一種從丹參中快速分離紫草酸單體的方法技術

本發明專利技術公開了一種從丹參中快速分離紫草酸單體的方法，屬中藥分離純化技術領域。該方法按如下工藝步驟進行：A.原料提取：以30-40%的乙醇溶液回流提取3次，每次2小時；B.大孔樹脂富集：提取液以2-5倍柱體積每小時的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附；C.水解：以氫氧化鈉水溶液調pH11-12，放置20-30min水解；D.高效制備液相分離：色譜柱填料為C18，流動相為30-40%的乙腈溶液，檢測波長286nm；E.產品回收：制備液濃縮至小體積水液冷凍干燥，得純度98%以上紫草酸單體。本發明專利技術方法簡易快速，溶劑消耗少，產量大，得率高，經濟環保，適合工業化生產，具有較高的經濟價值和學術價值。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種中藥化學單體的制備方法，尤其是一種從中藥材丹參中快速分離高純度紫草酸單體的方法，屬中藥分離純化

技術介紹
丹參為唇形科(Lamiaceae)鼠尾草屬(Salvia)植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖。性味苦，微寒，歸心、肝經。活血調經，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩,養血安神。用于月經不調，心煩失眠。紫草酸(lithospermic acid),分子式為C27H22O12, 由于其在丹參中的含量很少，因此所需藥材量大，分離時間較長，且很難獲得其高純度單體。如CN200510122346. X公開了一種丹參有效組分，制劑及其制備方法與用途。在有效組分中，以重量百分比計，紫草酸的含量為2. 8-4. 2%，丹酚酸B的含量為91. 8-94. 2%，丹酚酸E的含量為O. 8-2. 2%。該丹參有效組分的制備方法包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進行拌樣， 用正相硅膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續分離得到的樣品，即得。其紫草酸含量較低，增加了制備分離難度，得率低。由此，目前國內關于紫草酸分離純化的文獻報道很少，高效制備液相色譜用于紫草酸單體的分離純化屬首次。
技術實現思路
本專利技術旨在克服現有技術的缺陷，提供一種從丹參中快速分離高純度紫草酸單體的方法。該方法簡便易行、消耗 溶劑少、得率高，產品純度能夠達到98%以上，安全無毒、環保，適合工業化生產。為實現上述專利技術目的，本專利技術采用的技術方案如下一種從紫草酸中快速分離紫草酸單體的方法，其特征在于按如下工藝步驟進行A.原料提取將丹參藥材粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，按照kg/L的質量體積比加入8-10倍量的體積分數為30-40%的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫后的丹酚酸B水溶液以每小時2-5倍柱體積的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附，然后用2-4倍量柱體積的的水洗脫雜質，再用 1-3倍量柱體積的體積分數為50-60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液,濃縮回收乙醇， 濃縮液待下一步水解處理；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度3 5%的氫氧化鈉水溶液調pH至If12，靜置 2(T30min，待丹酚酸B水解成紫草酸,然后再以體積分數5-10%的鹽酸水溶液將水解液pH 調至中性；D.高效制備液相分離先用薄層硅膠過濾水解液，然后用孔徑O. 45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效制備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數30-40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；所述流動相的流速根據色譜柱內徑大小進行確定，內徑50mm的流速為60ml/min，內徑 80mm的流速為140ml/min,內徑IOOmm的流速為250ml/min,內徑200mm的流速為800ml/mirioE.產品回收將步驟D所得制備溶液減壓回收乙腈，剩余水溶液_50°C冷凍成冰， 然后-50°C冷凍干燥得紫草酸單體。步驟B所述大孔吸附樹脂選自DlOl型或AB-8型。本專利技術的優點在于1、通過步驟A對所述丹參藥材的粉碎、回流提取及濃縮，充分保證了藥材中紫草酸和丹酚酸B等水溶性成分的有效提取。2、通過步驟B以大孔吸附樹脂在相應條件下富集丹酚酸B，確保了色素等雜質與丹酚酸B的有效分離，起到了很好的除雜作用。3、通過步驟C在相應控制條件下對丹酚酸B進行水解，從而大幅度提高了紫草酸的含量，并為制備分離創造了有利條件。4、采用制備型高效液相色譜系統對紫草酸單體進行分離，通過最適宜的前處理方法和色譜條件等，達到良好的分離效果，并且紫外檢測器在線監測，針對性收集紫草酸單體，目標明確，避免了常規柱層析和先分離后檢測造成的資源浪費。5、采用制備型高效液相色譜分離過程直觀，目標性強，對產品的質量易于控制，產品純度可達到98%以上。6、步驟少，耗時短，操作簡便，得率高，工藝穩定可靠，重現性好，適合工業化生產。7、溶劑消耗少，制備液相色譜分離步驟中的溶劑都可回收再利用。 8、溶劑毒性小，所用的有機溶劑乙腈、乙醇等，環境污染小。9、由于高效液相色譜對樣品溶液的純度、色澤、酸堿度等要求均較高，通過提取水解等簡單處理得到的提取液不能直接作為樣品溶液進入高效液相色譜系統，因此若在進行高效液相色譜分離前，不按照本專利技術方法步驟進行提取、大孔吸附樹脂富集、水解，則有可能達不到良好的分離效果，還可能對高效液相色譜系統的色譜柱等配件產生難以逆轉的影響，縮短其使用周期；而色譜柱等液相色譜的相關配件成本通常較高，其使用周期的縮短顯然將造成最終產品的生產成本大大提高；因而，對進入高效液相色譜的樣品溶液要求較高， 其前處理過程非常重要。10、由于丹參藥材中除含有丹酚酸外，還含有丹參酮、丹參素等非常復雜的成分， 其中紫草酸單體成分含量較低，大部分以丹酚酸形式存在，要獲得可直接進入高效液相色譜系統的樣品，需要先進行提取、富集及水解處理。針對丹參藥材中存在的各種成分的理化性質，本專利技術方法通過前述步驟A、B、C的順序搭配，以及適當的參數組合，可有效提取出丹酚酸B，并將丹酚酸B水解轉化為紫草酸，同時除去大量雜質，獲得可以進入制備型高效液相色譜系統的樣品溶液，不至對高效液相色譜系統造成很大的影響，盡量延長其使用周期， 節約生產成本。11、在高效液相色譜分離過程中，色譜條件的選擇非常重要，它對樣品溶液中各物質的出峰順序、峰形、分離效果等起著決定性的作用；本專利技術通過大量的試驗研究及對比分析，確定了如上所述的各色譜條件，使樣品溶液中各物質的出峰時間、峰形、分離效果等最佳化，有利于紫草酸單體得到充分有效的分離。附圖說明圖1為本專利技術實施例1步驟C制備分離在線監測圖譜圖2為本專利技術實施例1制得的紫草酸單體的HPLC分析圖譜具體實施方式實施例1一種從丹參中快速分離紫草酸的方法，按如下工藝步驟進行A.原料提取將IOkg丹參粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，加入90L體積分數為30% 的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫后的丹酚酸B水溶液以每小時4倍柱體積的速度通過活化好的DlOl型大孔吸附樹脂柱進行吸附，樹脂床體積約8L，然后用25L的水洗脫雜質，再用20L體積分數為60%的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至8L左右；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度為3%的氫氧化鈉水溶液調pH至12，靜置20min， 待丹酚酸B水解成紫草酸，然后再以體積分數5%的鹽酸水溶液將水解液pH調至中性；D.高效制備液相分離先用薄層硅膠過濾水解液，然后用孔徑O.45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效制備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；E.產品回收步驟D所得制備溶液減壓回收乙腈，剩本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種丹參中快速分離紫草酸單體的方法，其特征在于按如下工藝步驟進行：A.?原料提取：將丹參藥材粉碎成2?4mm粗粉投入提取罐中，按照kg/L的質量體積比加入8?10倍量的體積分數為30?40%的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合并提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.?大孔吸附樹脂富集：將冷卻至室溫后的丹酚酸B水溶液以每小時2?5倍柱體積的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附，然后用2?4倍量柱體積的的水洗脫雜質，再用1?3倍量柱體積的體積分數為50?60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，濃縮液待下一步水解處理；C.?水解：向濃縮液液中緩緩加入濃度3~5%的氫氧化鈉水溶液調pH至11~12，靜置20~30min，待丹酚酸B水解成紫草酸，然后再以體積分數5?10%的鹽酸水溶液將水解液pH調至中性；D.?高效制備液相分離：先用薄層硅膠過濾水解液，然后用孔徑0.45μm的微孔濾膜過濾，上高效制備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數30?40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段制備溶液；E.?產品回收：將步驟D所得制備溶液減壓回收乙腈，剩余水溶液?50℃冷凍成冰，然后?50℃冷凍干燥得紫草酸單體。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：文煥松，夏柯，李啟發，郭建華，劉丁，
申請(專利權)人：成都普思生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：