新型免疫佐劑化合物及其用途制造技術

本發明專利技術涉及用作免疫佐劑的環β葡聚糖化合物和包含它的疫苗組合物。這些新型佐劑化合物特別代表了一類新的樹突狀細胞活化分子。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用作免疫佐劑的環β葡聚糖化合物和包含其的疫苗組合物。
技術介紹
在全球公共衛生中，安全和有效的疫苗的研發仍然是一個主要的目標。現今的大部分疫苗由兩種主要成分組成:(i)治療目標的靶抗原和(ii)針對所述抗原刺激和/或誘導免疫原性的免疫佐劑。已知免疫佐劑的性質變化很大，但特別包括礦物油、細菌提取物、活的和減毒的生物體和氫氧化鋁金屬的懸浮液。即使免疫佐劑提供了增強的免疫應答，它們的使用也可引起不良副作用，尤其與它們的給藥途徑有關。因此，經批準并在人類中有效的免疫佐劑的數量仍然相對有限。因此需要可用作免疫佐劑而不引發不良副作用(例如內毒素性副作用)的新型化合物。針對細菌感染的免疫應答依賴于先天和適應性免疫系統的聯合作用。樹突狀細胞(DC)是最有效的專職抗原呈遞細胞APC，其在免疫應答的引發和調節中起重要作用。DC是檢測、捕獲、和處理抗原(例如入侵細菌和病毒)的關鍵識別物，并具有從外周組織向二級淋巴器官遷移以引起原發T細胞應答的能力。暴露于微生物刺激之后，DC經歷成熟過程，特征為MHC-肽復合物的形成增加、共刺激分子(CD86、CD40和CD80)的上調和細胞因子的生成。此外，DC成熟過程的其它特點為促進向區域淋巴結(CCR7)移動的趨化因子受體的誘導和活化T細胞的能力增加。DC通過高度保守受體模式-識別受體(PRR)識別微生物刺激,也稱為病原體相關的分子模式(PAMP)。最有名和有特點的PRR類別為Toll樣受體(TLR)和C型凝集素受體(CLR)。例如，脂蛋白和肽聚糖通過TLR2來識別、dsRNA通過TLR3來識別、LPS通過TLR4來識別、CpG通過TLR9來識別、鞭毛蛋白通過TLR5來識別、ssRNA通過TLR7/8來識別、CpG通過TLR9來識別、含甘露糖的分子通過DC-SIGN來識別以及線性β -葡聚糖通過Dectin-1來識別。當引發這些受體時，下游信號級聯被激活，用于誘導炎癥反應。TLR接合之后激活的信號通路可變化，取決于是否募集MyD88。TLR3和TLR4所獨有的MyD88非依賴性通路導致干擾素調節因子3的表達，而MyD88依賴性信號通路(存在于除TLR3之外的全部TLR上)集中在MAPK和NF- K B誘導上以良好地發揮它們的生物學效應。滲透調節的周質葡聚糖(OPG)是革蘭氏陰性細菌包膜周質空間的常規成分(22)。它們已經在全部的待測變形菌中發現。不同種類的OPG具有非常不同的結構，但它們共有幾個共同的特點:(i)它們是由有限數量的單元(5-24個)構成的低聚糖；(ii)D-葡萄糖是唯一的構成糖；(iii)葡萄糖單元通過 β_糖苷鍵至少部分地連接；(iv)周質中葡聚糖的濃度響應環境滲透壓的減少而增加。OPG似乎具有關鍵的生物學功能，因為OPG合成缺失的突變體呈現高度多效表型(例如趨化性、運動性、減少的外膜穩定性和胞外多糖的合成以及在低滲介質中的缺陷生長)(22)。此外，它們不能與真核宿主建立成功的致病或共生關系⑴。布魯氏菌(Brucella)是被視作哺乳動物(包括人類)的兼性細胞內病原體的α-變形菌。所造成的人畜共患病(稱為普魯氏菌病)的發病機理主要與專職和非專職的吞噬宿主細胞中布魯氏菌生存和細胞內復制的能力有關。在布魯氏菌屬中環β葡聚糖(C^G)由聚合度為17-25的環骨架組成，其中全部的葡萄糖單元通過β-1，2鍵連接(布魯氏菌Ci3G) (2)。已經描述了環葡聚糖的存在對于完全流產布魯氏菌(B.abortus)毒性是必需的(I)。此外,Arel Iano-Reynoso等(3)測定了調節脂質微區組織的布魯氏菌C β G對于防止溶酶體融合和允許布魯氏菌到達其復制小生境是必須的。Ci3G大量表達，代表1-5%的細菌干重(ref)。因此，考慮到如果單個細菌的內容物釋放在含布魯氏菌的液泡(其體積為約10毫微微升)中，液泡中Ci3G的濃度將為mM范圍。這意味著當數千個細菌由凋亡的細胞死亡釋放時，外部介質中釋放的C β G可被估算為在μ M范圍內并且這可能在免疫系統上具有某些重要的結果。葡聚糖且特別是線性β葡聚糖作為宿主-病原體相互作用中涉及的重要PAMP的作用(4、5)已被廣泛地描述。有趣的是，已經認可線性(1—3) β-葡聚糖的免疫調節性能，因為它們已經顯示出 具有抗腫瘤(6)和針對細菌(7)、病毒(8)、真菌(9)、和原生動物感染的抗感染性能。然而，時至今日，未有報道環形β_葡聚糖作為免疫系統調節劑的性能。專利技術概述專利技術人現證明了布魯氏菌環β葡聚糖(Ci3G)具有如本文實施例中所闡明的免疫佐劑活性。根據本專利技術還表明，這些新型佐劑化合物特別代表了一類新的樹突狀細胞活化分子。專利技術人首次證明了布魯氏菌Ci3G是TLR4激動劑和小鼠和人DC的有效活化劑，因為其能夠誘導樹突狀細胞成熟、促炎細胞因子分泌以及CD4和CD8T細胞的活化和增殖。因此，本專利技術所述新型環β葡聚糖化合物特別用作免疫佐劑，以誘導和/或增強免疫應答。因此，本專利技術涉及一種包含至少一種環β葡聚糖化合物的免疫佐劑化合物。本專利技術也涉及一種包含如上所定義的免疫佐劑化合物、一種或多種抗原、以及任選的一種或多種藥學可接受的賦形劑的疫苗組合物。本專利技術也涉及如上所定義的免疫佐劑化合物用作藥劑(特別用于誘導和/或增強佐劑活性)。本專利技術也涉及根據本專利技術的免疫佐劑化合物在制備特別用于誘導和/或用于增強針對一種或多種抗原的免疫應答的疫苗組合物中的用途。本專利技術也涉及一種試劑盒，包含:-根據本專利技術的免疫佐劑化合物，-至少一種抗原；作為用于同時、分別或相繼使用的聯合制劑，從而誘導針對例如病原體的保護性免疫應答、或有效地保護受試者或動物免受感染。本專利技術進一步的目的涉及環β葡聚糖化合物用于誘導需要其的受試者中樹突狀細胞(DC)的成熟的治療方法。本專利技術另一個進一步的目的涉及環β葡聚糖化合物用作免疫佐劑，其中所述化合物用于誘導需要其的受試者中樹突狀細胞(DC)的成熟。專利技術詳述專利技術人已經研究了布魯氏菌環β葡聚糖(Ci3G)和其它環葡聚糖在DC成熟，在細胞因子的產生、MHC-1I和共刺激分子的表面表達、基因表達、在人類和小鼠DC上的毒性和抗體應答方面的效果。他們已經證明了布魯氏菌Ci3G是小鼠和人DC的有效活化劑。此夕卜，具有不同結構的環葡聚糖不誘導相同的活化反應，顯示了具有不同結構的Ci3 G可具有不同的活化性能。專利技術人也已經證明了 Ci3G代表了一類新型TLR4激動劑。確實證明了所述環β葡聚糖具有TLR4-介導的佐劑性能，具有體內促炎效果，但在全身性注射之后不顯示任何顯著的全身性內毒素性副作用。本文實施例中所包含的結果顯示了所述環β葡聚糖不顯示顯著的內在抗原作用，即目標分子防止或削弱了引發環β葡聚糖抗體顯著地進入血清的效力。因此，專利技術人證明了 Ci3 G可代表下一類免疫佐劑。因此，本專利技術的第一方面涉及一種包含至少一種環β葡聚糖(Ci3G)化合物的免疫佐劑化合物。本專利技術也涉及一種用作免疫佐劑的環β葡聚糖化合物。如本文所用，術語“免疫佐劑”是指當施用于受試者或動物時可誘導和/或增強針對抗原的免疫應答的化合物。其也意指通常作為促進、延長、或增強針對特定抗原的特定免疫應答的質量的物質。在本專利技術的上下文中，術語“免疫佐劑”是指通過影響先天免疫應答的瞬態反本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.06.04 EP 10305596.81.一種免疫佐劑化合物，包含至少一種環β葡聚糖(Ci3G)化合物。2.根據權利要求1任一項的免疫佐劑化合物，其中至少一種Cβ G可被至少一種天然取代基殘基取代。3.根據權利要求1-2任一項的免疫佐劑化合物，其中所述至少一種天然取代基殘基為琥珀酰殘基。4.根據權利要求1-3任一項的免疫佐劑化合物，其中天然取代基殘基的數目為0-25個，優選0-3個。5.根據權利要求1-4任一項的免疫佐...

【專利技術屬性】
技術研發人員：JP·戈韋爾，A·克勒謝弗斯凱，A·馬蒂羅斯彥，J·班徹雷奧，S·奧，
申請(專利權)人：國家醫療保健研究所，國家科學研究中心，埃克斯馬賽大學，
類型：
國別省市：