一種具有促進血管生成的王不留行黃酮苷的應用制造技術

一種具有促進血管生成的王不留行黃酮苷的應用，屬于中藥應用技術領域。本發明專利技術首次發現王不留行黃酮苷具有促進血管生成的活性，可用于冠心病、心機梗死后等缺血性心臟病，腦梗塞后、血管閉塞性血栓性脈管炎，心血管接入術，傷口愈合中抑制斑痕形成等血管生成有關的疾病的預防與治療。這種王不留行黃酮苷可應用于藥物制劑、營養品、保健品、化妝品等用途。

【技術實現步驟摘要】
一種具有促進血管生成的王不留行黃酮苷的應用
一種具有促進血管生成的王不留行黃酮苷應用，屬于中藥應用
本專利技術涉及一種具有促進血管生成活性的王不留行黃酮苷，闡明其在醫藥，食品、化妝品方面的新用途。
技術介紹
王不留行為石竹科植物麥藍菜Vaccariasegetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子。王不留行中主要含有三萜皂苷、黃酮苷、環肽、類脂和脂肪酸、單糖等成分[1、李帆，梁敬鈺.王不留行的研究進展[J].海峽藥學，2007，19(3)：1-5]。實驗發現王不留行黃酮苷具有促進血管新生的作用，其結果為下式所示：血管內皮細胞(VascularEndothelialCell)具有多種生理功能，參與機體的凝血、免疫、物質轉運和生物活性物質釋放等生活活動。研究表明[2、ReinhartK，BayerO，BrunkhorstF，etal.Markersofendothelialdamageinorgandysfunctionandsepsis[J].CritCareMed，2002，30(5)：302.]，內皮細胞的損傷及功能紊亂與多種疾病的發生密切相關，包括高血壓、冠心病、糖尿病、慢性腎功能衰竭等。引起內皮細胞損傷是一個復雜的病理過程，參與的因素很多，如糖尿病、高血脂和高血壓等多種疾病，氧化應激以及炎癥反應等等。心血管介入術主要是機械刺激血管內皮，通過刺，戳，擦，擠傷導致損傷，當被導管繼續損傷擴大而伴發急性血栓，導致血管內皮剝脫的嚴重內膜損傷[3、方宏，馮義柏.血管內皮細胞損傷與常見心血管疾病[J].心血管病學進展，2001，22(1)：34-36]。冠心病心肌缺血壞死的發生，與病變血管的閉塞直接相關[遲路湘.肝素與冠心病血管生成治療認識進展[J].微循環學雜志，2002，12(1)：41-42.]。血管內皮細胞的損傷是多種血管性疾病的主要環節，保護血管內皮功能是防治血管性疾病的關鍵環節。因此，研究保護血管內皮功能的藥物成為治療血管性疾病的重要措施。針對內皮細胞損傷的不同環節進行的藥物研究也在進行中，包括抑制黏附分子生成和釋放、拮抗黏附分子作用的藥物、作用于LOX-1受體的藥物等等，都受到了研究人員的重視。在血管生成中，促進側枝循環的建立是改善心肌缺血的另一重要途徑，臨床研究證實，增加側枝血流量又可增加血流剪切力，刺激血管生長，可緩解和治療心絞痛等缺血性心臟病。表皮生長因子(EGF)在促進內皮細胞增殖中表現為可刺激組織修復細胞增殖，趨化炎性細胞，表皮細胞和成纖維細胞向傷口聚集，加劇創面愈合，此生理效應可預防和治療瘢痕修復。經過調研，未見我國學者對王不留行黃酮苷促進血管生成的相關文獻報道(自CNKI、維普中國期刊網)，因此王不留行黃酮苷在促進血管生成的藥理、藥效等研究領域尚處于空白階段。本研究發現王不留行黃酮苷具有促進內皮細胞生成的作用，為保護內皮細胞的相關疾病提供新的治療方法與應用?；酋Ａ_丹明B(SulforhodamineB，SRB)比色法，主要用來檢測細胞增殖情況。SRB是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細胞內組成蛋白質的堿性氨基酸結合；在540nm波長下產生吸收峰，吸光值與細胞量成線性正相關，故可用作細胞數的定量檢測。SRB染色后不會像MTT法那樣很容易變色，細胞固定染色后在96孔板中可以放置較長時間，因而受測定時間的影響較小。用Tris-base溶液溶解的SRB也可穩定較長時間。因此不同時問點固定的96孔細胞培養板可在同一時間測定，測定的吸光值結果不會受到明顯影響。吸光值與SRB濃度作圖時，在OD單位1.5-2.0以下為線性，當超出線形范圍時，最好稀釋后重新讀數。雖然SRB法比其他檢測方法操作步驟繁瑣，但是由于時間可以自己掌握，不受限制，因此適用于高通量篩選。細胞劃痕法是測定細胞的運動特性的方法之一，其借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型，在體外培養的單層細胞上，劃痕致傷，然后加入藥物觀察其抑制腫瘤細胞遷移的能力。基質膠(Matrigel)又名EHS(Engelbreth-Holm-Swarm)提取物、基底膜基質，是從小鼠EHS腫瘤中提取的可溶的、無菌的基底膜蛋白。Matrigel在4℃為液態，37℃凝固為固態，適用于將細胞或其它物質混合于其中進行皮下注射。該填塞實驗廣泛地應用于評估血管生長因子實驗，以及腫瘤細胞誘導血管形成的實驗。由于Matrigel中不包含任何組織成分，避免了組織中可能含有的促進和抑制血管新生物質對實驗因子的影響。
技術實現思路
所述黃酮苷對內皮細胞增殖的影響，將HMEC-1(人臍靜脈內皮細胞)經培養箱培養24h，加入不同濃度的黃酮苷作用48h，經SRB法染色，用酶標儀在波長A540測得OD值。每組設置4個復孔，每批樣品重復3次。所述黃酮苷對細胞遷移的影響，將HMEC-1經培養箱合縱孵育24h，待細胞貼壁后用移液塑料槍頭于每孔中心位置化一條1mm款寬的灼傷帶，并加入含不同黃酮苷濃度的培養基培養。然后在100×顯微鏡下與同一視野進行拍照。所述黃酮苷對小鼠模型中血管生成的影響，將0.5mlMatrigel皮下注射于小鼠腹部右側，按4mg/(kg·d)的劑量灌胃給予黃酮苷，連續14d。實驗分為陰性對照組，實驗組。對照組給以等體積0.9％生理鹽水，觀察方法和時間同實驗組。種植14d后，頸椎脫臼處死小鼠，手術剖開腹部皮膚，取出Matrigel種植體。附圖說明圖1王不留行黃酮苷促進HMEC-1增殖。在王不留行黃酮苷濃度為0.76μg/ml時，HMEC-1細胞進入對數增長期。圖2王不留行黃酮苷對HMEC-1遷移的作用A對照組，0h；B王不留行黃酮苷(5μg/ml)，0h；C對照組，24h；D王不留行黃酮苷(5μg/ml)，24h；E對照，48h；F王不留行黃酮苷(5μg/ml)，48h。圖3王不留行黃酮苷對Matrigel膠血管生成的作用G對照；H黃酮苷，4mg/(kg·d)。具體實施方式實施例1：SRB法測黃酮苷對內皮細胞增殖的影響取對數生長期HMEC-1細胞，按每孔8000-10000個細胞接種于96孔板中，放置于37℃、50ml/LCO2的培養箱中培養24h，加入不同濃度的黃酮苷作用48h，以不加藥組為陰性對照組，每組同時設4個復孔，每批樣品重復3次試驗。加藥后培養至72h測板，用MK3型酶標儀在波長A540處測定每孔A值。計算增殖率(％)(見圖1)。實施例2：細胞劃痕法測黃酮苷對內皮細胞遷移的影響用劃線灼傷法研究細胞遷移，將常規培養的HMEC-消化懸浮，以每孔8×104(5×104)個細胞加到24孔板中，置37℃、50ml/LCO2及飽和濕度的培養箱中孵育24h，待細胞貼壁后用移液塑料槍頭于每孔中心位置劃一條1mm寬的灼傷帶，然后用PBS洗去脫落細胞，并加入含不同藥物濃度的細胞培養基以及對照組。然后在100×顯微鏡下拍照，此刻為0h細胞遷移圖，接著在24h，48h分別于同一視野處拍(所得圖片用IPWin60C軟件圖象軟件進行處理，測量灼傷帶距離，見下表：表1王不留行黃酮苷對HMEC-1遷移距離的作用(μm)與對照組比較，*P＜0.05實驗表明王不留行黃酮苷濃度為5μg/ml，與對照相比，在24h和48h能夠顯著的促進HMEC-1遷移。實施例3：M本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于促進血管生成的王不留行黃酮苷。

【技術特征摘要】
1.王不留行黃酮苷在制備用于促進血管生成的藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的王不留行黃酮苷在制備用于促進血管生成的藥物中的應用，其特征在于：所述王不留行黃酮苷是用于制備防止和/或治療至少一種選自下述之一的疾病或過程的藥物：缺血性心臟病，與血管生成有關疾病或過程。3.根據權利要求...

【專利技術屬性】
技術研發人員：邱麗穎，馮磊，馬麗萍，洪奎，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發明
國別省市：