一種合歡皮有效單體的分離純化制備技術(shù)及定量分析方法技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)以合歡皮為原料，通過(guò)比較WondaSilTM?C18液相色譜柱與InnovationTM?RTP?Amide液相色譜柱分離此組分中合歡皮木脂素苷化合物-(-)-丁香樹(shù)脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的能力，確定了最適分離色譜條件為：InnovationTM?RTP?Amide(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-水，梯度洗脫，流速：1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，進(jìn)樣10μL，溫度：30℃，最終得到了一種適用于分離合歡皮有效組分中木脂素苷化合物的HPLC法，并將此方法應(yīng)用于合歡皮木脂素苷化合物的分離純化、定量分析及相關(guān)產(chǎn)品的制備。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及以合歡皮為原料，通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到了一種適用于分離合歡皮有效單體-(-)-丁香樹(shù)脂酚-4-0-β -D-呋喃芹糖基-(I — 2)-β -D-吡喃葡萄糖苷組分的HPLC色譜技術(shù)方法，并將該方法應(yīng)用于此化合物的分離純化、定量分析及相關(guān)產(chǎn)品的制備。
技術(shù)介紹
合歡皮為豆科植物合歡Albizia julibrissin Durazz.的干燥樹(shù)皮,是中國(guó)藥典一部收錄的一味常用中藥，具有解郁安神、活血消腫的作用，用于心神不安，憂郁失眠，跌撲傷痛.北京中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010 :134.]。前期實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，合歡皮的こ醇提取-正丁醇萃取相具有高效低毒的抑制血管新生的活性，并在進(jìn)一歩的實(shí)驗(yàn)中表明了該組分對(duì)HMEC-I細(xì)胞的IC50為4. 18μ g/mL.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2011，22 (3) :762-764.]。關(guān)于合歡皮物質(zhì)含量的測(cè)定，中國(guó)藥典一部采用的是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18液相色譜柱，以こ腈-O. 04%磷酸溶液(18 82)為流動(dòng)相，以(-)_ 丁香樹(shù)脂酚-4-0-β-D-呋喃芹糖基-(1 — 2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(以下簡(jiǎn)稱(chēng)合歡皮木脂素苷化合物)為對(duì)照品，計(jì)算合歡皮干燥品中此化合物的含量。而本專(zhuān)利采用Innovation RTP Amide液相色譜柱,對(duì)合歡皮木脂素苷化合物進(jìn)行分析與制備，不但解決了極性較大的合歡皮高效低毒組分在普通C18柱上分離困難的問(wèn)題，而且此技術(shù)能夠應(yīng)用于從合歡皮中分離制備木脂素苷類(lèi)化合物以及對(duì)合歡皮中的木脂素苷化合物進(jìn)行定量分析等領(lǐng)域。Innovation RTP Amide是酰胺極性嵌入式鍵合相，鍵合方法是用aminopropyl鍵合相和長(zhǎng)鏈羧酸縮合反應(yīng)形成ー個(gè)酰胺。不同于普通C18鍵合相，這種鍵合相的選擇性獨(dú)特，ー些在C18鍵合相上分離困難的物質(zhì)，可以在極性嵌入式鍵合相上獲得很好的解決。它是在類(lèi)似C18鏈長(zhǎng)度的硅烷試劑中嵌入極性酰胺，使得鍵合相親水，在100%水相條件下穩(wěn)定。因此可以選用此種類(lèi)型的色譜柱，通過(guò)改變分離色譜條件，能夠很好的將中藥天然化合物中親水性物質(zhì)分開(kāi)，從而可以為中藥指紋圖譜的建立以及單體化合物的分離純化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。因此，本技術(shù)研究先比較了 Innovation RTP Amide液相色譜柱(無(wú)錫科奧美萃生物科技有限公司)與WondaSil C18液相色譜柱(戴安中國(guó)有限公司)分離合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相的能力，確定了一種適用于合歡皮木脂素苷化合物的分離純化技木。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的是使用液相色譜分離技術(shù)從合歡皮中分離得到合歡皮木脂素苷化合物，并將此技術(shù)應(yīng)用于合歡皮木脂素苷化合物的定量分析與制備。本專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案所述合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相的制備方法取合歡皮，粉碎，加10倍量75%こ醇溶液，加熱回流，冷卻過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，去離子水復(fù)溶，等體積水飽和正丁醇萃取至正丁醇相無(wú)色，合并正丁醇相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加水復(fù)溶，60°C真空干燥，得合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相樣品。所述供試品溶液的制備方法取上述所得樣品，制備成濃度為lmg/mL的溶液，O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，備用。所述對(duì)照品溶液的制備方法精密稱(chēng)取合歡皮木脂素苷化合物對(duì)照品適量，制備成濃度為lmg/mL的溶液,O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾,備用。所述色譜分離技術(shù)選用WondaSil C18液相柱與Innovation RTP Amide液相柱，以こ臆-水為流動(dòng)相，流速為lmL/min，進(jìn)行梯度洗脫，井比較兩者的分離效果。本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果本專(zhuān)利技術(shù)得到了一種分離合歡皮中木脂素苷化合物的HPLC法，并可將此方法用于 合歡皮中木脂素苷化合物的定量分析、制備以及用來(lái)建立合歡皮藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。附圖說(shuō)明圖I為WondaSil C18液相色譜柱分離合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相的HPLC圖；圖2為Innovation RTP Amide液相色譜柱分析對(duì)照品的HPLC圖；圖3為Innovation RTP Amide液相色譜柱分離合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相的HPLC圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相的制備方法稱(chēng)取IOOg合歡皮于2L圓底燒瓶中，加入75%こ醇IL加熱回流兩次，毎次2 2. 5h，冷卻后合并提取液，過(guò)濾。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，去離子水復(fù)溶至400mL，用等體積水飽和正丁醇萃取至正丁醇相無(wú)色，合并正丁醇相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，再用去離子水復(fù)溶，置60°C真空干燥箱中干燥，得合歡皮こ醇提取-正丁醇相樣品。實(shí)施例2 :供試品溶液的制備取上述制備的干粉IOmg,用去離子水溶解,定容至IOmL,得lmg/mL供試品溶液，0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾,備用。實(shí)施例3 :對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取合歡皮木脂素苷化合物對(duì)照品適量，用去離子水溶解，定容至5mL，0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾,備用。實(shí)施例4 =WondaSiI C18液相色譜柱分離合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相(I)色譜條件WondaSi I C18 (250mmX 4. 6mm, 5 μ m)色譜柱，流動(dòng)相:こ腈-水，流速:lmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，進(jìn)樣10 μ L，溫度:30°C。(2)流動(dòng)相梯度洗脫條件0 5min 100% H2O ；5 35min O 25% CH3CN ；35 50min 25% 40% CH3CN ；50 60min 40 100% CH3CN。WondaSil C18色譜柱分離合歡皮有效組分的能力較差，分離度較差(圖I)。實(shí)施例5 innovation RTP Amide液相色譜柱分析對(duì)照品溶液及合歡皮こ醇提取-正丁醇萃取相(I)色譜條件！Innovation RTP Amide (250mmX 4. 6mm, 5 μ m)色譜柱，流動(dòng)相こ月青-水，流速:lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):210nm,進(jìn)樣10 μ L,溫度:30°C。(2)流動(dòng)相梯度洗脫條件0 5min 100% H2O ；5 35min O 25% CH3CN ；35 50min 25% 40% CH3CN ；50 60min 40 100% CH3CN。分析對(duì)照品譜圖(圖2)，(-)_ 丁香樹(shù)脂酚-4-0-β -D-呋喃芹糖基-(I — 2)-β -D-吡喃葡萄糖苷化合物在此分析條件下的保留時(shí)間為33. 380min。分析供試品譜圖(圖3)發(fā)現(xiàn),Innovation RTP Amide液相色譜柱能夠?qū)⒑蠚g皮有效組分中的主要峰分離開(kāi)，具有較好的分離度，而且此色譜圖中33 34min處只有ー個(gè)分離度為3. 90，保留時(shí)間為33. 140min的單峰，此峰保留時(shí)間與對(duì)照品一致，可以確定此單個(gè)色譜峰即為合歡皮中木脂素苷化合物。因此，此分離方法適用于從合歡皮中分離純化制備得到合歡皮木脂素苷化合物，以及利用此技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)合歡皮中木脂素苷化合物進(jìn)行定量分析檢測(cè)。本專(zhuān)利技術(shù)是結(jié)合最佳實(shí)施例進(jìn)行描述的，然而在閱讀了本專(zhuān)利技術(shù)的上述內(nèi)容后，本領(lǐng) 域技術(shù)人員能領(lǐng)會(huì)在公開(kāi)的實(shí)施例中作許多改變也可獲得相同或類(lèi)似的結(jié)果，而不超出本專(zhuān)利技術(shù)的構(gòu)思、精神和范圍。更具體地說(shuō)，顯然有些化學(xué)和生理性的相關(guān)試劑可替代本文所公開(kāi)的試劑而得到相同或類(lèi)似的結(jié)果。所有類(lèi)似的取代和修飾對(duì)本本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種采用InnovationTM？RTP？Amide液相色譜柱用于合歡皮中有效單體？(？)？丁香樹(shù)脂酚？4？O？β？D？呋喃芹糖基？(1→2)？β？D？吡喃葡萄糖苷化合物的分離技術(shù)方法。

【技術(shù)特征摘要】

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：邱麗穎，蔡維維，施建軍，馮磊，齊保華，毛愛(ài)琴，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：江南大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：