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    聚乙二醇作為喜溫硫桿菌冷凍保護劑的應用方法技術

    技術編號:8653006 閱讀:225 留言:0更新日期:2013-05-01 19:09
    本發明專利技術公開了一種聚乙二醇作為喜溫硫桿菌冷凍保護劑的應用方法;屬于細菌保藏技術領域。將聚乙二醇溶液與喜溫硫桿菌菌懸液混合,得到混合液用于冷凍保存;所述的聚乙二醇的分子量為2000、12000或20000,聚乙二醇在混合液中的濃度為10%~50%(w/v)。在液氮保藏喜溫硫桿菌時,保護劑聚乙二醇的保藏效果明顯優于甘油,因此,在液氮保藏喜溫硫桿菌菌株時,添加聚乙二醇作為保護劑可以有效提高喜溫硫桿菌的存活率。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于細菌保藏
    ,具體涉及。
    技術介紹
    喜溫硫桿菌(Acidithiobacillus caldus)是嗜酸硫桿菌屬(Acidithiobacillus)中唯一的適度嗜熱菌,嗜酸好氧,是一種化能自養的革蘭氏陰性菌,以元素硫(S°)或金屬硫化礦(S2_)為能量來源,以空氣中的CO2為碳源,并吸收氮、磷等無機營養物質合成菌體細胞,廣泛分布于金屬硫化礦及煤礦礦坑的酸性水中。自1994年由HALLBERG和LINDSTR0M分離、鑒定以來,隨著人們對其浸礦作用的不斷認識,該菌在硫化礦生物浸出,特別是在金屬硫化精礦高溫生物浸礦反應器中的應用越來越廣泛。國內外研究人員一直有對該菌進行研究和選育工作,然而,在獲得具有優良性狀的菌株之后,菌種資源的保藏工作是必不可少的。研究結果表明:頻繁傳代保藏會使微生物發生突變,活性降低,出現退化現象。目前液氮保藏是公認的一種長期保持微生物菌種的最安全、可靠的方法,其中保護劑的選擇與使用對于微生物菌株冷液氮保藏的存活率有較大的影響。保護劑可改變生物樣品冷凍干燥時的物理、化學環境,減輕或防止因冷凍干燥和復水對細胞造成的損害,盡可能保持原有的各種生理生化特性和生物活性。選擇得當的保護劑是提高微生物液氮保藏存活率、延長菌種保藏期的關鍵因素。甘油是液氮保藏微生物最常用的保護劑,該保護劑可以有效地保護大部分的微生 物。但是在液氮保藏喜溫硫桿菌過程中,該保護劑卻不能為其提供有效的保護,因為復蘇后喜溫硫桿菌的存活率約為40.1%。因此,需要一種能用來有效保護喜溫硫桿菌的冷凍保護劑來液氮保藏喜溫硫桿菌,從而提高其存活率。
    技術實現思路
    本專利技術的目的在于針對一般的冷凍保護劑不能有效地冷凍保護喜溫硫桿菌,從而提供一種將聚乙二醇作為新型的喜溫硫桿菌冷凍保護劑的應用。本專利技術所采取的技術方案是:,將聚乙二醇溶液與喜溫硫桿菌菌懸液混合,得到混合液用于冷凍保存;所述的聚乙二醇的分子量為2000、12000或20000,聚乙二醇在混合液中的濃度為10% 50% (w/v);所述的聚乙二醇的分子量優選為2000,聚乙二醇在混合液中的濃度優選為10-40% (w/v);進一步優選濃度為 30% (w/v)。具體操作如下:將待保藏的菌種制成菌懸液,按1:1的體積比加入到聚乙二醇溶液中,混勻,然后分裝加入冷凍管中;將冷凍管放入4° C平衡兩小時,-20° C預凍兩個小時,后將冷凍管移至-70° C的低溫冰箱中兩小時,最后將冷凍管放入-150° C -196° C的液氮罐中保藏。本專利技術的冷凍保護劑聚乙二醇,在液氮保藏喜溫硫桿菌時,使得喜溫硫桿菌的存活率比傳統的冷凍保護劑甘油提高了 2 3倍。因此,在液氮保藏喜溫硫桿菌菌株時,添加聚乙二醇作為保護劑可以有效提高喜溫嗜酸硫桿菌的存活率。具體實施例方式以下是本專利技術的具體實施例,具體描述本專利技術,但本專利技術不僅限于此。本專利技術中的聚乙二醇購自北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司。以下實施例中,喜溫硫桿菌菌株(SI,Dl,S2)由中南大學生物冶金教育部重點實驗室提供。實施例1將三株經過鑒定的喜溫硫桿菌菌株(S1,D1,S2)分別培養至對數生長中期,過濾去除硫粉,在10000r/min條件下離心20min收集菌體,用稀硫酸(pH=2.0)清洗菌體2次,棄去上清液,將菌泥用無菌水懸浮。冷凍管的制備:將獲得的菌懸液(濃度為2 X 101°個/mL)分別按1:1的體積比加入到不同的保護劑溶液中,混勻,然后分裝加入冷凍保藏管中。保護劑的濃度如下表I所示:表1:保護劑濃度的配制本文檔來自技高網...

    【技術保護點】
    聚乙二醇作為喜溫硫桿菌冷凍保護劑的應用方法,其特征在于,將聚乙二醇溶液與喜溫硫桿菌菌懸液混合,得到混合液用于冷凍保存;所述的聚乙二醇的分子量為2000、12000或20000,聚乙二醇在混合液中的濃度為10%~50%(w/v)。

    【技術特征摘要】
    1.聚乙二醇作為喜溫硫桿菌冷凍保護劑的應用方法,其特征在于,將聚乙二醇溶液與喜溫硫桿菌菌懸液混合,得到混合液用于冷凍保存;所述的聚乙二醇的分子量為2000、12000或20000,聚乙二醇在混合液中的濃度為10% 50% (w/v)。2.根據權利要求1所述的應用方法,其特征在于,所述的聚乙二醇的分子量為2000,聚乙二醇在混合液中的濃度為10-40% (w/v)。3.根據權利要求2所述的應用方法,其...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:吳學玲劉新星劉學端段紅胡琪范宏偉張真真劉莉莉
    申請(專利權)人:中南大學
    類型:發明
    國別省市:

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