氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用，屬于微生物農(nóng)藥領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，以及一種芽孢耐熱性強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌劑，主要是向枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)前的發(fā)酵培養(yǎng)基或者發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后的發(fā)酵液中添加MgCl2，添加比例為每100mL發(fā)酵培養(yǎng)基或發(fā)酵液中添加0.1g～0.3g?MgCl2。本發(fā)明專利技術(shù)添加MgCl2所得的枯草芽孢桿菌菌劑中，其芽孢耐熱能力顯著提高；其次，本發(fā)明專利技術(shù)枯草芽孢桿菌菌劑的貨架期長。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于微生物農(nóng)藥領(lǐng)域，具體涉及氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用；以及利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法；此外還涉及一種芽孢耐熱性強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌劑及其制備方法。
技術(shù)介紹
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)是土壤中一類比較重要的生防微生物群體，能夠防治多種植物病害(何禮遠(yuǎn).生物防治通報，1985，1(3):28-31 ；Yu G Y等，SoilBiology and Biochemistry.2002，34:955-963)。芽孢是芽孢桿菌在發(fā)酵后期產(chǎn)生的一類抗逆性較強(qiáng)的休眠體(沈萍等，微生物學(xué)，高等教育出版社.2006，55-60)，常被作為有效成分制作成微生物農(nóng)藥，但是相對于化學(xué)農(nóng)藥，以芽孢為有效成分的微生物農(nóng)藥貨架期相對較短，而芽孢的耐熱能力是影響其貨架期的主要因素之一。芽孢的耐熱性能除了受相關(guān)基因的控制外，外界環(huán)境中金屬離子、溫度、酸堿度等均能影響芽孢的形 成與性能，其中金屬離子Ca2+、Mn2+、Fe2+對芽孢的耐熱性能有不同程度的提高效果(Granger A C等.Applied and EnvironmentalMicrobiology.2011，77(1):32-40)。因此，提高枯草芽孢桿菌芽孢的耐熱性是延長相應(yīng)的微生物農(nóng)藥貨架期的有效途徑之一。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對枯草芽孢桿菌微生物農(nóng)藥貨架期短的問題，本專利技術(shù)目的在于提供氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用。本專利技術(shù)另一目的在于提供利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法。本專利技術(shù)第三目的在于提供一種芽孢耐熱性強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌劑。本專利技術(shù)第四目的在于提供上述芽孢耐熱性強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法。本專利技術(shù)的目的通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用。本專利技術(shù)利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，包括向枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)前的發(fā)酵培養(yǎng)基或者發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后的發(fā)酵液中添加MgCl2，攪拌均勻。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，按照每IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%，NaN03l% 2%, K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余為水。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，按照每IOOmL發(fā)酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向發(fā)酵液中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵液中枯草芽孢桿菌的總菌數(shù)為1.0X IO9 1.0X IOltl個/mL，其中芽孢約占枯草芽孢桿菌總菌數(shù)的90%。所述的枯草芽孢桿菌是指以芽孢作為微生物農(nóng)藥有效成分的枯草芽孢桿菌；如BAB-K2007年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為:CGMCC N0.2099)ο上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中，其所述的發(fā)酵液按照如下方法制備:(I)菌種活化將低溫保存的枯草芽孢桿菌菌種在LB培養(yǎng)基固體平板上劃線，然后在28V 32°C下培養(yǎng)20 24小時，得活化菌種；(2)種子液制備按照將一接種環(huán)活化菌種接種于IOOmL種子液培養(yǎng)基的比例將活化菌種接種于種子液培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)10 15h，得種子液；(3)發(fā)酵液制備按照體積百分比為3% 5%的比例將步驟(2)所得的種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)40 50h，得發(fā)酵液。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中所述的LB培養(yǎng)基、種子液培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基按照常規(guī)方法制備。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中所述的LB培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.2%，其余為水。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中所述的種子液培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，其余為水。上述利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%，NaN03l% 2%, K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余為水。本專利技術(shù)一種芽孢耐熱性強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌劑，按照如下方法制備:向枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)前的發(fā)酵培養(yǎng)基或者發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后的發(fā)酵液中添加MgCl2，攪拌均勻。上述枯草芽孢桿菌菌劑,按照每IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.1g 0.3gMgCl2的比例向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉 3% 5%，蛋白胨 0.1% 0.2%, NaNO31% 2%, K2HPO40.2% 0.4%,MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余為水。上述枯草芽孢桿菌菌劑，按照每IOOmL發(fā)酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向發(fā)酵液中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵液中枯草芽孢桿菌的總菌數(shù)為1.0X IO9 1.0X 101°個/mL，其中芽孢約占枯草芽孢桿菌總菌數(shù)的90%。所述的枯草芽孢桿菌是指以芽孢作為微生物農(nóng)藥有效成分的枯草芽孢桿菌；如BAB-K2007年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為:CGMCC N0.2099)ο上述枯草芽孢桿菌菌劑中所述的發(fā)酵液，按照如下方法制備:(I)菌種活化 將低溫保存的枯草芽孢桿菌菌種在LB培養(yǎng)基固體平板中劃線，然后在28 32°C下培養(yǎng)20 24小時,得活化菌種；(2)種子液制備按照一接種環(huán)活化菌種接種于IOOmL種子液培養(yǎng)基的比例將活化菌種接種于種子液培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)10 15h，得種子液；(3)發(fā)酵液制備按照體積百分比為3% 5%的比例將步驟(2)所得的種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)40 50h，得發(fā)酵液。所述的枯草芽孢桿菌可以是BAB-1 (2007年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為=CGMCC N0.2099)。上述枯草芽孢桿菌菌劑中所述的LB培養(yǎng)基、種子液培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基按照常規(guī)方法制備。上述枯草芽孢桿菌菌劑中所述的LB培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.2%，其余為水。上述枯草芽孢 桿菌菌劑中所述的種子液培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，其余為水。上述枯草芽孢桿菌菌劑中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用。

【技術(shù)特征摘要】
1.氯化鎂在提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性上的應(yīng)用。2.利用氯化鎂提高枯草芽孢桿菌芽孢耐熱性的方法，其特征在于向枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)前的發(fā)酵培養(yǎng)基或者發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后的發(fā)酵液中添加MgCl2，攪拌均勻。3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于按照每IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%, NaNO31% 2%，K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%,其余為水。4.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于按照每IOOmL發(fā)酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向發(fā)酵液中添加MgCl2 ;其中所述的發(fā)酵液中枯草芽孢桿菌的總菌數(shù)為1.0X109 1.0X 101°個/mL，其中芽孢約占枯草芽孢桿菌總菌數(shù)的90%。5.按照權(quán)利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的發(fā)酵液按照如下方法制備: (1)、將低溫保存的枯草芽孢桿菌菌種在LB培養(yǎng)基固體平板上劃線，然后在28°C 32°C下培養(yǎng)20 24小時，得活化菌種； (2)、按照將一接種環(huán)活化菌種接種于IOOmL種子液培養(yǎng)基的比例將活化菌種接種于種子液培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)10 15h，得種子液； (3)、按照體積百分比為3% 5%的比例將步驟(2)所得的種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min條件下振蕩培養(yǎng)40 50h，得發(fā)酵液。6.按照權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的LB培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.2%，其余為水；所述的種子液培養(yǎng)基的組成成分及質(zhì)量百分比為:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%，其余為水...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：馬平，李社增，鹿秀云，郭慶港，張曉云，
申請(專利權(quán))人：河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：