一種可用作免疫佐劑的改良型鞭毛蛋白及其制備與應用制造技術

本發明專利技術提供了一種可用作免疫佐劑的改良型鞭毛蛋白及其制備與應用。本發明專利技術的鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，具有鞭毛蛋白的生物活性，與野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突變。本發明專利技術的鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體可使TLR5介導的天然免疫應答減弱，且具有顯著的佐劑活性。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物
，具體涉及一種可用作免疫佐劑的改良型鞭毛蛋白及其制備與應用。
技術介紹
鞭毛蛋白含有494個氨基酸，具有4個球形結構域(DO，Dl, D2和D3)，其中DO和Dl結構域高度保守。來自各類細菌的鞭毛蛋白的氨基酸序列可在NCBI GenBank數據庫中獲得。其中，已知來自鼠傷寒沙門菌I (S. Typhimurium I)、幽門螺桿菌(H. Pylori)、霍亂弧菌(V. Cholera)、粘質沙雷氏菌(S. marcesens)、福氏痢疾桿菌(S. flexneri)、梅毒螺旋體(T. Pallidum)、嗜肺軍團菌(L. pneumophila)、伯氏疏螺旋體(B. burgdorferei)、艱難梭狀芽孢桿菌(C. difficile)、苜猜根瘤菌(R. meliloti)、根癌農桿菌(A. tumefaciens)、羽扇豆根瘤菌(R.1upini)、卡氏巴爾通體(B. clarridgeiae)、奇異變形桿菌(P. Mirabilis)、枯草桿菌(B. subtilus)、單核細胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)、銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)和大腸桿菌(E. coli)的鞭毛蛋白序列。鞭毛蛋白具有佐劑效應，但 其產生佐劑效應的機制還不清楚。研究表明，鞭毛蛋白通過與宿主細胞的TLR5受體結合，刺激細胞產生大量的促炎性細胞因子從而激發佐劑效應。然而最近的研究發現，鞭毛蛋白與卵清白蛋白(OVA)混合免疫TLRSm小鼠后，其誘導OVA蛋白體液免疫應答的佐劑能力沒有發生變化，從而推斷TLR5介導的天然應答不是鞭毛蛋白產生佐劑效應的必需條件。另外，鞭毛蛋白作用于TLR5受體后，激發產生的強烈天然免疫應答會導致系統性不良反應，如膿毒癥等。鞭毛蛋白對機體的副作用制約了其作為佐劑的應用前景。因此，亟需研究開發出一種改良型鞭毛蛋白，該蛋白既能保留野生型鞭毛蛋白免疫佐劑的特點，同時又能降低其激發的天然免疫應答，減輕其對機體的副作用，這對于新型疫苗研發具有現實意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種改良型鞭毛蛋白及其制備與應用，該蛋白既能保留野生型鞭毛蛋白免疫佐劑的特點，同時又能降低其激發的天然免疫應答，減輕其對機體的副作用，使鞭毛蛋白作為佐劑具有高度的安全性。本專利技術一方面提供了一種鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，具有鞭毛蛋白的生物活性，與野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白相比，含有141IA突變(鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白f IiC基因第411位上的異亮氨酸(1411)定點突變成丙氨酸(A))。進一步的，所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體具有免疫佐劑活性。相比野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白，對Toll樣受體5 (Toll-like5, TLR5)的刺激活性減弱。進一步的，本專利技術所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體的氨基酸序列為SEQ ID NO:本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，具有鞭毛蛋白的生物活性，與野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突變。

【技術特征摘要】
1.一種鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，具有鞭毛蛋白的生物活性，與野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白相比，含有I411A突變。2.如權利要求1所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，其特征在于，相比野生型鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白，所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體對Toll樣受體5的刺激活性減弱。3.如權利要求1所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體，其特征在于，所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體的氨基酸序列為SEQ ID NO:5。4.一種多核苷酸，其編碼權利要求1-3任一權利要求所述鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白突變體。5.如權利要求4所述多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸序列為SEQID N0:6。6.—種表達載體,其含有權利要求4或5所述多核苷酸。7.—種宿主細胞，其被權利要求6所述表達載體所轉化。8.如權利要求7所述宿主細胞，其特征在于，...

【專利技術屬性】
技術研發人員：焦新安，潘志明，張磊，孫林，楊蕓，康喜龍，王靜，
申請(專利權)人：揚州大學，
類型：發明
國別省市：