找快速、敏感、特異、簡便的實驗室診斷方法。
技術實現思路
本技術要解決的技術問題是提供一種使用簡便快捷、靈敏度和特異性高的雙層式免疫層析試紙。為了解決上述問題，本技術提供一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I由上樣墊I、膠體金墊I、包被質控線I和檢測線I的硝酸纖維素膜I、吸樣墊I以及支撐板I組成；在硝酸纖維素膜I的上表面分別設置膠體金墊I和吸樣墊I，上樣墊I位于膠體金墊I的上表面，硝酸纖維素膜I的下表面與支撐板I的正面固定相連；試紙組件II由上樣墊II、膠體金墊II、包被質控線II和檢測線II的硝酸纖維素膜II、吸樣墊II以及支撐板II組成；在硝酸纖維素膜II的下表面分別設置膠體金墊II和吸樣墊II，上樣墊II位于膠體金墊II的下表面，硝酸纖維素膜II的上表面與支撐板II的正面固定相連；支撐板I的背面與支撐板II的背面固定相連。作為本技術的雙層式免疫層析試紙的改進膠體金墊I為含有金標記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測線I為包被在硝酸纖維素膜I上的抗CFP-10單克隆抗體TBCD6 ;質控線I為包被在硝酸纖維素膜I上的羊抗鼠IgG抗體；膠體金墊II為含有金標記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測線II為包被在硝酸纖維素膜II上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質控線II為包被在硝酸纖維素膜II上的羊抗鼠IgG抗體。本技術還同時提供了另一種雙層式免疫層析試紙，由分別設置在支撐板正反兩面的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I由上樣墊I、膠體金墊I、包被質控線I和檢測線I的硝酸纖維素膜I以及吸樣墊I組成；在硝酸纖維素膜I的上表面分別設置膠體金墊I和吸樣墊I，上樣墊I位于膠體金墊I的上表面，硝酸纖維素膜I的下表面與支撐板的正面固定相連；試紙組件II由上樣墊II、膠體金墊II、包被質控線II和檢測線II的硝酸纖維素膜II以及吸樣墊II組成；在硝酸纖維素膜II的下表面分別設置膠體金墊II和吸樣墊II，上樣墊II位于膠體金墊II的下表面，硝酸纖維素膜II的上表面與支撐板的反面固定相連。作為本技術的雙層式免疫層析試紙的改進膠體金墊I為含有金標記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測線I為包被在硝酸纖維素膜I上的抗CFP-10單克隆抗體TBCD6 ;質控線I為包被在硝酸纖維素膜I上的羊抗鼠IgG抗體；膠體金墊II為含有金標記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測線II為包被在硝酸纖維素膜II上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質控線II為包被在硝酸纖維 素膜II上的羊抗鼠IgG抗體。本技術的雙層式免疫層析試紙的有益效果是可快速檢測液體培養基中的結核分枝桿菌分泌性抗原靶蛋白CFP-10和ESAT-6，從而鑒定是否為人的致病結核分枝桿菌，即使非專業人員也能輕易進行操作，5-30分鐘內觀察結果，最少可檢出CFP-10蛋白1.2ng/ml、ESAT-6蛋白2. 4ng/ml。本技術的雙層式免疫層析試紙具有簡便性、敏感性、特異性和快速性的優點，而且價格便宜適于基層現場使用。以下結合附圖對本技術的具體實施方式作進一步詳細說明。圖I是本技術的一種雙層式免疫層析試紙的主視結構的爆破示意圖；圖2是圖I的俯視示意圖；圖3是圖I的仰視示意圖；圖4是本技術的另一種雙層式免疫層析試紙的主視結構的爆破示意圖。具體實施方式下面結合具體實施例，進一步闡述本技術。應理解，這些實施例僅用于說明本技術而不用于限制本技術的范圍。實施例I、圖I 圖3結合給出了一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成。試紙組件I由上樣墊I I、膠體金墊I 2、包被質控線I 3和檢測線I 6的硝酸纖維素膜I 5、吸樣墊I 4以及支撐板I 7組成；在硝酸纖維素膜I 5的上表面分別設置膠體金墊I 2和吸樣墊I 4，上樣墊I I位于膠體金墊I 2的上表面，硝酸纖維素膜I 5的下表面與支撐板I 7的正面固定相連。膠體金墊I 2為含有金標記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測線I6為包被在硝酸纖維素膜I 5上的抗CFP-10單克隆抗體TB⑶6 ;質控線I 3為包被在硝酸纖維素膜I 5上的羊抗鼠IgG抗體。試紙組件II由上樣墊II 11、膠體金墊II 12、包被質控線II 13和檢測線II 16的硝酸纖維素膜II 15、吸樣墊II 14以及支撐板II 17組成；在硝酸纖維素膜II 15的下表面分別設置膠體金墊II 12和吸樣墊II 14，上樣墊II 11位于膠體金墊II 12的下表面，硝酸纖維素膜II 15的上表面與支撐板II 17的正面固定相連；膠體金墊II 12為含有金標記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測線II 16為包被在硝酸纖維素膜II 15上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質控線II 13為包被在硝酸纖維素膜II 15上的羊抗鼠IgG抗體。支撐板I 7的背面與支撐板II 17的背面固定相連。試紙組件I例如可按照如下方法進行制備I、制備并純化抗CFP-10小鼠單克隆抗體TB⑶6和TBCA6I)、單抗腹水的誘導在接種雜交瘤細胞前一周，給BALB/C小鼠腹腔注射降植烷 每只O. 5ml，然后每只接種5X IO6能產生TB⑶6或TBCA6的陽性雜交瘤細胞，10天后收集腹水離心，測定抗體效價。上述能產生小鼠單克隆抗體TB⑶6或TBCA6的陽性雜交瘤細胞來源于中國典型培養物保藏中心；保藏編號分別為CCTCC NO C201082 ；CCTCC NO :C201083。其在已公開發表的專利中均有明確告知。2)單克隆抗體的純化利用Protein G親和純化法純化腹水中的TB⑶6或TBCA6單克隆抗體。2、制作包被檢測線I 6和質控線I 3的硝酸纖維素膜I 5 ;g卩，將TB⑶6單克隆抗體溶液以及羊抗鼠IgG溶液分別噴到硝酸纖維素膜I 5上，晾干后將其(包被檢測線I 6和質控線I 3的硝酸纖維素膜I 5)粘貼在支撐板I 7上；包被檢測線I 6和質控線I 3的硝酸纖維素膜I 5的制作方法如下I)、用O. 01mol/L PH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液將抗CFP-10單克隆抗體TBCD6配制成濃度為O. 3mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜I 5的下表面以O. 8 I. 2ul/cm(最佳為lul/cm)的參數劃線，包被成檢測線I 6 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種雙層式免疫層析試紙，其特征是：由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成；所述試紙組件I由上樣墊I(1)、膠體金墊I(2)、包被質控線I(3)和檢測線I(6)的硝酸纖維素膜I(5)、吸樣墊I(4)以及支撐板I(7)組成；在硝酸纖維素膜I(5)的上表面分別設置膠體金墊I(2)和吸樣墊I(4)，上樣墊I(1)位于膠體金墊I(2)的上表面，硝酸纖維素膜I(5)的下表面與支撐板I(7)的正面固定相連；試紙組件II由上樣墊II(11)、膠體金墊II(12)、包被質控線II(13)和檢測線II(16)的硝酸纖維素膜II(15)、吸樣墊II(14)以及支撐板II(17)組成；在硝酸纖維素膜II(15)的下表面分別設置膠體金墊II(12)和吸樣墊II(14)，上樣墊II(11)位于膠體金墊II(12)的下表面，硝酸纖維素膜II(15)的上表面與支撐板II(17)的正面固定相連；支撐板I(7)的背面與支撐板II(17)的背面固定相連。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐寧，姚航平，
申請(專利權)人：浙江工業大學，
類型：實用新型
國別省市：