本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種菌種保藏液和菌種保藏方法。該菌種保藏液以100mL溶液計(jì)含有酵母粉0.2g～0.6g、氯化鈉0.4g～1.0g、二甲亞砜2mL～10mL、甘油10mL～30mL、其余為水。該菌種保藏方法是將待保藏菌種加入上述菌種保藏液中，混合均勻，得到待保藏菌液。用無菌濾紙吸取待保藏菌液，得到含菌濾紙；用無菌透明膠帶將含菌濾紙固定在無菌蠟紙上，然后置于冰箱中保藏。本發(fā)明專利技術(shù)菌種保藏液可長(zhǎng)時(shí)間維持微生物活力、保藏期較長(zhǎng)。本發(fā)明專利技術(shù)的菌種保藏方法生物安全性和保存效能均較高，操作方便且轉(zhuǎn)運(yùn)方便，特別是當(dāng)菌種數(shù)量時(shí)具有儲(chǔ)存空間小且便于查找。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于微生物工程
，具體涉及一種。
技術(shù)介紹
菌種保藏在微生物研究及實(shí)際應(yīng)用中必不可少。由于微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。目前菌種保藏方法主要有以下幾種(I)傳代培養(yǎng)保藏法。該方法又包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)作保藏厭氧細(xì)菌用)等幾種。 (2)液體石蠟覆蓋保藏法。該方法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間。(3)載體保藏法。該方法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體(如土壤、沙子、硅膠等)上，然后進(jìn)行干燥的保藏法。(4)寄主保藏法。用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。(5 )冷凍保藏法。可分為低溫冰箱法(-20 V -30 V或者-50 V _80 V )、干冰酒精快速凍結(jié)法(約-70 °C)和液氮法(_196°C)等。上述幾種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，但總的來說仍然存在以下缺點(diǎn)(1)不能長(zhǎng)時(shí)間維持微生物活力，保藏期較短。(2)生物安全性較低，保存效能較低。(3)操作繁瑣，保存不便，難以轉(zhuǎn)運(yùn)。(4)當(dāng)菌種數(shù)量較多時(shí)，儲(chǔ)存空間較大，而且不便查找。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可長(zhǎng)時(shí)間維持微生物活力、保藏期較長(zhǎng)的菌種保藏液。本專利技術(shù)的另一目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生物安全性和保存效能均較高、操作方便且轉(zhuǎn)運(yùn)方便、特別是當(dāng)菌種數(shù)量時(shí)具有儲(chǔ)存空間小且便于查找的菌種保藏方法。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)目的之一的技術(shù)方案是一種菌種保藏液，以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化鈉O. 4g 1. 0g、二甲亞砜2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余為水。優(yōu)選以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉O. 5g、氯化鈉O. 6g、二甲亞砜5mL、甘油20mL、其余為水。該菌種保藏液以IOOmL溶液計(jì)還含有胰蛋白O. 8g 1. 2g和葡萄糖O. 2g O. 6g。優(yōu)選以IOOmL溶液計(jì)含有胰蛋白1. 0g、酵母粉O. 5g、氯化鈉O. 6g、葡萄糖O. 5g、二甲亞砜5mL、甘油20mL、其余為水。本專利技術(shù)的另一目的的技術(shù)方案是一種菌種保藏方法，具有以下步驟①將待保藏菌種加入上述菌種保藏液中，混合均勻，得到待保藏菌液。②用無菌濾紙吸取步驟①得到的待保藏菌液，得到含菌濾紙用無菌透明膠帶將步驟②得到的含菌濾紙固定在無菌蠟紙上，然后置于冰箱中保藏。當(dāng)待保藏菌種數(shù)量較多而使得無菌濾紙(或含菌濾紙)較多的情況下，則可以將多張含菌濾紙呈陣列固定在無菌蠟紙的一面，并且每張含菌濾紙一側(cè)相應(yīng)設(shè)有一張作為標(biāo)識(shí)的貼紙，用于記載菌種名稱、保藏日期以及鑒定號(hào)等，從而起到清楚地標(biāo)識(shí)作用，便于查找。當(dāng)待保藏菌種數(shù)量較多而使得一張無菌蠟紙的一面不夠使用的情況下，則可以將含菌濾紙及貼紙?jiān)O(shè)置在同一張無菌蠟紙的另一面。而當(dāng)待保藏菌種數(shù)量較多而使得一張無菌蠟紙的兩面都不夠使用的情況下，可以采用多張無菌蠟紙，并由文件夾夾裝，并將該文件夾置于冰箱中保藏。文件夾扉頁設(shè)有生物安全標(biāo)識(shí)，首頁則標(biāo)有目錄和索引，從而進(jìn)一步起到清楚標(biāo)識(shí)作用，便于查找。 本專利技術(shù)具有的積極效果(I)本專利技術(shù)的菌種保藏液中的二甲亞砜和甘油可通過氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。而酵母粉和氯化鈉則可為細(xì)菌提供能量，防止其死亡。從而使得該菌種保藏液可長(zhǎng)時(shí)間維持微生物活力，大大延長(zhǎng)了保藏期。(2)本專利技術(shù)的菌種保藏液中的胰蛋白和葡萄糖可進(jìn)一步為細(xì)菌提供能量，從而進(jìn)一步維持微生物活力。使用本專利技術(shù)的方法在使菌種在_18°C保藏兩年以及在25°C復(fù)蘇一個(gè)月均存活。(3)本專利技術(shù)的菌種保藏方法采用具有良好的吸水性及粘附性的無菌濾紙作為粘附介質(zhì)，并且采用具有良好的隔絕空氣作用的蠟紙以及透明膠帶，這樣能夠保證所保藏菌種的無氧狀態(tài)，生物安全性和保存效能均較高。(4)本專利技術(shù)的菌種保藏方法操作簡(jiǎn)便，轉(zhuǎn)運(yùn)方便，細(xì)菌生存期長(zhǎng)，可儲(chǔ)存于普通冰箱凍藏室，非常適合臨床微生物菌種實(shí)驗(yàn)室分離的細(xì)菌、酵母菌及絲狀真菌的日常保藏及轉(zhuǎn)運(yùn)。(5)本專利技術(shù)一方面在待保藏菌種較多而使得含菌濾紙較多的情況下，可將多張含菌濾紙呈陣列設(shè)置在無菌蠟紙上，并且采用貼紙記載菌種名稱、保藏日期以及鑒定號(hào)等，從而起到清楚地標(biāo)識(shí)作用，便于查找。另一方面在待保藏菌種更多而使無菌蠟紙較多的情況下，以文件夾方式存儲(chǔ)菌種，其扉頁設(shè)有生物安全標(biāo)識(shí)，首頁則標(biāo)有目錄和索引，從而進(jìn)一步起到清楚標(biāo)識(shí)作用，便于查找。特別是還大大減小了儲(chǔ)存空間。附圖說明圖1為多張含菌濾紙呈陣列設(shè)置在無菌蠟紙一面的示意圖。具體實(shí)施例方式(實(shí)施例1)本實(shí)施例為菌種保藏液的配制。將1. Og的胰蛋白、O. 5g的酵母粉、O. 6g的氯化鈉、O. 5g葡萄糖、5. OmL的二甲亞砜、20mL的甘油加入到150mL的燒瓶中，然后加水至IOOmL,充分混勻溶解后，在O.1MPa的壓力以及121°C的溫度下進(jìn)行20min的滅菌，得到菌種保藏液。(實(shí)施例2 實(shí)施例5)各實(shí)施例的菌種保藏液的配制與實(shí)施例1基本相同，不同之處見表I。表I權(quán)利要求1.一種菌種保藏液，其特征在于以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化鈉O.4g 1. 0g、二甲亞諷2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余為水。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌種保藏液，其特征在于以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉O.5g、氯化鈉O. 6g、二甲亞砜5mL、甘油20mL、其余為水。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌種保藏液，其特征在于以IOOmL溶液計(jì)還含有胰蛋白O.8g 1. 2g和葡萄糖O. 2g O. 6g。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌種保藏液，其特征在于以IOOmL溶液計(jì)含有胰蛋白1.0g、酵母粉O. 5g、氯化鈉O. 6g、葡萄糖O. 5g、二甲亞砜5mL、甘油20mL、其余為水。5.一種菌種保藏方法，其特征在于具有以下步驟 ①將待保藏菌種加入菌種保藏液中，混合均勻，得到待保藏菌液；所述菌種保藏液以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化鈉O. 4g 1. 0g、二甲亞砜2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余為水； ②用無菌濾紙吸取步驟①得到的待保藏菌液，得到含菌濾紙； ③用無菌透明膠帶將步驟②得到的含菌濾紙固定在無菌蠟紙上，然后置于冰箱中保藏。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌種保藏方法，其特征在于所述無菌濾紙根據(jù)待保藏菌種數(shù)量至少設(shè)有一張；每張無菌濾紙吸取待保藏菌液后得到的含菌濾紙一側(cè)相應(yīng)設(shè)有一張作為標(biāo)識(shí)的貼紙。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菌種保藏方法，其特征在于所述無菌蠟紙根據(jù)待保藏菌種數(shù)量至少設(shè)有一張；所述無菌蠟紙多于一張時(shí)，則由文件夾夾裝，并將該文件夾置于冰箱中保藏。8.根據(jù)權(quán)利要求5至7之一所述的菌種保藏方法，其特征在于所述菌種保藏液以IOOmL溶液計(jì)含有酵母粉0. 5g、氯化鈉0. 6g、二甲亞砜5mL、甘油20mL、其余為水。9.根據(jù)權(quán)利要求5至7之一所述的菌種保藏方法，其特征在于所述菌種保藏液以IOOmL溶液計(jì)還含有胰蛋白0. 8g 1. 2g和葡萄糖0. 2g 0. 6g。10.根據(jù)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種菌種保藏液，其特征在于：以100mL溶液計(jì)含有酵母粉0.2g～0.6g、氯化鈉0.4g～1.0g、二甲亞砜2mL～10mL、甘油10mL～30mL、其余為水。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：朱長(zhǎng)太，凌揚(yáng)，董春雷，孔穎澤，張長(zhǎng)松，萬美珍，劉永萍，吳婷婷，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：常州市腫瘤醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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