輔助上皮性卵巢癌早期診斷的HOST2試劑盒及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)提供的一種輔助上皮性卵巢癌（EOC）早期診斷的HOST2檢測(cè)試劑盒，是由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、引物系統(tǒng)和擴(kuò)增系統(tǒng)組成，其中的HOST2特異性的qRT-PCR的上游引物如SEQ?ID?NO:2所示，下游引物如SEQ?ID?NO:3所示。本發(fā)明專利技術(shù)的試劑盒利用實(shí)時(shí)定量PCR方法，通過(guò)檢測(cè)血漿或血清中HOST2含量以早期輔助診斷EOC，具有創(chuàng)傷性小、操作性強(qiáng)等特點(diǎn)。本發(fā)明專利技術(shù)還進(jìn)一步地提供了上述輔助早期診斷EOC的HOST2檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)
，具體涉及一種輔助上皮性卵巢癌早期診斷的H0ST2試劑盒，及其在輔助上皮性卵巢癌的早期診斷中的應(yīng)用和檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)是最常見(jiàn)的卵巢癌，約占80-90%，是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤，高達(dá)70%。由于卵巢位于盆底深部，這給卵巢癌的早期診斷造成諸多困難，在臨床診斷時(shí)，70%的卵巢癌已是晚期(Luesley, D.，LawtonF., Blackledge G., Hi I ton C.，Kelly K., Rollason T., Wade-Evans Τ., JordanJ., Fielding J., Latief Τ..Failure of second-look laparotomyto influence survivalin epithelial ovarian cancer.Lancet.1988，2 (8611): 599-603.)。因此，EOC 的診斷是婦科腫瘤學(xué)家面臨的最嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一。雖然CA125是目前被認(rèn)為對(duì)上皮性卵巢癌較為敏感的腫瘤標(biāo) id (Nagele, F.，Petruj E.，Medlj Μ.，Kainzj C.，Graf, A.Η.，Seveldaj P..Preoperative CA125: an independent prognosticfactor in patients with stage Iepithelial ovarian cancer.0bstet Gynecol.1995，86 (2): 259-264.)，但迄今為止，并沒(méi)有特異性強(qiáng)能夠輔助診斷EOC的生物學(xué)指標(biāo)。因此，目前診斷EOC方面的突破主要針對(duì)多腫瘤標(biāo)記聯(lián)合檢測(cè)，以提高EOC的檢出率及其敏感性和特異性(Husseinzadeh N..Status oftumor markers inepithelial ovarian cancer has there been any progress A review.Gynecol Oncol.2011，120(1):152-157.)。長(zhǎng)鏈非編碼RNA (Long noncoding RNA，LncRNA)是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)堿基的功能性RNA分子，占人類基因組4-9%。LncRNA缺乏編碼蛋白的能力，但能夠在多種層面上調(diào)控其他基因的表達(dá)，參與細(xì)胞內(nèi)諸多生物過(guò)程。由于自身分子長(zhǎng)度，LncRNA具有一定的調(diào)控特色:既可以通過(guò)核酸序列一級(jí)結(jié)構(gòu)與其他基因結(jié)合，又可以通過(guò)復(fù)雜的高級(jí)空間結(jié)構(gòu)與蛋白因子相互作用；另外它們整體保守性較差，有利于維持自身功能的長(zhǎng)期存在。目前許多研究表明，LncRNA廣泛參與機(jī)體多種生理病理過(guò)程，其特異性表達(dá)和/或表達(dá)變化與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)(Lee，J.T..Epigenetic regulation by long noncodingRNAs.Science.2012.338(6113):1435-1439.)DLncRNA特異性表達(dá)可作為腫瘤的生物標(biāo)志物，對(duì)于LncRNA能否作為臨床檢測(cè)指標(biāo)，已有諸多集中于癌癥診斷、預(yù)后方面的研究報(bào)道，如前列腺癌中高表達(dá)的LncRNADD3，可輔助 PSA 用于早期診斷(Kusuda，Y.，Miyake, H.，Kurahashij Τ.，and Fujisawa, M.Assessment of optimal target genes for detectingmicrometastases in pelvic lymphnodes in patients with prostate cancer undergoingradical prostatectomy byreal-time reverse transcri ptase-polymerase chain reaction.Urol Oncol.2011.18.[Epub ahead of print]);肝細(xì)胞性肝癌中的LncRNA MVIH，可作為治療的潛在靶點(diǎn)，并且其表達(dá)下調(diào)可以在一定程度上預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)率(Yuan，S.X., Yang, F.，Yang，Y.，Tao，Q.F.，Zhang, J.，Huang, G.，Wang, R.Y.，Yang, S.，Huoj X.S.，Zhang, L.，Wang F.，SunS.Η., Zhou ff.P..Longnoncoding RNA associated with microvascular invasion inhepatocellularcarcinoma promotes angiogenesis and serves as a predictorfor hepatoceIlularcarcinoma patients' poor recurrence-free survival afterhepatectomy.Hepatology.2012.56 (6): 2231-2241.)。目前已知的是，短鏈非編碼 RNA,如microRNA,在血漿、血清等體液中的表達(dá)非常穩(wěn)定。這一結(jié)論為L(zhǎng)ncRNA應(yīng)用于體液檢測(cè)領(lǐng)域奠定基礎(chǔ)。2003年，Rangel等人利用RACE技術(shù)，即進(jìn)行cDNA末端快速克隆的方法，在EOC組織中發(fā)現(xiàn)一個(gè)特異性轉(zhuǎn)錄本H0ST2，長(zhǎng)度約3000個(gè)堿基，沒(méi)有開(kāi)放式可讀框，不能編碼蛋白質(zhì)，屬于 LncRNA (Rangel L.B., Sherman-BaustC.A., Wernyj R.P., Schwartz D.R., ChoK.R., Morin P.J..Characterization of novel human ovarian cancer-specifictranscripts (HOSTs) identified by serialanalysis of gene expression.0ncogene.2003，22(46):7225-7232.)。文獻(xiàn)并未就該特異性轉(zhuǎn)錄本H0ST2展開(kāi)深入研究，至今也沒(méi)有其他相關(guān)報(bào)道。目前，尚無(wú)其他檢測(cè)H0ST2的方法問(wèn)世，尚無(wú)H0ST2作為EOC生物學(xué)標(biāo)記物的文獻(xiàn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種輔助上皮性卵巢癌早期診斷的H0ST2試劑盒，本專利技術(shù)的另一目的是提供該H0ST2試劑盒在輔助上皮性卵巢癌的早期診斷中的應(yīng)用，以及相應(yīng)的檢測(cè)方法。本專利技術(shù)人首先采集了 50例EOC患者的新鮮血液作為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組選擇35例良性卵巢上皮性腫瘤患者的新鮮血液，將所有樣品分為兩部分，一部分抗凝處理后取血漿，另一部分促凝處理后取血清。分別檢測(cè)兩組血漿及血清中H0ST2的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血漿和血清的數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組血漿或血清中H0ST2的含量極其微弱，個(gè)別樣品甚至無(wú)法檢測(cè)出，但是實(shí)驗(yàn)組H0ST2的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組13倍左右。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明H0ST2的含量變化可作為早期輔助診斷EOC的重要方法之一。本專利技術(shù)人認(rèn)為以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)為基礎(chǔ)技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)患者血漿或血清中H0ST2的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)早期輔助診斷EOC是完全可行的。本專利技術(shù)提供的一種輔助上皮性卵巢癌早本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種輔助上皮性卵巢癌早期診斷的HOST2檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒是由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、引物系統(tǒng)和擴(kuò)增系統(tǒng)組成，其中的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)由反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄體系緩沖液和RNA酶抑制劑組成；擴(kuò)增系統(tǒng)由SYBR?Premix?ExTaqTM試劑組成；引物系統(tǒng)由總RNA反轉(zhuǎn)錄隨機(jī)引物和HOST2特異性的qRT?PCR的上、下游引物組成；HOST2特異性的qRT?PCR的上游引物如SEQ?ID?NO:2所示，HOST2特異性的qRT?PCR的下游引物如SEQ?ID?NO:3所示。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種輔助上皮性卵巢癌早期診斷的H0ST2檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒是由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、引物系統(tǒng)和擴(kuò)增系統(tǒng)組成，其中的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)由反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄體系緩沖液和RNA酶抑制劑組成；擴(kuò)增系統(tǒng)由SYBR Premix ExTaqTM試劑組成；引物系統(tǒng)由總RNA反轉(zhuǎn)錄隨機(jī)引物和H0ST2特異性的qRT-PCR的上、下游引物組成； H0ST2特異性的qRT-PCR的上游引物如SEQ ID NO:2所示， H0ST2特異性的qRT-PCR的下游引物如SEQ ID NO:3所示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種輔助上皮性卵巢癌早期診斷的H0ST2檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒的具體組成如下: A)總RNA反轉(zhuǎn)錄引物，I管，濃度:10μΜ，100μI/管； B)qRT PCR上游引物，I管，濃...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉善榮，惠寧，高原，劉淑鵬，余喜亞，胡晶晶，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：