本發(fā)明專利技術(shù)涉及從中草藥中制備活性成分的方法，具體涉及一種從甘草中同步分離甘草苷和甘草苷芹糖的方法。以甘草為原料，經(jīng)加熱回流或超聲提取、大孔樹脂串聯(lián)吸附、梯度解吸附、解析液回收有機溶劑后再進行二次吸附、解吸附，最后經(jīng)中壓梯度洗脫系統(tǒng)同時得到純度為90％-98％的甘草苷和甘草苷芹糖。該方法工藝流程短，操作簡單，同時分離出高純度的甘草苷和甘草苷芹糖，不僅成本低廉而且適用于較大規(guī)模的制備。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及從中草藥中制備活性成分的方法，具體涉及一種。
技術(shù)介紹
甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 Glycyrrhizainf lata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖。臨床中的應(yīng)用有甘草和炙甘草，其中甘草具有補脾益氣、清熱解毒、化痰止咳、緩急止痛等作用，常用于治療脾胃虛弱，倦怠乏力，咳嗽痰多等。甘草中主要含有皂苷和黃酮類成分，研究發(fā)現(xiàn)甘草黃酮類成分有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等生理活性。甘草苷是甘草中主要的黃酮類成分，具有 抗病毒，抗氧化，抗心律失常等作用。同時，甘草苷還是食品高甜度的甜味劑和解毒劑，其甜度約為蔗糖的177倍，2010年版《中國藥典》中規(guī)定甘草干燥品含甘草苷不得少于O. 5%，其含量的高低作為評價甘草質(zhì)量的重要指標(biāo)。甘草苷芹糖是甘草中重要的黃酮類成分，據(jù)報道，甘草苷芹糖具有止咳、平喘、祛痰、抗病毒等作用?，F(xiàn)有技術(shù)中分離純化活性成分的方法較多，主要有色譜法，但是不同植物中含有的活性成分種類和結(jié)構(gòu)都存在很大的差異，從而化學(xué)性質(zhì)存在差異，在提取純化過程中套用一般的提取純化方法，得到的活性成分的純度不高，如要達到很高的純度，其分離效率較低，成本較高。目前針對甘草提取純化高純度甘草苷和甘草苷芹糖的報道較少，且甘草中化學(xué)成分復(fù)雜，在提取分離過程中非常困難。公開號為CN101289480專利技術(shù)名稱為一種甘草苷的分離制備方法的專利中通過水提醇沉、膜分離，然后使用大孔樹脂分離甘草苷；公開號為CN102050851A專利技術(shù)名稱為甘草苷及其制備方法的專利，是從甘草酸粉中提取甘草苷，采用稀氨水提取，有機溶劑萃取，然后聚酰胺樹脂分離甘草苷；公開號為CN102391330A專利技術(shù)名稱為從甘草中提取甘草苷的方法的專利，通過水提、過混合樹脂柱分離得到甘草苷，但是這些方法均采用單級分離的方式，并且產(chǎn)量低，不適合大規(guī)模生產(chǎn)；申請?zhí)枮?00710011041. O專利技術(shù)名稱一種甘草苷的制備方法中公開甘草藥材通過水提、醇沉、先后經(jīng)分子量膜分離儀、大孔樹脂柱、高效工業(yè)色譜柱分離，冷凍干燥得甘草苷，該方法雖然一次制備量大，但是該方法仍然采取單級分離的方式，生產(chǎn)效率低，并且僅得到了甘草苷，造成了資源的浪費。總之，現(xiàn)有的方法均有間歇不連續(xù)化操作、上柱液和洗脫液利用率不高等缺點，合理利用樹脂的選擇性吸附分離的優(yōu)勢，優(yōu)化分離工藝，將大大降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率，無毒環(huán)保，為甘草苷和甘草苷芹糖的制備工藝開辟全新的工業(yè)格局。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種。具體操作步驟如下為實現(xiàn)上述目的本專利技術(shù)采用技術(shù)方案為一種，I)提取以甘草為原料，加入到原料8-20倍量(mL/g)的溶劑中，經(jīng)回流或超聲提取，提取液減壓濃縮所得殘液即為中間產(chǎn)物A，其中原料與溶劑按質(zhì)量體積比混合。2)樹脂柱一次分離純化將中間產(chǎn)物A以l-10BV/h的流速通過大孔樹脂柱，動態(tài)吸附至穿透；再用5-15BV的蒸餾水以5-20BV/h的流速淋洗上述大孔吸附樹脂柱洗脫至無色，除去水溶性雜質(zhì)；最后用濃度為40% -70%的乙醇以5-15BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液直至洗脫液無色，而后減壓濃縮所得殘液即為中間產(chǎn)物B ；3)樹脂柱的二次分離純化中間產(chǎn)物B以l-10BV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱， 動態(tài)吸附至穿透；再用5-15BV的蒸餾水以5-20BV/h的流速淋洗上述大孔吸附樹脂柱去除水溶性雜質(zhì)；最后用30% -50%的乙醇以5-20BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液直至洗脫液無色，將收集的洗脫液減壓濃縮至浸膏，即得中間產(chǎn)物C ；4)中壓梯度洗脫系統(tǒng)分離中間產(chǎn)物C以甲醇和水為流動相，用中壓梯度洗脫系統(tǒng)在50-200ml/min的流速下 進一步分離，按出峰時間先后順序分別收集甘草苷芹糖和甘草苷(其中，收集出峰時間為26-28min的色譜峰即為甘草苷芹糖，收集出峰時間為 29-31min的色譜峰即為甘草苷)。所述步驟I)將原料甘草干燥粉碎至30-50目后，加至8-20倍量(mL/g)的溶劑中， 經(jīng)回流或超聲提取2-3次，每次1-3小時，合并提取液，提取液過濾后，減壓濃縮回收溶劑， 殘液中加入水使其濃度為5-20g/L，充分混勻，即得中間產(chǎn)物A ;所述提取溶劑為體積分數(shù)為70% -100%的甲醇或乙醇。所述步驟2)和步驟3)中的大孔吸附樹脂柱為串聯(lián)的大孔吸附樹脂柱；所述各個串聯(lián)的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4-1:10。所述步驟2)和步驟3)中的大孔樹脂為非極性吸附樹脂、弱極性吸附樹脂或中極性吸附樹脂；串聯(lián)的大孔吸附樹脂柱可以是一種樹脂或幾種樹脂的組合；串聯(lián)的大孔吸附樹脂柱至少為3級串聯(lián)。所述步驟2)和步驟3)洗脫處理后的大孔吸附樹脂柱經(jīng)再生液再生后可重復(fù)利用，從而達到連續(xù)操作的目的。所述再生液為無水乙醇。步驟(2)和步驟(3)所述的各級吸附柱包括玻璃柱、耐有機溶劑不銹鋼柱、搪瓷柱坐寸ο所述步驟4)中間產(chǎn)物C以粒徑為15-40 μ m的C18硅膠鍵合固定相為色譜填料， 以甲醇和水為流動相，梯度洗脫，按出峰時間的先后順序分別收集甘草苷芹糖和甘草苷本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點I.本專利技術(shù)提取方法采用多柱串聯(lián)吸附技術(shù)，不僅實現(xiàn)了連續(xù)操作，而且對原料液的處理量大，分離效果好；2.本專利技術(shù)采用多柱串聯(lián)吸附技術(shù)可使得其每級單柱實現(xiàn)穿透吸附后再進行切換， 有效提聞了樹脂的利用率，同時也提聞了樣品的濃度；3.本專利技術(shù)中各級吸附柱洗雜后溶液尾流還可以重復(fù)利用上柱，減少了樣品損失; 同時洗脫劑和再生劑均可回收重復(fù)利用，降低了生產(chǎn)成本；4.本專利技術(shù)選擇多柱串聯(lián)裝置的填料為大孔吸附樹脂，其具有吸附容量大，選擇性好，易于吸附，機械強度高，再生處理簡單，吸附速度快，操作簡單，得率恒定，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適合甘草苷和甘草苷芹糖的分離富集；5.本專利技術(shù)采用中壓梯度洗脫系統(tǒng)，填料為高分離能力的ODS (C18鍵合固定相)分離材料，利用中壓梯度洗脫系統(tǒng)的高分離能力，可以保證產(chǎn)品的純度；6.本專利技術(shù)采用一次制備，操作簡單，控制參數(shù)少，效率高，易于工業(yè)放大，同時得到高純度的極性比較相近的甘草苷和甘草苷芹糖兩種活性成分；7.本專利技術(shù)方法能解決常規(guī)方法中大孔樹脂對甘草苷和甘草苷芹糖的吸附和洗脫過程中對原料液、洗脫液利用率低等缺點，實現(xiàn)甘草苷和甘草苷芹糖的同步高效高純度提取，并適宜工業(yè)生產(chǎn)。同時利用中壓梯度洗脫系統(tǒng)高效快速的制備出高純度甘草苷和甘草苷芹糖。該方法工藝流程短，操作簡單，不僅成本低廉而且適用于較大規(guī)模的制備。附圖說明圖I為本專利技術(shù)實施例提供的甘草苷的高效液相色譜圖2為本專利技術(shù)實施例提供的甘草苷芹糖的高效液相色譜圖。具體實施方式以下實施例是對本專利技術(shù)的進一步說明，但本專利技術(shù)不限于此。本專利技術(shù)以甘草為原料，經(jīng)回流或超聲提取、大孔吸附樹脂串聯(lián)吸附、解吸附，回收溶劑，經(jīng)中壓梯度洗脫系統(tǒng)分別得到高純度的甘草苷和甘草苷芹糖。本專利技術(shù)所述實施例中，甘草苷和甘草苷芹糖的純度采用高效液相色譜法進行檢測，所用色譜柱為Zorbax Extend_C18 (4. 6mm X 250mm, 5 μ m),檢測波長為254nm,流動相A 為O. 1%三氟乙酸水溶液，B為乙腈，流速為lmL/min，進樣量為10 μ L，梯度洗脫程序如表I。 表IHPLC梯度洗脫程序時間/m本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種從甘草中同步分離甘草苷和甘草苷芹糖的方法，其特征在于：1）提取：以甘草為原料,加入到8？20倍量（mL/g）的溶劑中，經(jīng)回流或超聲提取，提取液減壓濃縮所得殘液即為中間產(chǎn)物A；2）樹脂柱一次分離純化：將中間產(chǎn)物A以1？10BV/h的流速通過大孔樹脂柱，動態(tài)吸附至穿透；再用5？15BV的蒸餾水以5？20BV/h的流速淋洗上述大孔吸附樹脂柱洗脫至無色，除去水溶性雜質(zhì)；最后用濃度為40％？70％的乙醇以5？15BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液直至洗脫液無色，而后減壓濃縮所得殘液即為中間產(chǎn)物B；3）樹脂柱的二次分離純化：中間產(chǎn)物B以1？10BV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱，動態(tài)吸附至穿透；再用5？15BV的蒸餾水以5？20BV/h的流速淋洗上述大孔吸附樹脂柱去除水溶性雜質(zhì)；最后用30％？50％的乙醇以5？20BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液直至洗脫液無色，將收集的洗脫液減壓濃縮至浸膏，即得中間產(chǎn)物C；4）中壓梯度洗脫系統(tǒng)分離：中間產(chǎn)物C以甲醇和水為流動相，用中壓梯度洗脫系統(tǒng)在50？200ml/min的流速下進一步分離，按出峰時間先后順序分別收集甘草苷芹糖和甘草苷。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：夏傳海，孔娜娜，方圣濤，劉霞，王建華，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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