本發明專利技術公開了用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針及其試劑盒，通過添加不同的特異性探針達到檢測不同分型試劑盒，能一次檢測國際公認和宮頸癌密切相關的常見的18種高危型人乳頭瘤病毒DNA，并對HPV16、18型進行分型檢測。本申請提供6條通用引物和18條特異的分子信標探針，該6條通用引物能將18種高危型人乳頭瘤病毒DNA擴增出來，而18條探針是針對18種高危型設計的特異的分子信標探針，可以根據檢測的需求添加不同型的探針，從而組合成針對不同高危型檢出需求的試劑盒，同時對所添加的探針進行不同報告基團的標記達到對高危型HPV進行分型檢測的目的。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及人乳頭瘤病毒檢測的試劑盒領域，尤其涉及用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針及其試劑盒。
技術介紹
人乳頭瘤病毒(Hyman papillomvir μ s，HPV)是一種嗜上皮性病毒，有高度的特異性，人類是它唯一的宿主。目前已經確定HPV型別已經超過了 120種，約30余種定向感染人體生殖道皮膚及粘膜的復層鱗狀上皮，從而導致尖銳濕疣以及宮頸病變，甚至可能引起宮頸癌的發生。不同亞型的HPV感染導致不同病變，根據病變的程度高低，將HPV亞型分為高危型和低危型。低危型與性傳播疣或尖銳濕疣有關，一般不誘發癌變，常見的型有6、 11、42、43、44 ;高危型與子宮頸癌及子宮上皮內瘤變的發生有關，常見的高危型有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，2004 年發布的 HPV handbook 中國際上公認的導致宮頸癌的 HPV 高危型為 HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等18種型。研究顯示HPV感染存在多樣性和地區差異性，各國各地區型別不同，國際癌癥研究協會(IARC)的研究顯示，在全世界范圍內最常見亞型為HPV16，其次往往是HPV18。除了這兩個基因型外，其他HPV基因型的分布存在明顯的地域差異，非洲較為流行的是HPV45和HPV33，歐洲較為流行的是HPV45，南、北美洲是HPV31、33和45。在亞洲相對較為流行的是HPV58和52。HPV的型別還與宮頸癌的病理類型有關，在宮頸鱗狀上皮細胞癌中以HPV16為主(占51%)，而在宮頸腺癌和宮頸腺鱗細胞癌中HPV分別占56%和39%。高危型HPV的持續性感染是宮頸癌發生的必要條件。HPV感染使得宮頸癌的相對危險性增加250倍，而從高危型HPV的持續感染到一般的宮頸癌前病變最終發展宮頸癌大約需要5-10年。因此，有針對性地對高危型HPV進行全面檢測，對宮頸癌的早期診斷和治療具有重要的意義。目前常見的HPV檢測方法包括測序法、雜交捕獲法、導流雜交法及熒光PCR法。測序法的結果相對準確，但操作繁瑣，且對操作者的要求較高，靈敏度低，不適于臨床應用；雜交捕獲法假陽性高、操作時間長、無法區分具體型別、成本較高，不宜在經濟較不發達的發展中國家推廣；導流雜交法在市場上雖仍有一定占有量，但該方法無法避免因產物污染造成的假陽性現象，這也就限制了其在臨床上的大規模應用；熒光PCR法不但靈敏度高特異性強，而且自動化程度高，成本適中，幾乎不會造成污染，為人乳頭瘤病毒的早期診斷提供優勢。目前國內市場已批準上市的HPV檢測試劑有多種，有表面等離子諧振法(SPR)、PCR-熒光偏振技術、基因芯片法、流式熒光雜交技術即液態芯片法、PCR+膜雜交法、雜交捕獲法、PCR-反向點雜交法、實時熒光PCR法等多種平臺技術的產品共34個。生產廠家主要有QIAGEN、潮州凱普生物化學有限公司、亞能生物技術(深圳)有限公司、港龍生物技術(深圳)有限公司、凱杰生物工程(深圳)有限公司、上海之江生物科技有限公司、中山大學達安基因股份有限公司、北京金菩嘉醫療科技有限公司、上海透景生命科技有限公司、上海科華生物工程股份有限公司、泰普生物科學(中國)有限公司等。目前熒光PCR產品共計19個，均使用Taqman探針，不同的產品檢測的型別各不相同，其中有6個產品只能檢測低危型，檢測高危型產品中最多只能檢測13中常見的高危型。分別是港龍生物技術(深圳)有限公司、潮州凱普生物化學有限公司、上海之江生物科技有限公司、泰普生物科學(中國)有限公司生產的產品。目前市面上還沒有同時檢測18種高危型HPV的熒光PCR產品。PCR檢測中，同一試劑盒檢測的型別越多，對引物和探針的靈敏度、特異性的要求就越高，現有技術的探針沒有辦法實現18種高危型HPV同時檢測。表1.與本專利技術相關的已經公開的專利申請相關統計對比權利要求1.用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針，所述18種高危型人乳頭瘤病毒是指 HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73 和 HPV82，其特征在于，所述引物為一組通用引物，序列如SEQ ID NO 1—SEQ ID NO :4所示，所述探針為特異探針，序列如SEQ IDNO :7— SEQ ID NO 24 所示 檢測HPV16型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:7所示； 檢測HPV18型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:8所示； 檢測HPV26型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:9所示； 檢測HPV31型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 10所示； 檢測HPV33型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 11所示； 檢測HPV35型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 12所示； 檢測HPV39型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 13所示； 檢測HPV45型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 14所示； 檢測HPV51型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 15所示； 檢測HPV52型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 16所示； 檢測HPV53型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 17所示； 檢測HPV56型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 18所示； 檢測HPV58型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 19所示； 檢測HPV59型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:20所示； 檢測HPV66型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:21所示； 檢測HPV68型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:22所示； 檢測HPV73型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO:23所示； 檢測HPV82型分子信標探針，其堿基序列如SEQ ID NO: 24所示； 所述分子信標探針5’端標記熒光基團，3’端標記淬滅基團。2.根據權利要求1所述的用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針，其特征在于，所述熒光基團為FAM、ROX、JOE、HEX和TAMRA中的一種或幾種，所述淬滅基團為BHQ-1、BHQ-2和DABCYL中的一種或幾種。3.根據權利要求1所述的用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針，其特征在于，所述引物還包括SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :6所示序列中的一種或兩種。4.一種利用權利要求1所述引物和探針的高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含序列如SEQ ID NO=1-SEQ ID NO :4所示的引物，以及序列如SEQ ID NO:7—SEQ ID N0:24所示的探針序列中的一種或幾種。5.一種利用權利要求3所述引物和探針的高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于18種高危型人乳頭瘤病毒熒光PCR檢測的引物和探針，所述18種高危型人乳頭瘤病毒是指HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73和HPV82，其特征在于，所述引物為一組通用引物，序列如SEQ?ID?NO：1—SEQ?ID?NO：4所示，所述探針為特異探針，序列如SEQ?ID?NO：7—SEQ?ID?NO：24所示：檢測HPV16型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:7所示；檢測HPV18型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:8所示；檢測HPV26型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:9所示；檢測HPV31型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:10所示；檢測HPV33型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:11所示；檢測HPV35型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:12所示；檢測HPV39型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:13所示；檢測HPV45型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:14所示；檢測HPV51型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:15所示；檢測HPV52型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:16所示；檢測HPV53型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:17所示；檢測HPV56型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:18所示；檢測HPV58型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:19所示；檢測HPV59型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:20所示；檢測HPV66型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:21所示；檢測HPV68型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:22所示；檢測HPV73型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:23所示；檢測HPV82型分子信標探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO:24所示；所述分子信標探針5’端標記熒光基團，3’端標記淬滅基團。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：江春琴，高清云，
申請(專利權)人：英科新創廈門科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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