一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子制造技術

本發明專利技術公開了一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，以質量份數計，包括以下組分：甜菜堿0.1～0.4份、氯化鈉3～5份、甘露糖0.5～3份和碳酸鈣0.1～0.4份。本發明專利技術從培養基的角度，在培養基中添加抗凍因子，以促進凍干保護物質的形成和積累或轉化為其他物質，抑制凍干過程中共晶現象的發生，這類保護性物質的積累，可以改變嗜熱鏈球菌的細胞膜脂肪酸的組成，甚至誘導抗凍蛋白的產生，從而提高菌體在凍干及貯存過程中的抗冷凍能力及菌體存活率。

【技術實現步驟摘要】
一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子
本專利技術屬于嗜熱鏈球菌抗凍
，涉及一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子。
技術介紹
嗜熱鏈球菌通常被用來制作乳酸菌種，它是酸奶生產中制備發酵劑的常用乳酸菌種之一，酸奶的產品質量與發酵劑質量的優劣密切相關。作為一種對人體有明顯食療作用的有益菌，它的開發利用一直得到國內外乳品界的高度重視。目前嗜熱鏈球菌菌粉的制備主要采用真空冷凍干燥技術。真空冷凍干燥是生產商品化乳酸菌發酵劑的一項關鍵技術。但嗜熱鏈球菌如果直接進行冷凍干燥，不可避免地會造成部分細胞的死亡或損傷，對生產十分不利，從而造成發酵劑的活力明顯下降。影響乳酸菌凍干效果的因素有很多，如菌株、細胞大小及形狀、初始菌懸液濃度、培養基組成、培養條件、保護劑、預凍條件、凍干條件等，其中培養基組成是一個關鍵因素。
技術實現思路
本專利技術解決的問題在于提供一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，將該復合抗凍因子添加到培養基中培養嗜熱鏈球菌之后，可提高菌體的抗冷凍能力，可以提高嗜熱鏈球菌的凍干存活率。本專利技術是通過以下技術方案來實現一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，以質量份數計，包括以下組分甜菜堿O. I O. 4份、氯化鈉3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。進一步的，以質量份數計，包括以下組分甜菜堿O. 2 O. 4份、氯化鈉3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。所述嗜熱鏈球菌復合抗凍因子加入到嗜熱鏈球菌培養基之后，各組分的濃度分別為甜菜堿O. I O. 4g/L、氯化鈉3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。一種嗜熱鏈球菌的冷凍保存方法，包括以下步驟I)以質量份數計，按照以下組分配制成復合抗凍因子甜菜堿O. I O. 4份、氯化鈉3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份；2)將復合抗凍因子配制成溶液，微孔濾膜除菌后添加至無菌的M17培養基中， 使得各組份的濃度分別為甜菜堿O. I O. 4g/L、氯化鈉3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和 CaCO3O. I O. 4g/L ；然后接種嗜熱鏈球菌，培養18h后，離心收集菌體；3)用生理鹽水清洗菌體，離心，再無菌生理鹽水重懸菌體配制成菌懸液，將菌懸液與保護劑按照I :0. 8 I. 2的體積比均勻混合，靜置20 30min后裝于凍干管中， 在-35 _40°C下預凍至少12h后，于溫度為-50 _56°C、真空度為4 6Pa的條件下凍干 24h;4)最后，用生理鹽水將嗜熱鏈球菌復溶。所述的保護劑以水為溶劑，包括脫脂奶粉150 180g/L、海藻糖10 20g/L、甘油 O. 2 I. Og/L和抗壞血酸O. 2 I. Og/Lo與現有技術相比，本專利技術具有以下有益的技術效果本專利技術提供的嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，從培養基的角度，在培養基中添加抗凍因子，以促進凍干保護物質的形成和積累或轉化為其他物質，抑制凍干過程中共晶現象的發生，這類保護性物質的積累，可以改變嗜熱鏈球菌的細胞膜脂肪酸的組成，甚至誘導抗凍蛋白的產生，從而提高菌體在凍干及貯存過程中的抗冷凍能力及菌體存活率。在培養基中添加本專利技術的復合抗凍因子后，可以使嗜熱鏈球菌的凍干存活率最高達73. 5%，而如果沒有添加該復合抗冷凍因子，則菌體在冷凍干燥過程中的存活率最高僅 49.5%。與不添加復合抗凍因子相比，存活率提高了 1.4倍多，具有顯著的效果。具體實施方式本專利技術提供一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，將該復合抗凍因子添加到培養基中培養嗜熱鏈球菌之后，可提高菌體的抗冷凍能力，可以提高嗜熱鏈球菌的凍干存活率。下面結合具體的實施例對本專利技術做進一步的詳細說明，所述是對本專利技術的解釋而不是限定。一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，以質量份數計，包括以下組分甜菜堿O. I O. 4份、氯化鈉3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。進一步，以質量份數計，包括以下組分甜菜堿O. 2 O. 4份、氯化鈉3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。嗜熱鏈球菌復合抗凍因子加入到嗜熱鏈球菌培養基之后，各組分的濃度分別為 甜菜堿O. I O. 4g/L、氯化鈉3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。實施例I :按質量配比將復合抗凍因子配制成溶液，將微孔濾膜除菌的復合抗冷凍因子添加至無菌的M17培養基中，然后接種嗜熱鏈球菌，培養18h，然后以轉速為5000r/min離心 IOmin,收集菌體；用生理鹽水清洗菌體2次，離心棄去上清液；用無菌生理鹽水將菌體配制成 6±0. 5X101(lCfu/mL菌懸液后，按照體積比為I : I將菌懸液與保護劑(脫脂奶粉150g/L+海藻糖10g/L+甘油+抗壞血酸O. 2g/L)均勻混合，然后，靜置20-30min后裝于凍干管中，裝樣高度 O. 3-0. 5cm ；接著放入-35 _40°C的冰箱中預凍24h后，移轉入真空冷凍干燥機中，于溫度為_56°C，真空度為4-6Pa的條件下凍干24h ;最后，用生理鹽水復溶，M17固體培養基計數， 測定菌粉活性和菌體存活率。添加不同配比的復合抗凍因子，發酵得到的菌體進行凍干活菌率的驗證結果如表 I所示表I添加不同配比的復合抗冷凍因子及對應的存活率本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，其特征在于，以質量份數計，包括以下組分：甜菜堿0.1～0.4份、氯化鈉3～5份、甘露糖0.5～3份和碳酸鈣0.1～0.4份。

【技術特征摘要】
1.一種嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，其特征在于，以質量份數計，包括以下組分 甜菜堿0. I 0. 4份、氯化鈉3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0. I 0. 4份。2.如權利要求I所述的嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，其特征在于，以質量份數計，包括以下組分 甜菜堿0. 2 0. 4份、氯化鈉3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸鈣0. 3 0. 35份。3.如權利要求I所述的嗜熱鏈球菌復合抗凍因子，其特征在于，嗜熱鏈球菌復合抗凍因子加入到嗜熱鏈球菌培養基之后，各組分的濃度分別為甜菜堿0. I 0. 4g/L、氯化鈉3 5g/L、甘露糖 0. 5 3g/L 和 CaCO3O. I 0. 4g/L。4.一種嗜熱鏈球菌的冷凍保存方法，其特征在于，包括以下步驟 1)以質量份數計，按照以下組分配制成復合抗凍因子 甜菜堿0. I 0. 4份、氯化鈉3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳合，李串娜，舒國偉，王勇，
申請(專利權)人：陜西科技大學，
類型：發明
國別省市：