一種生產酸性蛋白酶的方法技術

本發明專利技術公開了一種生產酸性蛋白酶的方法，所述方法通過用塑料薄膜將曲盤覆蓋，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上，在滅菌過程中，能防止培養基中水分的蒸發、以及營養物質的流失，有利于微生物的繁殖、提高單位酶活力；在滅菌、接種、發酵等的轉移過程中，使培養基不受外界微生物入浸和感染；在發酵的前期，通過塑料薄膜保持曲盤內的濕度，節約了能源，降低了生產成本；發酵前期結束時，菌絲已進入旺盛期繁殖到整個培養料表面并伸展至培養基內，有較好的抗雜菌能力，同時進入產酶高峰期，此時及時去掉覆蓋的塑料薄膜，耙松曲料，提高微生物的吸氧量，促進產酶及酶活力單位的積累，防止雜菌感染，提高產品質量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物發酵領域，特別是涉及采用固態發酵生產酸性蛋白酶的方法。
技術介紹
酸性蛋白酶是一種在酸性(PH=2. 5 4)條件下催化蛋白質，生成多肽和氨基酸的生物催化劑。適用于酸性條件下水解動物、植物蛋白質，被廣泛用于啤酒、果酒、酒精、飼料、皮革等工業。目前，我國主要采用液體深層通風發酵，經硫酸鈉鹽析提取成工業級酸性蛋白酶產品。發酵酶活僅為6000 7000u/ml，酶的發酵水平低，生產原料品種需要較多，能源消耗高，成品酶的酶活保存率差，失活快。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于提出，以提高酶的發酵水平和/或成品酶的保存率。基于上述目的，本專利技術提供的生產酸性蛋白酶的方法包括I)滅菌在曲盤中配置固體培養基；然后用塑料薄膜覆蓋所述曲盤，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上；將曲盤置于高壓滅菌鍋內，進行滅菌； 2)接種滅菌后冷卻，當曲盤中的固體培養基冷卻至25 35°C時，移開所述塑料薄膜，在無菌條件下接入經過種母搖瓶培養和種子罐擴大培養的液體種母，并與所述固體培養基充分混合均勻；用塑料薄膜將所述曲盤再次覆蓋，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上；3)發酵接種完成后，將所述曲盤放入培養室中進行發酵；4)后提取當發酵酶活達到要求后，即培養時間為110 120小時，發酵酶活達 45000 50000u/ml，停止發酵，進入后提取，提取成不同規格的酶制劑產品。可選地，在所述發酵步驟中，培養室的溫度為30±0. 5°C，在培養時間為O 60小時內，培養室內濕度為45 65% ;當菌絲繁殖至布滿整個培養基的表面時，移去所述塑料薄膜，并將曲盤內的物料耙松，同時將培養室的濕度提高至85 90%。較佳地，耙松所述物料后，在30 60分鐘內將培養室的濕度提高至85 90%。可選地，在所述后提取步驟中，停止發酵后，先將發酵成熟的固體酶放入浸泡罐中，加水浸泡，并開啟攪拌，利用攪拌的剪切作用將浸泡液中的固體酶分散、打碎后進行萃取，得到萃取清液，萃取2 3次；再用離心機將萃取清液進行固液分離，并收集離心液 ’最后將所述離心液分別經板框二次過濾、超濾濃縮、精制過濾、添加穩定劑和防腐劑的步驟， 制得液體酸性蛋白酶。可選地，所述液體酸性蛋白酶通過噴霧或沸騰干燥法制成固體酸性蛋白酶。可選地，所述培養基中各種成分的重量體積比為碳源I 5%，營養鹽O.1 O. 5%,氮源 O. 15 O. 55%,麩皮 98. 75 95%。較佳地，所述碳源選自葡萄糖、淀粉糖和麥芽蔗糖中的任意一種。優選地，所述營養鹽選自磷酸二氫鉀、硫酸銨、磷酸氫二鉀、氯化銨、氯化鈣和硫酸鎂中的任意兩種。可選地，所述塑料薄膜選自聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯和聚丙乙烯中的任意一種。從上面所述可以看出，本專利技術提供的生產酸性蛋白酶的方法通過塑料薄膜覆蓋曲盤、用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上，在滅菌過程中，能防止培養基中水分的蒸發、以及營養物質的流失，有利于微生物的繁殖、提高單位酶活力；在滅菌、接種、發酵等的轉移過程中，使培養基不受外界微生物入浸和感染，給酸性蛋白酶固體發酵創造了一個良好的發酵環境；在發酵的前期，通過塑料薄膜保持曲盤內的濕度，這期間培養室不需要增加濕度，節約了能源，降低了生產成本，更重要的是保持培養室空氣干燥和清潔，防止感染雜菌；發酵前期結束時，菌絲已進入旺盛期繁殖到整個培養料表面并伸展至培養基內，有較好的抗雜菌能力，同時進入產酶高峰期，此時及時去掉覆蓋的塑料薄膜，耙松曲料，提高微生物的吸氧量，促進產酶及酶活力單位的積累，快速完成發酵，防止雜菌感染，提高產品質量。具體實施方式 為使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本專利技術進一步詳細說明。作為本專利技術的一個實施例，所述生產蛋白酶的方法包括以下步驟I)種母搖瓶培養將菌種接種于約500 IOOOml的液體培養基內，在溫度約 30±1°C、轉速約250 280r/min的條件下培養約24 28小時。2)種子罐擴大培養將培養成熟的搖瓶種母移接至約500 1000L的種子罐內， 在溫度約30±1°C、轉速約250 280r/min的條件下培養約24 30小時。3)滅菌在約700X500X50的曲盤中配置固體培養基約800 lOOOg，并將培養基撫平；然后用塑料薄膜覆蓋所述曲盤，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上； 將曲盤置于高壓滅菌鍋內，在約O. 08 O. 12Mpa、約110 130°C條件下保持滅菌約30 50min,進行滅菌；4)接種滅菌后冷卻，當曲盤中的固體培養基冷卻至約25 35°C時，移開所述塑料薄膜，在無菌條件下接入上述經過種母搖瓶培養和種子罐擴大培養的液體種母，并與所述固體培養基充分混合均勻；用塑料薄膜將所述曲盤再次覆蓋，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上；5)發酵接種完成后，將所述曲盤放入約30±0. 5°C的培養室中進行發酵；在發酵的前期(即O 60小時)，培養室不加濕，通過塑料薄膜保持曲盤內的濕度，供微生物繁殖；發酵前期結束時，菌絲已進入旺盛期，當菌絲繁殖至布滿整個培養基的表面并伸展至培養基內時，有較好的抗雜菌能力，同時進入產酶高峰期，此時及時移去所述塑料薄膜，并將曲盤內的物料耙松，提高微生物的吸氧量，促進產酶及酶活力單位的積累，快速完成發酵， 防止被雜菌感染，提高產品質量；同時，在約30 60分鐘內將培養室的濕度提高至85 90% ；6)后提取當發酵酶活達到要求后，S卩120 130小時，發酵酶活達40000 50000u/g，這時停止發酵，進入后提取。具體為將發酵成熟的固體酶放入浸泡罐中，加水浸泡，并開啟攪拌，利用攪拌的剪切作用將浸泡液中的固體酶分散、打碎后進行萃取，得到萃取清液，萃取2 3次；再用離心機將萃取清液進行固液分離，并收集離心液；最后將所述離心液分別經板框二次過濾、超濾濃縮、精制過濾、添加穩定劑和防腐劑等步驟，制得液體酸性蛋白酶。可選地，所述液體酸性蛋白酶通過噴霧或沸騰干燥法制成固體酸性蛋白酶。可選地，所述固體培養基中各種成分的重量體積比為碳源I 5%，營養鹽O.1 O. 5%，氮源O. 15 O. 55%，麩皮98. 75 95%。所述液體培養基中各種成分的重量體積比為 碳源I 5%，營養鹽O.1 O. 5%，氮源O. 15 O. 55%，其余為水。可選地，所述培養基中為碳源選自葡萄糖、淀粉糖和麥芽蔗糖中的任意一種。所述培養基中營養鹽選自磷酸二氫鉀、硫酸銨、磷酸氫二鉀、氯化銨、氯化鈣和硫酸鎂中的任意兩種。可選地，所述塑料薄膜選自聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯和聚丙乙烯中的任意一種。需要指出的是，所述培養基各組分的“重量體積比 ”是指培養基中的物料重量與培養基體積的比值。由此可見，本專利技術提供的生產酸性蛋白酶的方法通過塑料薄膜覆蓋曲盤、用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上，在滅菌過程中，能防止培養基中水分的蒸發、以及營養物質的流失，有利于微生物的繁殖、提高單位酶活力；在滅菌、接種、發酵等的轉移過程中，使培養基不受外界微生物入浸和感染，給酸性蛋白酶固體發酵創造了一個良好的發酵環境；在發酵的前期，通過塑料薄膜保持曲盤內的濕度，這期間培養室不需要增加濕度，節約了能源，降低了生產成本，更重要的是保持培養室空氣干燥和清潔，防止本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種生產酸性蛋白酶的方法，其特征在于，所述方法包括：1）滅菌：在曲盤中配置固體培養基；然后用塑料薄膜覆蓋所述曲盤，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上；將曲盤置于高壓滅菌鍋內，進行滅菌；2）接種：滅菌后冷卻，當曲盤中的固體培養基冷卻至25～35℃時，移開所述塑料薄膜，在無菌條件下接入經過種母搖瓶培養和種子罐擴大培養的液體種母，并與所述固體培養基充分混合均勻；用塑料薄膜將所述曲盤再次覆蓋，并用橡膠圈將所述塑料薄膜捆扎于所述曲盤上；3）發酵：接種完成后，將所述曲盤放入培養室中進行發酵；4）后提取：當發酵酶活達到要求后，即培養時間為110～120小時，發酵酶活達45000～50000u/ml，停止發酵，進入后提取，提取成不同規格的酶制劑產品。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李洪兵，朱永明，胡永明，毛強，王小玲，
申請(專利權)人：湖南鴻鷹生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：