從野菊花中分離制備刺槐素單體的方法技術

從野菊花中分離制備刺槐素單體的方法，涉及野菊花的加工方法。提供一種分離效率高、回收率高的采用高速逆流色譜法從野菊花中分離制備刺槐素單體的方法。1）制備構成固定相、流動相的溶劑體系，所述溶劑體系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水組成；2）先使高速逆流色譜儀填充固定相，然后調節流動相流速及主機轉速，再泵入流動相并平衡；3）由進樣閥進樣；4）收集目標組分，經減壓蒸干后重結晶，即得刺槐素單體。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及野菊花的加工方法，尤其是涉及一種采用高速逆流色譜法。
技術介紹
野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L.)的干燥頭狀花序。在我國盛產于吉林、遼寧、河北、山西等地。我國對野菊花的研究歷史悠久，《中國藥典》(2010版)中記載野菊花具有清熱解毒、瀉火平肝的功效?，F代藥理證明:野菊花具有廣譜抗菌、降壓、增加冠脈血流量、抗病毒、清除氧自由基等作用(張捷，譚生建，姜韌，等，野菊花的研究進展，中國新醫藥，2004，3 (1):8-10)。野菊花中主要含有揮發油、刺槐苷(acaciin)、蒙花苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素(acacetin)等成分(畢躍峰，潘成學，王普菊，等.野菊花化學成分的研究，中國藥學雜志，2009，44 (12):8794-897)，刺槐素具有抗炎、抗過氧化、抑菌、促進白血球吞噬等作用(吳釘紅，楊立偉，蘇薇薇，野菊花化學成分及藥理研究進展，中藥材，2004，27 (2):142-144)，刺槐素可以抑制多種腫瘤細胞的生長，具有良好的抗腫瘤應用前景(陳妙汝，楊佩玉，許志宏等，刺槐素抑制人類腫瘤細胞生長的體外試驗，J Int ChinWest Med,2007,9 (2):15_20)。刺槐素在自然界中存在量極低，且多與糖結合，以苷的形式存在，因此大量研究人員一直在探索刺槐素的理想分離純化方法。除野菊花中含有刺槐素外，飛機草及大薊中也都含有刺槐素。目前有關文獻報道中，刺槐素的提取方法主要為柱層析法，如娃膠柱層析法、凝膠柱層析法、聚酰胺柱層析法等。柱層析法的不足之處是:分離周期長，回收率低，成本較高，分離效果很不理想。經文獻檢索，刺槐素的提取方法已`有一些文獻報道(丁智慧，張學镅，劉吉開，等，飛機草中的化學成分，天然產物研究與開發，2001，13(5):22-24 ;鄭晗，萬春鵬，張的鳳，等，大薊炭化學成分的研究，江西中醫學院學報，2009,21 (2):83-85;朱性海，王秀敏，連惠龍，等，水解法提取純化刺槐素的工藝研究，中國生化藥物雜志，2012，3 (33):275-277),同時有3篇與刺槐素提取方法有關的中國專利:一種柳穿魚黃酮及其總黃酮的制備方法和用途，申請號:200910010324.2 ;野菊花類黃酮類色素的提取和制備方法，申請號:201010515860.0 ;一種從菊花中提取刺槐素的方法，申請號:201110409452.1 ;但上述專利所用提取的方法主要以柱層析為主。高速逆流色譜(High-speedCounter-current Chromatography,HSCCC)是一種新型的、連續高效的液-液分配色譜技術，不需任何固態載體，避免固相載體表面與樣品發生反應而導致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時它也具有適用范圍廣、快速、進樣量大、費用低、回收率高等優點。因此，高速逆流色譜法已越來越多地被應用于生物、醫藥、環保等領域各種物質的制備分離和純化。但現有方法中，尚未見采用高速逆流色譜法用于野菊花中刺槐素單體分離的有關技術報道。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種分離效率高、回收率高的采用高速逆流色譜法。本專利技術所述，采用野菊花總黃酮水解產物為原料，采用高速逆流色譜儀為分離設備，包括以下步驟:I)制備構成固定相、流動相的溶劑體系，所述溶劑體系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水組成；2)先使高速逆流色譜儀填充固定相，然后調節流動相流速及主機轉速，再泵入流動相并平衡；3)由進樣閥進樣；4)收集目標組分，經減壓蒸干后重結晶，即得刺槐素單體。在步驟I)中，所述溶劑體系按體積比，正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水可為(1.0 1.4): (0.6 1.0):1:1 ;以溶劑體系的上相為固定相，溶劑體系的下相為流動相。在步驟2)中，所述高速逆流色譜儀可選用分析型、半制備型或制備型等不同類型的高速逆流色譜儀；所述主機轉速最好為900rpm ;所述流動相的流速最好為2.99ml/min。在步驟4)中，所述收集目標組分可根據檢測器圖譜或薄層色譜檢測方法或高效液相色譜收集目標組分；經測定所得刺槐素單體純度在99%以上。與現有技術比較， 本專利技術的有益效果如下:分離出的刺槐素通過高效液相色譜儀測定其純度，通過紫外(Ultraviolet，UV)全波普掃描圖譜、核磁共振圖譜(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)、質譜(Mass Spectrum,MS)等方法驗證其結構，結果體現所得產物為純度99%以上的刺槐素單體。本專利技術具有下述突出優點:I)高效、便捷，操作簡單，分離周期短。傳統分離制備方法操作繁瑣，分離一般要I個月甚至更長時間，周期長；高速逆流色譜法只需2天即可從野菊花總黃酮水解產物中分離刺槐素單體，大大縮短了分離周期。2)反應條件容易控制，重復可控性好。傳統的柱層析法常采用梯度洗脫，洗脫液濃度、洗脫速度不易精確控制，重復性差；而本專利技術的參數可控，重復性好。3)制備量大。根據所需的目標樣品量，可選擇不同類型的高速逆流色譜儀進行分離。4)低成本，樣品損耗少，得率高，分離效果好。傳統的柱層析法所用固定相是固體，易出現樣品的吸附、分離純度不高等現象；而高速逆流色譜法所用的固定相是液體，不存在吸附現象，因而分離得率高，分離效果好，經重結晶后純度可達99%以上。5)目標化合物穩定性好。由于分離過程不加入酸堿，而且在常溫下進行，目標化合物不發生變化，最大程度地保持了化合物的穩定性。6)分離得到的刺槐素單體，具有多種藥理活性，如抗炎、抗過氧化、抑菌、促進白血球吞噬、抗腫瘤等作用，具有開發為新藥的潛在應用。本專利技術提供了實現刺槐素單體藥用的產業化制備基礎。由此可見，本專利技術可通過調整溶劑體系，采用高速逆流色譜法一步分離野菊花中刺槐素單體，較傳統分離方法操作簡便，分離周期短，可控性好，制備量大，樣品損耗少，擁有用于自動化制備野菊花中刺槐素單體應用的前景，分離得到的刺槐素單體，具有多種藥理活性，有潛力開發為一種新藥，而本專利技術則成為制備野菊花中刺槐素單體藥用的產業化制備基礎。附圖說明圖1為本專利技術實施例1所得產物的逆流色譜圖。在圖1中，橫坐標為出峰時間(min),縱坐標為響應值(mV);箭頭所指為刺槐素單體。圖2為本專利技術實施例2所得產物的逆流色譜圖。在圖2中，橫坐標為出峰時間(min),縱坐標為響應值(mV);箭頭所指為刺槐素單體。圖3為本專利技術實施例3所得產物的逆流色譜圖。在圖3中，橫坐標為出峰時間(min),縱坐標為響應值(mV);箭頭所指為刺槐素單體。 具體實施例方式以下各實施例均通過現有技術，先從野菊花中制備出野菊花總黃酮水解產物，然后均以野菊花總黃酮水解產物為分離制備刺槐素的原料，均采用高速逆流色譜儀為分離設備。實施例1本實施例的溶劑體系，按體積比，正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水為6: 4: 5: 5。從野菊花中分離制備刺槐素的方法包括以下步驟:a、樣品:取粉碎至粗粉的野菊花lKg，加入3倍量80%的乙醇室溫浸泡3次，每次I周，浸提液經抽濾得清液，清液減壓回收乙醇后，過大孔樹脂(AB-8)，乙醇梯度洗脫，合并含有刺槐素的洗脫液，減壓回收乙醇得水溶液；向水溶液中加入2.5倍量、3mol/L的鹽酸，在100°C溫度條件下，進一步進行酸水解，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
從野菊花中分離制備刺槐素的方法，其特征在于，采用野菊花總黃酮水解產物為原料，采用高速逆流色譜儀為分離設備，包括以下步驟：1）制備構成固定相、流動相的溶劑體系，所述溶劑體系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水組成；2）先使高速逆流色譜儀填充固定相，然后調節流動相流速及主機轉速，再泵入流動相并平衡；3）由進樣閥進樣；4）收集目標組分，經減壓蒸干后重結晶，即得刺槐素單體。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王秀敏，連惠龍，楊欽磊，陳慶，劉澤華，邱彥，
申請(專利權)人：廈門大學，
類型：發明
國別省市：