本發明專利技術提供耐熱凍干保護劑、活疫苗凍干粉及其制備方法，涉及微生物保存領域。耐熱凍干保護劑：低聚糖46%～90%，氨基酸1%～9%，明膠1%～9%，酪蛋白水解物1%～9%，聚乙烯基吡咯烷酮1%～9%，甘油1%～9%，普魯尼克681%～9%。其制備方法為：制備保護劑溶液、活疫苗，干燥：在常壓-10℃～2℃保持2～6小時，在100～800mbar0℃～20℃保持10～26小時，在0.01～5.0mbar10℃～28℃保持2～8小時。本發明專利技術耐熱凍干保護劑，成分及含量搭配合理，使得活疫苗耐熱。本發明專利技術活疫苗凍干粉的制備方法，避免了冰晶的形成，得到的活疫苗凍干粉在37℃保存3個月，20℃保存18個月。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及活的微生物保存領域，具體涉及。
技術介紹
病毒等生物活性物質及其相關制品的熱敏感性一直是活疫苗長期保存的瓶頸。我國幅員遼闊，經濟水平差異較大，運輸、使用過程中疫苗短期暴露高溫環境(甚至45°C以上)的現象依然存在，所以對活疫苗的耐熱性能提出了更高的要求。耐熱凍干保護劑考慮了活疫苗在較高溫度和較長保存時間的情況下，凍干物質可能產生的物理和化學變化對活疫苗存活的影響。但是，現有耐熱凍干保護劑僅能使活疫苗在2 8 °C條件下保存24個月，37 °C條件下保存30天。活疫苗的冷凍干燥工藝對其保存期也有很大的影響。常規冷凍干燥工藝中，活疫苗首先被超低溫凍結(_40°C以下)，形成的冰結晶對病毒的囊膜或者細胞壁造成不同程度的傷害，進而影響干燥產品水合后的活性。因此，常規冷凍干燥工藝中，無論如何對耐熱保護劑配方進行多大改進，制品的耐熱性能還是有限的，室溫甚至更高溫度的穩定性是不高的。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種活疫苗的耐熱凍干保護劑，能夠使活疫苗在37°C保存3個月，20°C條件下保存18個月。 本專利技術的另一目的是提供含有上述耐熱凍干保護劑的活疫苗凍干粉。本專利技術的再一目的是提供活疫苗凍干粉的制備方法，該制備方法避免了凍干過程中冰晶的形成，對活病毒細胞損傷小，使得活疫苗凍干粉耐熱性能強。本專利技術的目的采用下述技術方案實現。一種活疫苗的耐熱凍干保護劑，按照重量百分含量由下列物質組成 低聚糖46% 90%， 氨基酸1% 9%， 明膠1% 9%, 酪蛋白水解物1% 9%， 聚乙烯基吡咯烷酮1% 9%， 甘油1% 9%, 普魯尼克68 1% 9%。所述低聚糖為海藻糖。所述低聚糖為海藻糖和選自蔗糖、乳糖或菊糖中的一種或兩種以上物質的混合物，所述低聚糖中海藻糖的質量分數為60% 90%。所述氨基酸為精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和異亮氨酸中的一種或兩種以上的混合物。一種所述耐熱凍干保護劑的活疫苗凍干粉。一種所述活疫苗凍干粉的制備方法，包括如下步驟用溶劑溶解所述耐熱凍干保護劑，得到保護劑溶液；將保護劑溶液與活病毒液混合，得到活疫苗；將活疫苗用真空干燥機按照下述方法干燥將活疫苗在常壓溫度為-10°C 2°C條件下保持2 6小時，在真空度為100 800mbar溫度為(TC 20°C條件下保持10 26小時，在真空度為O. 01 5.Ombar溫度為10°C 28°C條件下保持2 8小時，得到活疫苗凍干粉。所述溶劑為無菌的生理鹽水或注射用水或PBS緩沖液或Tris-HCl緩沖液或Hank’ s液，所述耐熱凍干保護劑與溶劑的質量比為3:6 8。所述保護劑溶液與活病毒液按照質量比為1:0. 5 2混合。所述活病毒液為雞新城疫病毒液或豬繁殖與呼吸綜合征病毒液。本專利技術活疫苗的耐熱凍干保護劑，由于其成分及含量的合理搭配，使得活疫苗耐熱、耐儲存。耐熱凍干保護劑中的低聚糖能夠置換毒囊膜或者細胞壁中的，讓病毒處于休眠狀態，降低病毒干燥和保存期的生命活動，進而大大加強其耐熱性能。本專利技術活疫苗凍干粉的制備方法，避免了冰晶的形成，減少病毒囊膜或者細胞壁的物理損傷，使得活疫苗的耐熱性大大增強。本專利技術制備的活疫苗凍干粉在37°C保存3個月，20°C條件下保存18個月。 具體實施例方式下面通過實施例進一步解釋本專利技術，但本專利技術并不受這些實施例的限制。實施例1耐熱凍干保護劑的制備 如果沒有特殊說明，本實施例中的百分比為重量百分比。其中，酪蛋白水解物購自ShanHai Richu Bioscience Co. · Ltd,批號 090901 ;聚乙烯基吡咯烷酮(K-30)購自國藥集團化學試劑有限公司，批號F20111009 ;普魯尼克68(Pluronic F 68)購自上海生工生物有限公司，批號HJ0522B2012。耐熱凍干保護劑I配方 海藻糖68%， 甘氨酸6%， 明膠3%， 酪蛋白水解物6%， 聚乙烯基吡咯烷酮 6%， 甘油5%， 普魯尼克686%。耐熱凍干保護劑2配方 海藻糖 38%，蔗糖 20%， 精氨酸1%、甘氨酸1%、蛋氨酸1%、谷氨酸1%，異亮氨酸3%， 明膠8%， 酪蛋白水解物4%，聚乙烯基吡咯烷酮 9%， 甘油7%， 普魯尼克687%。耐熱凍干保護劑3配方 海藻糖 80%，乳糖 10%， 精氨酸1%， 明膠1%， 酪蛋白水解物1%， 聚乙烯基吡咯烷酮 2%， 甘油2%， 普魯尼克683%。耐熱凍干保護劑4配方 海藻糖 38%,菊糖 10%, 谷氨酸9%， 明膠9%， 酪蛋白水解物7%， 聚乙烯基吡咯烷酮 9%， 甘油9%， 普魯尼克689%。耐熱凍干保護劑5配方 海藻糖48%，蔗糖15%，乳糖15%， 精氨酸1%、甘氨酸1%、蛋氨酸2%， 明膠3%， 酪蛋白水解物9%， 聚乙烯基吡咯烷酮 3%， 甘油1%， 普魯尼克682%。 按照各耐熱凍干保護劑的配方稱取各成分，獲得耐熱凍干保護劑1-5。 實施例2 雞新城疫活疫苗凍干粉的制備及其耐熱性能 (I)耐熱凍干保護劑的制備 按實施例1方法制得耐熱凍干保護劑1-5。(2)雞新城疫病毒液(活病毒液)的準備 雞新城疫病毒液(活病毒液)由南京天邦生物科技有限公司提供。具體制備方法按照《獸用生物質量質量標準匯編》(2006-2008)相關要求，制備雞新城疫病毒液(La Sota株)，每羽份病毒液病毒含量為107_%ID5(i (雞胚檢驗法)。(3)雞新城疫活疫苗凍干粉的制備 ①將耐熱凍干保護劑I與無菌注射用水按照質量比為3:7混合，待耐熱凍干保護劑I完全溶解后，用O. 22 μ m的微孔濾膜過濾除菌，制得保護劑溶液1，4°C保存備用。按照制備保護劑溶液I的方法，將耐熱凍干保護劑2-5，分別配制成相應的保護劑溶液。不同之處在于，保護劑溶液2中的溶劑為無菌PBS緩沖液(pH7. 2)，耐熱凍干保護劑2與無菌PBS緩沖液(pH7. 2)按照質量比為3:6混合；保護劑溶液3中的溶劑為無菌Hank’s液(pH7. 2)，耐熱凍干保護劑3與無菌Hank’ s液(pH7. 2)按照質量比為3:8混合；保護劑溶液4中的溶劑為無菌Tris-HCl緩沖液(pH7. 2)，耐熱凍干保護劑4與無菌Tris-HCl緩沖液(pH7. 2)按照質量比為3:6混合；保護劑溶液5中的溶劑為無菌生理鹽水，耐熱凍干保護劑5與無菌生理鹽水按照質量比為3:7混合。PBS 緩沖液(ρΗ7· 2):將 8. 5g NaCl,3. 5g Na2HPO4 · 12H20 和 O. 25g NaH2PO4 · 2H20溶液蒸餾水，定容至1000ml。Hank，s 液(ρΗ7· 2)配方將 8. Olg NaCl.O. 4g KC1、0. 14g CaCl2,0. 35g NaHCO3'0. 06g KH2PO 4和0. 34g葡萄糖溶于蒸餾水，定容至1000ml。Tris-HCl緩沖液(pH7. 2)配方將50ml濃度為O. lmol/L三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液與44. 7 ml濃度為O. lmol/L鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml。@將保護劑溶液1-5分別與雞新城疫病毒液(活病毒液)混合，得到活疫苗1-5.活疫苗I中保護劑溶液I與雞新城疫病毒液(活病毒液)的質量比為1:1。活疫苗2本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種活疫苗的耐熱凍干保護劑，按照質量百分含量由下列物質組成：低聚糖46%～90%，?氨基酸1%～9%，明膠1%～9%，酪蛋白水解物1%～9%，聚乙烯基吡咯烷酮1%～9%，甘油1%～9%，普魯尼克68?1%～9%。
【技術特征摘要】
1.一種活疫苗的耐熱凍干保護劑，按照質量百分含量由下列物質組成 低聚糖46% 90%， 氨基酸1% 9%， 明膠1% 9%, 酪蛋白水解物1% 9%， 聚乙烯基吡咯烷酮1% 9%， 甘油1% 9%, 普魯尼克68 1% 9%。2.根據權利要求1所述活疫苗的耐熱凍干保護劑，其特征在于所述低聚糖為海藻糖。3.根據權利要求1所述活疫苗的耐熱凍干保護劑，其特征在于所述低聚糖為海藻糖和選自蔗糖、乳糖或菊糖中的一種或兩種以上物質的混合物，所述低聚糖中海藻糖的質量分數為60% 90%。4.根據權利要求2或3所述活疫苗的耐熱凍干保護劑，其特征在于所述氨基酸為精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和異亮氨酸中的一種或兩種以上的混合物。5.一種含有權利要求4所述耐熱凍干保護劑的活疫苗凍干粉。6.一種權利要求5所述活疫苗凍干粉的制備方法，其特征在于包括如下步驟用溶劑溶解所述耐...
【專利技術屬性】
技術研發人員：呂芳，盧宇，鄧碧華，張金秋，侯繼波，
申請(專利權)人：江蘇省農業科學院，
類型：發明
國別省市：
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