普洱茶免疫佐劑及其在流感疫苗中的應用制造技術

本發明專利技術提供一種普洱茶免疫佐劑，其特征在于由下列質量比的組分組成：普洱茶提取物0.05～100%，載體0～99.95%。本發明專利技術用普洱茶提取物作為流感疫苗佐劑，具有良好的有效性，能提高抗原的免疫原性，增強免疫效果，解決了目前免疫佐劑單一，副作用難以避免，疫苗生產供應量有限，難以滿足疫情爆發時急需提供大量疫苗的要求，以及疫苗起效時間慢等諸多問題，而且疫苗質量容易控制。普洱茶提取物制備方法簡便，其材料來源廣泛，較為經濟、環保。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種普洱茶免疫佐劑，尤其涉及普洱茶提取物在制備免疫佐劑，特別是流感疫苗免疫佐劑中的應用，屬于生物

技術介紹
普洱茶原產于我國云南思茅及西雙版納一帶，是一種歷史名茶，其以云南大葉種茶樹的鮮葉為原料進行加工，按發酵方法不同分為生茶和熟茶，即將云南大葉種茶樹的鮮茶葉采摘后，經曬青得到毛茶，再經緩慢的自然發酵而成的生茶，或者經人工促成發酵的熟茶。普洱茶有散茶以及壓制的成型茶，并具有下列獨特的品質特點:熟茶色澤為褐紅，湯色褐紅、清亮,并有獨特的陳香氣味,葉底為褐紅色；生茶為灰白色,茶湯帶褐色,并有清香氣味，醇厚回甜，普洱茶迄今已有1700多年的歷史。對于普洱茶的功效，歷史上也多有記載，如公元1765年，趙學敏《本草綱目拾遺》中說:普洱茶膏，黑如漆，醒酒第一，消食化痰，清胃生津，功力尤大也；《木部》中記載:普洱茶膏能治百病，如肚脹、受寒，用姜湯發散，出汗即可愈，口破喉燥，受熱疼痛，用五分噙口過夜即愈。公元1768年，清王昶撰《滇行目錄》中有“普洱茶味沉刻，可療疾”的說法。公元1897年，陳宗海撰《思茅廳采訪》記載:普洱茶能幫助消化，驅散寒冷，有解毒作用。長期的飲用實踐證明，普洱茶具有消食解毒，理氣去脹，清熱化痰，驅風醒酒，治痢抑菌等功效。現代醫學研究證實:普洱茶確有降血脂、降血糖、降血壓、健齒護牙、提高機體免疫力、抗癌及防治心血管疾病的功效。此外，普洱茶減肥瘦身的功效也引起了人們的廣泛關注。張冬英等利用高通量篩選法研究發現:普洱茶乙醇提取物有潛在的降血脂、降血糖的可能性。近年來的研究表明，普洱茶提取物表現了很強的生物活性，普洱茶水提物表現出了明顯的抗氧化活性，能有效抑制脂質體和非脂質體的氧化損傷。普洱茶提取物還表現出良好的抗基因毒性、抗病毒以及抗菌活性。流感是由流感病毒引起的一種可造成大規模流行的急性呼吸道傳染病，它的特點是短期內爆發，然后迅速蔓延，造成不同程度的流行，包括世界大流行、局部暴發流行及散發，發病率高并伴有一定的死亡率，一 旦流感疫情爆發，將會對人類的生命健康帶來巨大的威脅。預防流感疫情爆發的最主要也是最有效的手段就是接種流感疫苗。目前被批準的流感疫苗主要有兩大類:滅活流感疫苗和減毒流感活疫苗，滅活流感疫苗又分為:全病毒滅活疫苗、滅活病毒裂解產物疫苗和亞單位疫苗，目前被廣泛使用的是三價的無佐劑滅活裂解疫苗。由于流感病毒變異很快，通常每年的流行類型都有所不同，生產企業一般都在世界衛生組織(WHO)指導下選擇流感病毒毒株進行疫苗生產，每年接種最新的流感疫苗才能達到預防的效果。一旦流感病毒變異造成大規模流行或者是世界性流行，疫苗需求量必將猛增，但目前由于受流感疫苗生產工藝的限制，短時間內難于提供大規模流行所需的足量疫苗，因此，應用免疫佐劑，減少疫苗用量并提高免疫效果，是應對大規模流行期間疫苗量不足的途徑之一。佐劑是一種加入疫苗后能顯著增強抗原的免疫原性，而本身無免疫原性的物質，將其應用于流感疫苗，能顯著增強疫苗的免疫效果，減少抗原的用量，從而有利于流感疫苗的生產效率的提高與生產成本的降低，更好的保護易感人群，以應對突然爆發的流感疫情，佐劑在新型流感疫苗的研究與開發中具有極為重要的作用。目前被批準應用于流感疫苗的佐劑主要有鋁佐劑和MF59等。但事實上鋁佐劑對蛋白亞單位疫苗誘導抗體產生的能力較弱，不能有效地誘導免疫應答，其不能誘導產生Thl型反應，干擾細胞免疫，并阻斷CD8+CTL的激活，使得疫苗的免疫保護作用不全面，不持久，在某些情況下還會產生與過敏反應有關的IgE，使機體產生不良反應。MF59雖然是一種較為有效地流感疫苗佐劑，但是其在增加免疫原性的同時也增加了反應原性，在成年人中出現了局部疼痛、發熱、紅斑、硬結、肌痛等癥狀的增加。另外，一些新型佐劑正處于研發中，像多聚脫氧核苷酸類、抗菌肽類、細胞因子類、多糖類佐劑，但進展都比較緩慢。隨著禽流感疫情在世界各地的爆發，并產生了較高的死亡率，研究出一種新型的疫苗佐劑，從而有效的提高疫苗的安全性和免疫原性，提高疫苗的生產效率，已成為更好的保護人類生命健康的一種需要。經系統查閱文獻和專利，目前未發現關于普洱茶提取物應用于免疫佐劑研究的報道。
技術實現思路
為解決目前免疫佐劑單一，副作用難以避免，疫苗生產供應量有限，難以滿足疫情爆發時急需提供大量疫苗的要求，以及疫苗起效時間慢等諸多問題，本專利技術旨在提供一種能有效提高疫苗免疫效果，降低疫苗抗原用量的普洱茶免疫佐劑。本專利技術的另一個目的在于提供普洱茶提取物在制備免疫佐劑中的應用。本專利技術的又一個目的在于提供一種普洱茶免疫佐劑在制備流感疫苗中的應用。 本專利技術提供的一種普洱茶免疫佐劑由下列質量比的組分組成: 普洱茶提取物0.05 100% 載體O 99.95%。所述載體由下列質量比的組分組成: 乳化劑I 50% 助乳化劑I 50%油相I 50% 水相10 97%。所述乳化劑為常規的Tween20或聚氧乙烯蓖麻油中的一種，或者為質量混合比為3: 2 2: 3的常規Tween20與Span80的混合物，或者為質量混合比為3: 2 2: 3的常規聚氧乙烯蓖麻油與Span80的混合物。所述助乳化劑為常規的1，2_丙二醇或聚乙二醇400或無水乙醇中的一種。所述油相為常規的液體石蠟或白油或注射用大豆油中的一種。所述水相為注射用水或者含有藥物或疫苗成分的注射用水溶液。本專利技術提供的普洱茶免疫佐劑，優選下列質量比: 普洱茶提取物0.1 100%載體O 99.9%。本專利技術所述的普洱茶免疫佐劑在制備流感疫苗中的應用，其特征在于:普洱茶免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質量比為300:1 150000:1，其中，所述普洱茶免疫佐劑由下列質量比的組分組成: 普洱茶提取物0.05 100% 載體O 99.95%。 所述普洱茶提取物為市購產品。所述普洱茶提取物為普洱茶乙醇提取物，或者為普洱茶水提取物，分別經以下方法提取: 普洱茶乙醇提取物的制備:取粉碎的普洱茶粉，置于容器內，用乙醇冷浸或溫浸提取，或者加熱回流提取，過濾，取濾液，對濾液進行減壓回收乙醇，余下濾液經濃縮干燥，得浸膏；其中，每次提取時，乙醇的質量濃度為75 99.7%，乙醇加入量是普洱茶粉質量的5 50倍，冷浸是在室溫下浸泡I 10天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡I 2小時，提取次數為I 3次；加熱回流提取是在30 75°C溫度下，回流提取I 3次，每次30 150分鐘。普洱茶水提取物的制備:取粉碎的普洱茶粉，置于容器內，用蒸餾水冷浸或溫浸提取，或用加熱煎煮的方法提取，過濾，取濾液，進行常規濃縮干燥，得浸膏。其中，每次提取時，蒸餾水的加入量是普洱茶粉質量的5 100倍，冷浸是在室溫下浸泡I 10天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡I 2小時，提取次數為I 3次；加熱煎煮是按常規方法進行，提取次數I 3次，每次煎煮60 300分鐘。本專利技術提供 的普洱茶佐劑與傳統的氫氧化鋁佐劑相比，具有以下一些優點: I)普洱茶是一種日常飲用品，在以往的研究中展現出了多種保健功效，將其作為流感疫苗佐劑應用，安全性高、副作用低。在研究中發現，用含普洱茶提取物的流感疫苗注射小鼠，小鼠未見全身不良反應，活動及飲水進食未見明顯影響，而用含氫氧化鋁佐劑的流感疫苗注射小鼠，則偶見注射局部出現紅斑本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種普洱茶免疫佐劑，其特征在于由下列質量比的組分組成：??????????????普洱茶提取物??????????0.05～100%載體??????????????????0～99.95%。

【技術特征摘要】
1.種普洱茶免疫佐劑，其特征在于由下列質量比的組分組成: 普洱茶提取物0.05 100% 載體O 99.95%。2.權利要求1所述的普洱茶免疫佐劑，其特征在于所述載體由下列質量比的組分組成: 乳化劑I 50% 助乳化劑I 50%油相I 50% 水相10 97%。3.權利要求2所述的普洱茶免疫佐劑，其特征在于所述乳化劑為常規的TWeen20或聚氧乙烯蓖麻油中的一種，或者為質量混合比為3: 2 2: 3的常規Tween20與Span80的混合物，或者為質量混合比為3: 2 2: 3的常規聚氧乙烯蓖麻油與Span80的混合物。4.權利要求1所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李映波，劉洪卿，孫笠雯，趙蘭華，楊磊，
申請(專利權)人：中國醫學科學院醫學生物學研究所，
類型：發明
國別省市：