本發明專利技術公開了一種保加利亞乳桿菌凍干保護劑及其制備方法，以質量份數計，包括以下組分：乳糖20～30份、脫脂乳粉20～30份、抗壞血酸鈉3～5份、聚乙二醇40000.2～0.6份、聚乙烯吡咯烷酮0.2～0.8份、牛血清白蛋白0.5～2.0份和蒸餾水100份。在制備菌粉的過程中加入凍干保護劑，可提高菌體的抗冷凍能力，從而提高菌粉的凍干存活率，且保藏期較長，存活率不易降低。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于保加利亞乳桿菌保存
，涉及。
技術介紹
保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)是正常人體腸道中極為重要的生理菌群之一，具有維持人體微生態平衡、促進消化、防癌抗癌、增強免疫力、抗衰老等作用，與機體健康息息相關。目前保加利亞乳桿菌菌粉的制備主要采用真空冷凍干燥技術，但保加利亞乳桿菌如果直接進行冷凍干燥，不可避免地會造成部分細胞的死亡或損傷，對生產十分不利。有報 道稱如果將其培養液直接進行冷凍干燥，其存活率僅10%_30%左右。而影響菌體冷凍干燥的存活率的因素是多方面的。包括菌株、細胞大小及形狀、生長階段及生長速率、初始菌懸液濃度、培養基組成、PH值、保護劑、預凍條件、降溫速率、凍干條件、細胞含水量、細胞膜成份及復水條件等，其中保護劑的影響最為突出。一種效果好的保護劑要求在冷凍干燥過程中可以提供保護作用，它可以改變樣品冷凍干燥時的物理、化學環境，減輕或防止冷凍干燥過程對菌體的損害，盡可能保持菌體原有的各種生理生化特性和生物活性。關于保加利亞乳桿菌保護劑的報道有很多，主要集中于醫學和生物學領域。蒲麗麗等研究了多種保護劑對保加利亞乳桿菌的保護作用，發現海藻糖的保護效果最好，它能顯著抑制冰晶生成的形態不穩定性。在發酵液中添加保護劑能夠抑制冷凍干燥過程中共晶現象的發生，提高菌體的抗冷凍能力。侯敏娜等以正交實驗方法對保加利亞乳桿菌保護劑進行研究。結果表明，10%蔗糖、5%乳糖、3%甘油和0.4%谷氨酸鈉為最佳配方組合。張澤生等采用響應面分析法篩選并優化了保加利亞乳桿菌凍干保護劑，發現在眾多物質中脫脂乳、海藻糖、菊粉、麥芽糊精對菌種保護作用突出。田豐偉等研究了凍干保護劑組成對保加利亞乳桿菌18冷凍干燥存活率和活力的影響。實驗表明，3%復原脫脂乳、3%乳糖、3%甘油組成的凍干保護劑，使凍干存活率達到68.9%，具有較快的產酸能力。東北農業大學的張英華等通過單因素比較和正交試驗設計，確定適合保加利亞乳桿菌的最佳凍干保護劑配方脫脂乳粉8%、海藻糖1%、甘油2%、谷氨酸鈉I. 5%。
技術實現思路
本專利技術解決的問題在于提供，用于制備高活性菌粉，在制備菌粉的過程中加入凍干保護劑，可提高菌體的抗冷凍能力，從而提高菌粉的凍干存活率。本專利技術是通過以下技術方案來實現一種保加利亞乳桿菌凍干保護劑，以質量份數計，包括以下組分乳糖20 30份、脫脂乳粉20 30份、抗壞血酸鈉3 5份、聚乙二醇40000. 2 0. 6份、聚乙烯吡咯烷酮0. 2 0. 8份、牛血清白蛋白0. 5 2. 0份和蒸餾水100份。進一步的，以質量份數計，包括以下組分乳糖20 26份、脫脂乳粉24 30份、抗壞血酸鈉4. 4 5份、聚乙二醇40000. 2 0. 4份、聚乙烯吡咯烷酮0. 3 0. 6份、牛血清白蛋白0. 5 I. 0份和蒸餾水100份。 一種保加利亞乳桿菌凍干保護劑的制備方法，包括以下步驟I)以質量份數計，在蒸餾水中添加20 30份的乳糖和20 30份的脫脂乳粉，力口熱溶解后用調節pH為6. 9 7. 1，滅菌，冷卻至室溫；2)以質量份數計，將0. 2 0. 8份的聚乙烯吡咯烷酮溶解于蒸餾水中，滅菌，冷卻至室溫;3)以質量份數計，將3 5份的抗壞血酸鈉、0. 2 0. 6份的聚乙二醇4000、和0. 5 2. 0份的牛血清白蛋白溶解于無菌生理鹽水中，然后用濾膜過濾除菌；4)將步驟1)、2)、3)所制備的溶液混合，并調整水的總質量份數為100份，得到保加利亞乳桿菌凍干保護劑。所述的保加利亞乳桿菌凍干保護劑的制備方法，包括以下步驟I)以質量份數計，在蒸餾水中添加20 26份的乳糖和24 30份的脫脂乳粉，力口熱溶解后用調節pH為6. 9 7. 1，滅菌，冷卻至室溫；2)以質量份數計，將0. 3 0. 6份的聚乙烯吡咯烷酮溶解于蒸餾水中，滅菌，冷卻至室溫;3)以質量份數計，將4. 4 5份的抗壞血酸鈉、0. 2 0. 4份的聚乙二醇4000、和0. 5 I. 0份的牛血清白蛋白溶解于無菌生理鹽水中，然后用濾膜過濾除菌；4)將步驟1)、2)、3)所制備的溶液混合，并調整水的總質量份數為100份，得到保加利亞乳桿菌凍干保護劑。所述的步驟I)、步驟2)的滅菌是在100 115°C滅菌10 15min。所述將保加利亞乳桿菌凍干保護劑與保加利亞乳桿菌泥等體積混合均勻，于_40°C預凍3 12h，然后-50 _56°C冷凍干燥18 24h，得到保加利亞乳桿菌菌粉。與現有技術相比，本專利技術具有以下有益的技術效果本專利技術提供的保加利亞乳桿菌凍干保護劑，在制備菌粉的過程中加入凍干保護齊U，可提高菌體的抗冷凍能力，從而提高菌粉的凍干存活率，且保藏期較長，存活率不易降低。本專利技術提供的保加利亞乳桿菌凍干保護劑，在制備菌粉的過程中加入凍干保護劑后，所制備的保加利亞乳桿菌菌粉中凍干存活率達到53. 5 58. 567%，菌粉活菌數為0. 916X1011 I. 066X 10ncfu/g。本專利技術提供的保加利亞乳桿菌凍干保護劑，其主要原料為乳糖和脫脂乳粉，原料易得、成本低。采用該復合保護劑制成的保加利亞乳桿菌凍干發酵劑，可以作為生產保加利亞乳桿菌發酵乳制品的直投式發酵劑使用。具體實施例方式本專利技術提供，用于制備高活性菌粉，在制備菌粉的過程中加入凍干保護劑，可提高菌體的抗冷凍能力，從而提高菌粉的凍干存活率。下面結合具體的實施例對本專利技術做進一步的詳細說明，所述是對本專利技術的解釋而不是限定。實施例I保加利亞乳桿菌凍干保護劑的組成為乳糖22g、脫脂乳粉26g、抗壞血酸鈉4. 6g、聚乙二醇40000. 3g、聚乙烯吡咯烷酮PVP 0. 4g、牛血清白蛋白BSA 0. 7g、蒸餾水100ml。其制備方法 I)按量將乳糖和脫脂乳粉加熱溶解后混合均勻，并用NaOH溶液調節pH 6. 9，然后經110°C滅菌15min，冷卻至室溫；2)按量稱取聚乙烯吡咯烷酮PVP，溶解于蒸餾水中，再115°C滅菌30min，冷卻至室溫;3)按量分別稱取抗壞血酸鈉、聚乙二醇4000、牛血清白蛋白BSA溶解于0. 85-0. 9%無菌生理鹽水中，用0. 22 y m濾膜過濾除菌；4)將步驟1)、2)兩濕熱滅菌的溶液按量混合，并在無菌條件下加入抗壞血酸鈉、聚乙二醇4000、牛血清白蛋白BSA的過濾除菌水溶液，混勻即得保加利亞乳桿菌凍干保護劑。將保加利亞乳桿菌接種于MRS肉湯培養基中，活化三次，鏡檢無雜菌且形態無異常后，將其按4% (v/v)的接種量接入含MRS培養基中培養18h后，9000r/min離心15min，獲得保加利亞乳桿菌菌泥，等體積加入保加利亞乳桿菌凍干保護劑，在低溫冰箱中于_40°C預凍4h，然后放入凍干機進行冷凍干燥18h，即得保加利亞乳桿菌菌粉，凍干存活率為53.500%，菌粉活菌數為 0. 916X10ncfu/g。實施例2保加利亞乳桿菌凍干保護劑的組成為乳糖23g、脫脂乳粉24g、抗壞血酸鈉4. 7g、聚乙二醇40000. 3g、聚乙烯吡咯烷酮PVP 0. 3g、牛血清白蛋白BSA 0. 6g、蒸餾水100ml。其制備方法I)按量將乳糖和脫脂乳粉加熱溶解后混合均勻，并用NaOH溶液調節pH 7. 0，然后經110°C滅菌15min，冷卻至室溫；2)按量本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種保加利亞乳桿菌凍干保護劑，其特征在于，以質量份數計，包括以下組分：乳糖20～30份、脫脂乳粉20～30份、抗壞血酸鈉3～5份、聚乙二醇40000.2～0.6份、聚乙烯吡咯烷酮0.2～0.8份、牛血清白蛋白0.5～2.0份和蒸餾水100份。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳合，李串娜，舒國偉，王勇，
申請(專利權)人：陜西科技大學，
類型：發明
國別省市：
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