一種桃葉珊瑚苷的提取方法及桃葉珊瑚苷的應用技術

本發明專利技術涉及的是一種桃葉珊瑚苷的提取方法及桃葉珊瑚苷的應用。該方法的簡單步驟為：車前草粉碎，乙醇浸泡過夜，超聲提取，將提取液合并，回收后濃縮，離心取上清液，大孔吸附樹脂，乙醇溶液洗脫，薄層色譜檢測，收集目標點的餾分并濃縮，濃縮物進行硅膠柱層析，再收集目標點的餾分并濃縮，如此重復硅膠柱層析，得到粗結晶。粗品高效液相色譜法純化，收集目標組分，冷凍干燥，最后得到白色無定形粉末。本方法從車前草中提取的即為桃葉珊瑚苷。桃葉珊瑚苷可以作為治療和預防糖尿病及其并發性腦病的發生等，進一步深入研究糖尿病及其并發癥的發生發展機理，從而開發新一代抗糖尿病及其并發癥藥物。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及的是一種桃葉珊瑚苷的提取方法及桃葉珊瑚苷的應用。
技術介紹
糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一種慢性代謝疾病，臨床上表現為多飲、多食、多尿和體重下降的“三多一少”癥狀。是直接或間接的胰島素分泌或作用不足，及其慢性高血糖與糖類、脂類和蛋白的代謝紊亂性疾病。糖尿病代謝紊亂的直接后果就是產生各種并發癥。糖尿病對人們健康危害極大，可損害全身各系統，如心腦血管、腎、眼、神經系統等。糖尿病神經病變(Diabetic Neuropathy，DN)是糖尿病患者常見的并發癥。有資料表明，DN發病率高達609Γ90%，甚至可累及全部糖尿病患者。胰島素分泌不足導致高血糖，長期慢性高血糖可造成毛細血管基底膜增厚，使管腔狹窄，加上糖尿病患者脂代謝紊亂，造成血液黏稠度升高，血流緩慢，可致腦血流量減少。有研究證實，腦血流量的降低可使大腦對信息的·認識、加工、整合等過程發生障礙，認知反應和處理能力下降，最終導致學習記憶功能受損。高血糖可加速老年性癡呆早期發病,流行病學研究表明老年糖尿病患者出現癡呆的危險性比老年非糖尿病人增加2倍，這些發現提示，糖尿病腦病在許多方面反映了大腦加速老化的過程。糖尿病腦病的主要臨床表現學習能力下降，記憶功能減退，語言、理解、判斷等能力受影響，可伴有神情淡漠，表情呆滯，反應遲鈍，嚴重者生活不能自理。而學習記憶障礙是糖尿病中樞神經系統并發癥的主要表現。其中，I型糖尿病患者主要在聯想記憶和學習技能及注意力方面存在障礙。目前的研究結果表明，糖尿病腦病的發病機制可能與神經遞質改變、大腦缺血、多元醇代謝亢進、氧化應激、非酶性蛋白糖基化、胰島素的副作用以及鈣離子穩態的改變、細胞凋亡等有關。認為氧化應激及非酶性蛋白的糖基化是導致糖尿病并發癥發生的主要因素。目前，治療糖尿病的措施包括飲食治療、體育鍛煉和藥物治療，在此不再贅述。國內外神經科學工作者們一直在不懈努力以探求和尋找安全、可靠、有效的治療藥物。毫無疑問，一種新藥物的發現和應用，都將是對全人類的一種貢獻。天然藥物因其毒副作用小、在腦損傷后已顯示出了顯著的治療作用而受到人們關注。
技術實現思路
本專利技術的目的之一在于提供一種從中藥車前草中提取桃葉珊瑚苷的方法。本專利技術的目的之二在于中藥車前草提取物桃葉珊瑚苷在SD大鼠降糖方面的應用。本專利技術的目的之三在于中藥車前草提取物桃葉珊瑚苷在糖尿病腦病SD大鼠認知方面的應用。桃葉珊瑚苷化學名為β -D-吡喃葡萄糖苷，分子式C15H22O9,相對分子質量346. 33，味苦，溶于水、乙醇、甲醇，不溶于氯仿、乙醚、石油醚。是一種環烯醚萜類化合物。桃葉珊瑚苷主要從杜仲、車前草、地黃等植物中提取出來的，是車前科Plantago植物的代表成分，具有抗氧化、抗光老化和促進膠原合成的功效，是一種潛在的純天然防衰老保護劑。桃葉珊瑚苷還具有抗病毒、抗炎、抗骨質疏松、抗腫瘤、清除自由基、免疫調節作用、抗白血病、抗瘧原蟲、解痙等作用。對細胞的氧化損傷有較好的保護作用，并且能夠調控凋亡蛋白的表達水平。為達到上述目的，本專利技術采用如下技術方案一種從中藥車前草中提取桃葉珊瑚苷的方法，其特征在于該方法的具體步驟為①車前草，粉碎機粉碎，用10倍體積分數為70%的乙醇浸泡過夜，然后超聲提取3次，每次30min，將提取液合并，低溫真空回收乙醇后，置水浴鍋上濃縮，離心后取上清液，注入預處理過的AB-8型大孔吸附樹脂，蒸餾水洗去糖等雜質，用體積分數為10%的乙醇溶液洗脫，250mL為一個餾分收集洗脫液，薄層色譜檢測，Ehrlich試劑為顯色劑，氯仿-甲醇為展開劑，收集合并含目標點的餾分；②上述餾分減壓濃縮，將濃縮物進行硅膠柱層析，氯仿-甲醇為洗脫劑，薄層色譜 檢測，Ehrlich試劑顯色，氯仿-甲醇-水展開，收集合并含目標點的餾分，減壓濃縮，如此重復硅膠柱層析，得到粗結晶。將上述粗品配成200mg/mL的水溶液，采用高效液相色譜法純化，進樣量為80 μ L，收集保留時間為17min的組分，將其減壓濃縮至有少量液體時取出，冷凍干燥，最后得到白色無定形粉末桃葉珊瑚苷。中藥車前草提取物桃葉珊瑚苷在SD大鼠降糖方面的應用。中藥車前草提取物桃葉珊瑚苷在糖尿病腦病大鼠認知方面的應用。附圖說明圖I薄層層析跟蹤掃描目標點的餾分圖2為車前草提取物桃葉珊瑚苷的HPLC檢查結果圖3為車前草提取物桃葉珊瑚苷對糖尿病腦病大鼠海馬神經元細胞形態的影響具體實施例方式實施例一桃葉珊瑚苷的分離純化①車前草5. 0kg，粉碎機粉碎，用10倍體積分數為70%的乙醇浸泡過夜，然后超聲提取3次，每次30min，將提取液合并，低溫真空回收乙醇后，置水浴鍋上濃縮至IOOOmL,離心后取上清液約800mL，注入預處理過的AB28型大孔吸附樹脂，蒸餾水洗去糖等雜質，用體積分數為10%的乙醇溶液洗脫，250mL為一個餾分收集洗脫液，薄層色譜檢測，Ehrlich試劑為顯色劑，氯仿-甲醇為展開劑，收集合并含目標點的餾分；②上述餾分減壓濃縮，將濃縮物進行硅膠柱層析，氯仿-甲醇為洗脫劑，薄層色譜檢測，Ehrlich試劑顯色，氯仿-甲醇-水展開，收集合并含目標點的餾分，減壓濃縮，如此重復硅膠柱層析，得到粗結晶約300mg。將上述粗品配成200mg/mL的水溶液，采用高效液相色譜法純化，進樣量為80 μ L，收集保留時間為17min的組分，將其減壓濃縮至有少量液體時取出，冷凍干燥，最后得到白色無定形粉末125. 8mg。白色無定形粉末產物經分析型高效液相色譜檢測，純度大于99. 5%。參見圖I。實施例二單體的結構鑒定白色無定形粉末，溶于甲醇，乙醇。分子量為346. 33，分子式為C15H22 09。核磁共振波譜數據如下1H-匪R(CD3OD) δ ppm: 5. 16 (1H, dd, J=6. 25Hz, C1-H), 6. 25 (1H, dd, J=6. 1Hz, C3-H)，4 69 (1H, d, J=6. 9Hz, C4-H)，2. 54 (1H, m, C5-H)，4. 88 (1H, d, J=7. 8Hz, C6-H)，5. 48 (1H, br, C7-H)，2.94 (1H, br, C9-H)，4. 34 (1H, d, J=15. 3Hz, C10-H), 4. 61 (1H, d, J=14. 9Hz, C10-H)，4. 64 (1H, d, J=7. 1Hz, C/-H), 3. 65 (1H, dd, J=12. 1Hz, C6，_H), 3. 87 (1H, dd, J=Il. 9Hz, C6，_H) O13C-NMR(CD3OD)δ ppm: 97. 72 (C-I)，141. 69 (C_3)，106. 32 (C_4)，45. 38 (C_5)，82. 83 (C_6)，130. 76 (C_7)，149. 0 (C-8), 48. 14(C-9), 61. 42(C_10), 98. 81(C_1，)，75. 02(C_2，)，77. 90(C_3，)，71. 57(C_4’),76. 32(C-5，)，63.01(C-6，)。終上所述，該化合物為β -D-吡喃葡萄糖苷，即桃葉珊瑚苷。實施例三單體一次給藥對正常SD大鼠血糖的影響取正常大鼠56只，隨機分成本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從中藥車前草中提取桃葉珊瑚苷的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：①？車前草5.0？kg，粉碎機粉碎，用10倍體積分數為70%的乙醇浸泡過夜，超聲提取3次，每次30？min，將提取液合并，低溫真空回收，置水浴鍋上濃縮，離心后取上清液，注入預處理過的大孔吸附樹脂，蒸餾水洗去糖等雜質，用體積分數為10%的乙醇溶液洗脫，250？mL為一個餾分收集洗脫液，薄層色譜檢測，收集合并含目標點的餾分；②餾分減壓濃縮，將濃縮物進行硅膠柱層析，收集合并含目標點的餾分，減壓濃縮，如此重復硅膠柱層析，得到粗結晶；將粗結晶配成200？mg/mL的水溶液，采用高效液相色譜法純化，進樣量為80？μL，收集保留時間為17？min的組分，將其減壓濃縮至有少量液體時取出，冷凍干燥，最后得到白色無定形粉末桃葉珊瑚苷。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：薛宏宇，
類型：發明
國別省市：